本發(fā)明涉及胚胎移植，尤其涉及一種羊非手術采胚方法。

背景技術：

1、胚胎移植技術是現代羊產業(yè)中最具科技水平的快速繁殖技術，近年來該技術主要用于對那些珍貴、稀有品種的繁育上，它在快速擴繁那些由國際上引進的優(yōu)良品種方面發(fā)揮了極大的作用。目前的常規(guī)胚胎移植需要通過外科手術采集胚胎，而外科手術采集胚胎可能會造成供體羊的損傷，使胚胎移植技術應用的風險較大，使得該技術在實際生產上的推廣程度并不高。外科手術采胚往往對種羊生殖系統(tǒng)組織的損傷是不可逆的，直接后果就是喪失繁殖能力，同時對昂貴的種羊的損傷會造成嚴重的經濟損失，也是牧場主難以承受的，從而大大地抑制了該技術的廣泛應用。

2、當前羊胚胎移植技術主要是采用外科手術法采集胚胎，基本過程是：麻醉、腹部剃毛、消毒、手術刀在腹部切開3-5公分、用手指伸進腹部摸到子宮角、拉出兩個子宮角(甚至卵巢)、在子宮角分叉上2-3公分處的一側子宮角上用小型止血鉗頭通捅入造成一個直徑3-5mm的小洞，再插入沖卵管，給沖卵管頭部的氣球充氣3-5ml以便堵住子宮角內管道；在該側子宮角較細端插進套管針注入沖卵液，由沖卵管回收沖卵液，再以同法重復另一側子宮角的采胚，采胚完畢后將子宮角送回腹腔，縫合腹腔腹膜、肌肉及皮膚。這一系列的動作都會因為出血、異物、感染等原因造成羊生殖器官和腹腔的組織粘連，這種粘連和其它操作不當的損傷直接結果就是羊的繁殖能力下降，受孕難，如重復采胚手術會出現未受精卵，即使受精胚胎也會出現胚胎質量嚴重退化，從而使受胎率明顯下降。使用手術采胚技術的最大風險就是供體羊的損傷，往往供體都是貴重的種羊，比如一只進口種羊的費用目前由1.5萬到幾萬不等甚至更高，目前我國能夠實施這項技術團隊的種羊損傷率一般在10-30％之間，這是造成這項技術使用成本過高和不能大量應用的主要原因。

3、供體羊損傷率在被養(yǎng)殖企業(yè)逐漸認識后基本拒絕這種技術的實施。人們開始對減少手術創(chuàng)傷的辦法進行積極研究，目前已經有人設法利用腹腔內窺鏡檢查建立的非手術胚胎回收技術來防止采胚后出現術后粘連，但這種技術仍然存在很多問題：一是該操作仍需要外科手術，而且比現有常規(guī)手術更難、二是胚胎回收率下降。實質上這種方法仍舊離不開外科手術，只是創(chuàng)口小點，并沒有從根本上解決種羊損傷的問題，加之由于沒有開發(fā)出相應的商業(yè)化器械，嚴重限制了其標準化進程，所以短時間內不太可能大規(guī)模應用，手術法收集胚胎仍占主導地位。

技術實現思路

1、有鑒于此，本發(fā)明的主要目的在于提供一種羊非手術采胚方法,可以解決現有技術中采胚過程對羊的損傷問題。

2、為達到上述目的，本發(fā)明的技術方案是這樣實現的：

3、一種羊非手術采胚方法，包括以下步驟：

4、s1.準備工作；

5、s2.胚胎采集：

6、s21.用帶有鋼芯的沖卵管通過陰道插入供體羊子宮頸口，慢慢試探性穿過子宮頸，進入子宮體后，偏向一側使沖卵管進入一側子宮角，繼續(xù)插入深度約2-3cm，在感到阻力增大后，抽出沖卵管中的鋼芯；

7、s22.通過沖卵管注入100ml沖卵液，隨即打開沖卵管回流閥接入胚胎篩，回收沖卵液；

8、s23.重復s22步驟2-3次；

9、s24.輕輕回抽沖卵管，退出一側子宮角，然后將鋼芯插入沖卵管，將沖卵管再插入另一側子宮角，重復進行s22步驟和s23步驟。

10、s3.胚胎采集后處理；

11、s4.胚胎處理。

12、優(yōu)選地，s1準備工作包括：

13、s11.按胚胎移植程序對供體羊進行同期、超排、配種處理，在采胚前一日，停水停食24h；

14、s12.采胚當天對供體羊常規(guī)麻醉、將羊置于常規(guī)胚胎移植手術車上以側臥體態(tài)綁定、用可固定的陰道開膣器插入陰道固定并露出陰道及子宮頸口。

