新酚嗪類抗腫瘤抗生素及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明是一種新的酚嗪類抗腫瘤抗生素，其特點是通過發(fā)酵培養(yǎng)保藏登記號為CCTCCNo.M2013727的一株鏈霉菌菌株（Streptomycessp.）YIMR4，再對其發(fā)酵產物進行分離純化，得到分子式為C25H16N4O4，分子量為436的一種新的抗腫瘤抗生素，經實驗證明，本發(fā)明的抗腫瘤抗生素對人胃癌及人宮頸癌腫瘤細胞有抑制作用。
【專利說明】新酚嗪類抗腫瘤抗生素及其制備方法
【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及一種新的酚嗪類抗腫瘤抗生素及其制備方法，屬于生物【技術領域】。
【背景技術】
[0002]不斷出現(xiàn)的新疾病及病原菌對抗生素耐藥性的增強迫使人們必須加快新藥的研發(fā)，從微生物中發(fā)現(xiàn)高效低毒的天然源新藥先導化合物是近年來研究的熱點之一。由于目前對普通土壤環(huán)境微生物的研究已有較長歷史，從中發(fā)現(xiàn)新穎結構活性化合物的難度越來越大，為了尋找新抗生素先導化合物，人們已將目光轉向棲息于特殊生境的微生物。
[0003]廣泛 存在于植物體內的內生菌由于長期與其宿主植物的共同進化，擁有特殊的代謝途徑，產生活性新化合物的幾率較大，是一類具有較好開發(fā)潛力的新微生物資源。云南西雙版納擁有豐富的藥用植物資源，其中蘊藏著大量的植物內生菌，開展從中尋找活性新先導化合物的研究，為后續(xù)具有自主知識產權的新藥研發(fā)奠定基礎具有重要意義。

【發(fā)明內容】

[0004]本發(fā)明的目的是提供一種不同于已知酚嗪類抗生素結構的新抗腫瘤抗生素，它對人胃癌及人宮頸癌腫瘤細胞有抑制作用。
[0005]本發(fā)明的另一個目的是提供一種新酚嗪類抗腫瘤抗生素的制備方法。
[0006]本發(fā)明的技術方案如下:
一種新酚嗪類抗腫瘤抗生素，本抗生素的產生菌株已保藏在中國典型培養(yǎng)物保藏中心；地址:中國.武漢；保藏日期:2013年12月29日；保藏登記入冊編號為CCTCCN0.M2013727 ;通過培養(yǎng)一株分離自云南西雙版納藥用植物組織內的鏈霉菌菌株{Streptomycess\>.)YIM R4,再對其發(fā)酵產物進行分離純化,得到本抗腫瘤抗生素；本抗腫
瘤抗生素是分子式為C25H16N4O4，分子量為436的化合物，該化合物具有如下結構:
【權利要求】
1.一種新酚嗪類抗腫瘤抗生素的制備方法，其特征是該方法包括如下步驟: (1)菌種液體種子培養(yǎng): ①液體種子培養(yǎng)基的制備:取酵母膏2.0-6.0g、葡萄糖2.0-6.0g、麥芽膏3.0-7.0g、復合維生素2.5~4.5ml、加水至1000ml，pH 7.2，120° C滅菌30min ;②發(fā)酵:將菌株YIM R4接種到滅菌后的培養(yǎng)基中，28° C下于轉速為190-250轉/分鐘的搖床上搖瓶發(fā)酵2天； (2)菌種發(fā)酵培養(yǎng): ①發(fā)酵培養(yǎng)基的制備:取淀粉20.0-30.0g、牛肉膏1.0-5.0g、葡萄糖0.5^1.5g、酵母膏 3.0~7.0g、蛋白胨 1.0~5.0gXaCO3 2.0~6.0g、加水至 1000ml,pH 7.0,120。C 滅菌 30min;②發(fā)酵:將上述方法(I)中得到的菌株HMR4種子液加到滅菌后的發(fā)酵培養(yǎng)基中，加菌種量為發(fā)酵培養(yǎng)基重量的10 %，28° C下于轉速為190-250轉/分鐘的搖床上搖瓶發(fā)酵6~8天； (3)發(fā)酵液處理: ①發(fā)酵液經2500-3500轉/分鐘離心，離心時間為15~25分鐘以等體積乙酸乙醋萃取發(fā)酵上清液3飛次，回收乙酸乙醋，菌絲體用丙酮浸泡并超聲破碎，回收丙酮，合并二部分提取物，得到具有活性部位的棕褐色膏狀物；③進行硅膠柱層析，以三氯甲烷:甲醇40:1至1:1梯度洗脫，收集含有該化合物的組分，回收溶劑，得到粗品一種抗腫瘤抗生素；④將粗品一種抗腫瘤抗生素依次進行甲醇凝膠及三氯甲烷:甲醇30:1硅膠柱層析，回收溶劑，得到一種抗腫瘤抗生素較純品；⑤將一種抗腫瘤抗生素較純品進行甲醇凝膠柱層析，回收溶劑，得到一種抗腫瘤抗生素純品，所述抗腫瘤抗生素的結構為:


2.根據權利要求1所述的一種新酚嗪類抗腫瘤抗生素的制備方法，其特征是所述的酵母膏為4.0g、葡萄糖為4.0g、麥芽膏為5.0g、復合維生素為3.5ml。
3.根據權利要求1所述的一種新酚嗪類抗腫瘤抗生素的制備方法，其特征是所述的淀粉為24.0g、牛肉膏為3.0g、葡萄糖為l.0g、酵母膏為5.0g、蛋白胨為3.0g、CaCO3為4.0g。
4.根據權利要求1所述的一種新酚嗪類抗腫瘤抗生素的制備方法，其特征是所述的搖床轉數為220轉/分鐘，所述發(fā)酵時間為7天。
【文檔編號】A61P35/00GK103993050SQ201410195152
【公開日】2014年8月20日 申請日期:2014年5月9日 優(yōu)先權日:2014年5月9日
【發(fā)明者】李一青, 戎賀, 趙立興, 徐麗華 申請人:云南大學