一種去毒何首烏提取物及其制備方法
【專利摘要】一種去毒何首烏提取物及其制備方法，屬于中藥【技術(shù)領(lǐng)域】。按照何首烏粗粉:溶劑=1:4～20（重量）的比例，回流提取2～3次，每次1～4小時，濾液回收溶劑，得到流浸膏，其中所述溶劑為甲醇或乙醇，濃度為30～80%；將上述何首烏流浸膏加水稀釋，何首烏流浸膏:水=1:4～10（重量），稀釋液經(jīng)大孔吸附樹脂柱富集，收集過柱液、水洗液以及乙醇洗脫液，合并以上溶液，減壓回收溶劑，得到濃縮液，濃縮液干燥，即得到去毒何首烏提取物。本發(fā)明應(yīng)用大孔吸附樹脂分離技術(shù)，有效去除何首烏中蒽醌類成分，制成無毒何首烏提取物，該方法簡單，適合工業(yè)化生產(chǎn)。
【專利說明】一種去毒何首烏提取物及其制備方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種去毒何首烏提取物，具體涉及去毒何首烏提取物及其制備方法， 屬于中藥【技術(shù)領(lǐng)域】。 技術(shù)背景
[0002] 何首烏為寥科植物首烏（Polygonum multiflorum Thunb.)千燥塊根，味苦、濕，性 溫。歸肝、心、腎經(jīng)，具有補肝腎、益精血、烏須發(fā)、強(qiáng)筋骨之功效，是中藥常用補益藥?，F(xiàn)代 藥理研究發(fā)現(xiàn)何首烏具有延緩衰老，益智，提高DNA修復(fù)功能，延長壽命，降低膽固醇以及 改善脂肪代謝等藥理作用。臨床上用于治療高血脂、脫發(fā)以及久病體虛等癥。然而近年來， 國內(nèi)外相繼出現(xiàn)了多起何首烏的毒性與不良反應(yīng)的報道[1、陳盛君.何首烏肝損傷不良反 應(yīng)信息分析及其毒性機(jī)制研究進(jìn)展[J]·中國醫(yī)院藥學(xué)雜志， 2〇13,〇7:573-577·和2、練祥， 柯婷婷，胡愛榮.何首烏及其制劑致藥物性肝損傷52例臨床分析.中華中醫(yī)藥學(xué)刊.2013， 31 (5) : 1133-11：Μ·]，引起了人們對何首烏毒性的重視。研究發(fā)現(xiàn)何首烏毒性來自于其中 蒽醌類化學(xué)成分，長時間或大劑量服食蒽醌類成分會導(dǎo)致藥物性肝損傷（drug-induced liver injury，DILI)。為保證用藥安全，滿足人們對健康保健的需求，本發(fā)明利用現(xiàn)代提取 分離技術(shù)，制備去毒何首烏提取物，該發(fā)明成果對于何首烏的開發(fā)應(yīng)用具有廣闊的前景和 現(xiàn)實意義。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 本發(fā)明的目的是制備去毒何首烏提取物。
[0004] -種去毒何首烏提取物的制備方法，其特征在于，其制備方法如下：
[0005] (1)將何首烏藥材粉碎成粗粉，按照何首烏粗粉：溶劑=1:4?20 (重量）的比例， 回流提取2?3次，每次1?4小時，濾液回收溶劑，得到流浸膏，其中所述溶劑為甲醇或乙 醇，濃度為30?80%;
[0006] (2)將上述何首烏流浸膏加水稀釋，何首烏流浸膏：水=1:4?10 (重量)，稀釋液 經(jīng)大孔吸附樹脂柱富集，收集過柱液、水洗液以及乙醇洗脫液，合并以上溶液，減壓回收溶 劑，得到濃縮液，濃縮液干燥，即得到去毒何首烏提取物。
[0007] 上述步驟（1)中的何首烏藥材為寥科植物首烏（Polygonum multiflorum Thunb.) 千燥塊根。
[0008] 優(yōu)選步驟（1)每lmL流浸膏相對于原藥材lg。
[0009] 上述步驟（2)中所述大孔吸附樹脂為非極性或弱極性大孔吸附樹脂，優(yōu)選為D101 或AB-8型大孔吸附樹脂。