15、優(yōu)選地，所述s3胚胎采集后處理包括：

16、s31.回收完沖卵液后，輕輕抽出沖卵管；

17、s32.撤掉陰道開膣器，松綁供體羊，注射醒麻藥，采胚結束。

18、優(yōu)選地，所述s4胚胎處理包括：

19、s41.將沖卵管中回收的沖卵液接入胚胎篩；

20、s42.通過胚胎篩放掉多余液體，剩余液體15-20ml,將含有胚胎的液體轉入撿胚杯；

21、s43.將撿卵杯置于顯微鏡下搜尋胚胎，用吸胚管將胚胎轉入盛有培養(yǎng)液的集卵杯中；

22、s44.評價胚胎質量，選有效胚胎給受體羊移植。

23、優(yōu)選地，所述步驟s11包括：

24、s111.供體羊同期發(fā)情：在供體羊陰道放置陰道栓；

25、s112.供體羊超排：采用遞減法分8次注射fsh400iu；在注射第7次fsh時，撤栓；

26、s113.供體羊配種：可采用本交或人工授精方式；

27、s114.供體羊采胚前一天停水停食；

28、s115.供體羊采胚時間：配種后第6天，胚胎發(fā)育階段處在桑葚胚期，進行沖卵和采集胚胎。

29、優(yōu)選地，沖卵管為直徑3mm的8#型號。

30、優(yōu)選地，沖卵管為直徑3.5mm的9#型號。

31、優(yōu)選地，沖卵管為直徑4mm的10#型號。

32、優(yōu)選地，沖卵管為直徑4.5mm的11#型號。

33、優(yōu)選地，所述沖卵管鋼芯直徑為2mm。

34、本發(fā)明的一種羊非手術采胚方法，具有如下有益效果：

35、(1)通過陰道進行非手術采胚，一改腹部常規(guī)手術采胚。

36、(2)不再采用外科手術，使沖卵管通過陰道穿過子宮頸口進入子宮體內，最后到達子宮角，用沖卵液沖洗和回收胚胎，不會產生像手術采胚那樣的腹部和生殖器官的粘連，也不會產生傷口感染、傷口不愈合、腹膜縫合不佳常出現的腸瘺等弊端，不會產生應激，供體羊采胚后快速恢復，并能在短時間后再次重復采胚。且可降低外科器械、抗菌藥品、縫合線和外科輔料的使用成本，最大的好處是對貴重供體種羊的零損傷，同時也降低胚胎移植技術實施難度，加快了優(yōu)質高產珍貴品種羊的擴繁速度。

37、(3)在采胚過程中，可以通過供體羊的子宮頸口的松緊度選擇不同型號的沖卵管，可避免對子宮頸口的損傷，使沖卵管準確進入兩側子宮角。

技術特征：

1.一種羊非手術采胚方法，其特征在于，包括以下步驟：

2.根據權利要求1所述的羊非手術采胚方法，其特征在于，所述s1準備工作包括：

3.根據權利要求1所述的羊非手術采胚方法，其特征在于，所述s3胚胎采集后處理包括：

4.根據權利要求1所述的羊非手術采胚方法，其特征在于，所述s4胚胎處理包括：

5.根據權利要求2所述的羊非手術采胚方法，其特征在于，所述步驟s11包括：

6.根據權利要求1所述的羊非手術采胚方法，其特征在于，沖卵管為直徑3mm的8#型號。

7.根據權利要求1所述的羊非手術采胚方法，其特征在于，沖卵管為直徑3.5mm的9#型號。

8.根據權利要求1所述的羊非手術采胚方法，其特征在于，沖卵管為直徑4mm的10#型號。

9.根據權利要求1所述的羊非手術采胚方法，其特征在于，沖卵管為直徑4.5mm的11#型號。

10.根據權利要求1所述的羊非手術采胚方法，其特征在于，所述沖卵管鋼芯直徑為2mm。

技術總結
本發(fā)明公開了一種羊非手術采胚方法，主要包括以下步驟：準備工作，胚胎采集，收尾工作；其中，胚胎采集是將沖卵管通過陰道穿過子宮頸，進入子宮并到達一側子宮角，進行沖卵。本申請所公開的羊非手術采胚方法，不同于目前使用的常規(guī)外科手術從腹部開口采卵，而是通過陰道進入子宮體內沖卵和回收胚胎，可避免對供體羊的損傷，且通過供體羊的子宮頸口的松緊度選擇不同型號的沖卵管，可避免對子宮頸口的損傷，使沖卵管準確進入兩側子宮角。

技術研發(fā)人員：楊崢,楊永祥,李拴軍,胡合琴
受保護的技術使用者：西安艾捷思生物科技有限公司
技術研發(fā)日：
技術公布日：2025/1/6