[0010] 上述步驟（2)中所述大孔吸附樹脂純化條件為：藥材量與樹脂比（g:g)為1:1? 5,樹脂層析柱徑尚比1:3?9,上樣流速0. 1?lmL/min/g樹脂，然后分別用去尚子水和 20?60wt%乙醇水溶液洗脫，其中去離子水的用量為2?5倍體積的樹脂，乙醇水溶液的用 量為5?10倍樹脂體積，洗脫流速為1?3mL/min/g樹脂。
[0011] 上述步驟（2)中所述大孔吸附樹脂純化優(yōu)選條件為藥材量與樹脂比（g:g)為1:2， 樹脂層析柱徑高比1:9,上樣流速0. lmL/min/g樹脂，然后用去離子水3倍量和40wt%乙醇 8倍量洗脫，洗脫流速為2mL/min/g樹脂。
[0012] 上述步驟（2)中干燥方法為減壓千燥、噴霧干燥或冷凍干燥。
[0013] 采用高效液相進(jìn)行檢測，檢測條件：色譜柱為0DS色譜柱；流動相為甲醇⑶-水 (A)，梯度洗脫（〇 ?2min，25%B ?35%B ;2 ?lOmin，35%B ?50%B ; 10 ?15min，50%B ?70%B ; 15 ?20min，70%B ?90%B)，檢測波長為 254 或 280nm。
[0014] 本發(fā)明方法與現(xiàn)有技術(shù)相比具有以下有益效果：
[0015] 1)本發(fā)明方法為現(xiàn)代提取分離技術(shù)，分離效果好，操作性強(qiáng)，適合工業(yè)化生產(chǎn)。
[0016] 2)何首烏毒性成分蒽醌去除率可達(dá)80%以上。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0017] 圖1蒽醌對照品HPLC色譜圖；
[0018] 圖2為實施例1步驟（1)提取液HPLC色譜圖；
[0019] 圖3為實施例1去毒何首烏提取物HPLC色譜圖。

【具體實施方式】
[0020] 下面結(jié)合實施例對本發(fā)明做進(jìn)一步說明，但本發(fā)明并不限于以下實施例。
[0021] 實施例1
[0022] (1)將何首烏藥材粉碎成粗粉，稱取何首烏粗粉lOOOg，加入50%乙醇15倍量回流 提取2次，每次1. 5小時，合并濾液，減壓回收乙醇至lOOOmL,加去離子水5000mL，混勻，備 用。
[0023] (2)取AB-S型大孔吸附樹脂2000g，按照大孔吸附樹脂預(yù)處理方法處理完畢后裝 入層析柱，層析柱徑高比1:9,將（1)中藥液加入層析柱，上樣流速為1. OmL/min/g樹脂，同 時收集過柱液，待藥液流干后，加入3倍量樹脂體積的去離子水洗洗脫，洗脫流速為2mL/ min/g樹脂，收集水洗脫液，然后再用30%乙醇8倍量洗脫，2mL/min/g樹脂，收集30%乙醇 洗脫液。
[0024] (3)將過柱液、水洗液以及3〇%乙醇洗脫液合并，減壓回收溶劑，得到濃縮液，濃縮 液經(jīng)減壓千燥，即得到去毒何首烏提取物183g。
[0025]將實施例1得到的提取物進(jìn)行高效液相檢測，以純化前后蒽醌色譜峰總峰面積計 算，去毒何首烏提取物中蒽醌類化學(xué)成分含量為純化前的15. 77%，去除率達(dá)到84. 23%。 [0026] 實施例2
[0027] (1)將何首烏藥材粉碎成粗粉，稱取何首烏粗粉100g，加入40%乙醇15倍量回流 提取2次，每次1小時，合并濾液，減壓回收乙醇至lOOmL，加去離子水400mL，混勻，備用。 [0028] (2)取D101型大孔吸附樹脂l〇〇g，按照大孔吸附樹脂預(yù)處理方法處理完畢后裝 入層析柱，層析柱徑局比1:6,將（1)中藥液加入層析柱，上樣流速為〇. 5mL/min/g樹脂，同 時收集過柱液，待藥液流千后，加入2倍量樹脂體積的去離子水洗洗脫，洗脫流速為2. 5mL/ min/g樹脂，收集水洗脫液，然后再用5〇%乙醇8倍量洗脫，2. 5mL/min/g樹脂，收集50%乙 醇洗脫液。
[0029] (3)將過柱液、水洗液以及50%乙醇洗脫液合并，減壓回收溶劑，得到濃縮液，濃縮 液經(jīng)減壓千燥，即得到去毒何首烏提取物20. 08g。提取物進(jìn)行高效液相檢測，以純化前后蒽 醌色譜峰總峰面積計算，蒽醌去除率不低于82%。
[0030] 下面試驗進(jìn)一步說明本發(fā)明：
[0031] 檢測方法：高效液相色譜法
[0032] 檢測條件：色譜柱為Hypersil 0DS (4. 6X250mm，5ym);流動相為甲醇（B)-水 (A)，梯度洗脫（0 ?2min，25%B ?35%B ;2 ?lOmin，35%B ?50%B ; 10 ?15min，50%B ?70%B ; 15 ?20min，7〇%B ?9〇%B)，檢測波長為 280nm。
[0033] 蒽醌對照品：大黃素、大黃酸、大黃酚、蘆薈大黃素。
【權(quán)利要求】
1. 一種去毒何首烏提取物的制備方法，其特征在于，包括以下步驟： ((1)將何首烏藥材粉碎成粗粉，按照何首烏粗粉：溶劑=1:4?20 (重量）的比例，回 流提取2?3次，每次1?4小時，濾液回收溶劑，得到流浸膏，其中所述溶劑為甲醇或乙醇， 濃度為30?80% ; (2)將上述何首烏流浸膏加水稀釋，何首烏流浸膏：水=1:4?1〇 (重量)，稀釋液經(jīng)大 孔吸附樹脂柱富集，收集過柱液、水洗液以及乙醇洗脫液，合并以上溶液，減壓回收溶劑，得 到濃縮液，濃縮液干燥，即得到去毒何首烏提取物。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其特征在于，步驟（1)中所述何首烏藥材為寥科植物首烏 (Polygonum multiflorum Thunb.)千燥塊根。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其特征在于，步驟（2沖所述大孔吸附樹脂為非極性或弱極 性大孔吸附樹脂。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其特征在于，所述大孔吸附樹脂為D101或AB-8型大孔吸附 樹脂。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其特征在于，步驟（1)每lmL流浸膏相對于原藥材lg。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其特征在于，步驟（2)中大孔吸附樹脂純化條件為：藥材量 與樹脂比（g:g)為1:1?5,樹脂層析柱徑高比1:3?9,上樣流速0· 1?lmL/min/g樹脂， 然后分別用去離子水和20?60wt%乙醇水溶液洗脫，其中去離子水的用量為2?5倍體積 的樹脂，乙醇水溶液的用量為5?10倍樹脂體積，洗脫流速為1?3mL/min/g樹脂。
7. 根據(jù)權(quán)利要求6的方法，其特征在于，步驟（2)中大孔吸附樹脂純化優(yōu)選條件為：藥 材量與樹脂比（g:g)為I:2,樹脂層析柱徑高比1:9,上樣流速0. lmL/min/g樹脂，然后用去 離子水3倍量和40wt%乙醇8倍量洗脫，洗脫流速為2mL/min/g樹脂。
8. 根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其特征在于，步驟（2)中干燥方法為減壓干燥、噴霧干燥或 冷凍干燥。
9. 按照權(quán)利要求1_8所述的任一方法得到的去毒何首烏提取物。
10. 按照權(quán)利要求1-8所述的任一方法得到的去毒何首烏提取物的檢測方法，其特征 在于，采用高效液相法，檢測條件：色譜柱為0DS色譜柱；流動相為甲醇（B)-水（a)，梯度 洗脫（0 ?2min，25%B ?35%B ;2 ?10min，35%B ~ 50%B ;10 ?15min,50%B ?70%B ;15 ? 2〇min，70%B ?90%B)，檢測波長為 254 或 280nm。
【文檔編號】A61K36/704GK104189103SQ201410115293
【公開日】2014年12月10日 申請日期:2014年3月25日 優(yōu)先權(quán)日:2014年3月25日
【發(fā)明者】李霄, 王小虎, 李澤琳, 鄧振濤 申請人:北京工業(yè)大學(xué)