專利名稱：一種大分子-順鉑復(fù)合物及其制備方法與應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種大分子-順鉬復(fù)合物，并提供該復(fù)合物的制備方法與應(yīng)用，屬于抗癌藥物的制備領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
癌癥己成為人類第二大致死病因，大量的人力、物力和財力已被投入到抗癌藥物的開發(fā)上。目前世界上的抗癌藥物己經(jīng)超過上百種，在這些抗癌藥主要有順鉬、紫杉醇、阿霉素和喜樹堿等。這些用于臨床治療的大多數(shù)抗腫瘤藥物對組織都具有很高的毒副作用、 且溶解度低、難以給藥，副作用多等缺陷，因此在臨床使用上有很大的局限性。
順鉬[cis-dichlorodiammin印Iatinum(II)，CDDP]為重金屬絡(luò)合物，在臨床上廣泛用于多種惡性腫瘤的治療，是治療癌癥的首選藥物之一，屬周期非特異性抗癌藥，抗癌譜廣。順鉬殺傷腫瘤細(xì)胞的作用原理是與DNA交聯(lián)連接形成相當(dāng)穩(wěn)定的復(fù)合物鎖住DNA，造成DNA的損傷，破壞DNA的復(fù)制、轉(zhuǎn)錄，從而抑制DNA和RNA的合成。但因其溶解度低、無靶向性、在體內(nèi)很快會和蛋白結(jié)合而失效，且鉬半衰期很長，體內(nèi)毒性大，尤其具有腎毒性、神經(jīng)毒性、骨髓抑制和嚴(yán)重的胃腸道反應(yīng)，因此在臨床應(yīng)用上仍受到很大限制。
為解決上述缺陷，有研究將其載于高分子載體上，使得順鉬可以靶向性輸送到腫瘤組織(即被動靶向)，目前，國外報道的幾種載體有微球體、納米微粒、脂質(zhì)體和微型膠囊等，它們均極大地提高了藥物的生物利用率，有效地降低藥物的毒副作用，但其仍存在穩(wěn)定性差，藥物無明顯緩釋性等缺點(diǎn)。
聚氨基酸是一種水溶性，生物降解，不含毒性的生物高分子。目前，聚氨基酸在醫(yī)藥領(lǐng)域中的應(yīng)用較多，因其具有良好的生物親和性和生物降解性，作為藥物載體，可實(shí)現(xiàn)藥物的緩釋性、靶向性，提高藥物水溶性，降低藥物毒副作用，從而可以提高藥物的療效、 擴(kuò)大藥物的使用范圍。葉海峰等(Haifeng Ye, Li Jin, Rongzhang Hu, et al.Poly(y , L-glutamic acid)-cisplatin conjugate effectively inhibits human breast tumor xenografted in nude mice [J]. Biomaterials, 2006, 27 (35) :5958-5965.)以 Y _ 聚谷氨酸作為載體連接順鉬，制備得聚谷氨酸-順鉬復(fù)合物；李文娟等(李文娟，馮震，薛曉敏，等。 Y-聚谷氨酸天冬氨酸-順鉬復(fù)合物的制備及其生物活性[J]中國醫(yī)藥生物技術(shù)，2010， 5(2) =98-104.)以Y-聚谷氨酸天冬氨酸作為載體連接順鉬，制備得Y-聚谷氨酸天冬氨酸-順鉬復(fù)合物，兩者均得到較好的結(jié)果，順鉬的水溶性和毒性得到大大改善，但前者僅以小分子Y-聚谷氨酸作為載體，制備得的復(fù)合物載藥量僅為9 12%，存在載藥量低、載體用量大和釋放率低的缺點(diǎn)，后者雖然有所改進(jìn)，但復(fù)合物的載藥量和順鉬的有效結(jié)合率仍較低，其順鉬有效結(jié)合率僅為30%。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的之一在于提供一種由聚氨基酸經(jīng)小分子酸修飾后作為載體與順鉬通過離子鍵結(jié)合形成一種大分子-順鉬復(fù)合物，這樣改善順鉬水溶性，降低其毒性的同時也增大了復(fù)合物的載藥量和順鉬的有效結(jié)合率，并且改善了復(fù)合物中順鉬的釋放行為。
本發(fā)明目的之二在于提供一種簡單易行，安全有效的新型載體聚合物——聚氨基酸衍生物的制備方法。
本發(fā)明目的之三在于提供一種成本低廉，操作簡單的大分子-順鉬復(fù)合物的制備方法。
本發(fā)明目的之四在于提供該大分子-順鉬復(fù)合物在抗腫瘤領(lǐng)域的應(yīng)用。
因此，本發(fā)明提供一種大分子-順鉬復(fù)合物，其特征是，所述復(fù)合物由聚氨基酸用小分子修飾劑修飾得到聚氨基酸衍生物，再通過離子鍵與順鉬結(jié)合而得到，
其中所述的聚氨基酸包含但不局限于Y-聚谷氨酸(Y-PGA)、ε-聚賴氨酸 (ε "PL)、聚天冬氨酸(PASP)和聚精氨酸(PAA)，優(yōu)選Y -聚谷氨酸(Y -PGA)和ε -聚賴氨酸(ε-PL)，其結(jié)構(gòu)通式分別為
ηCOOH
其中，Y -PGA與ε -PL分子量為5 60KDa。
其中所述的小分子修飾劑為含兩個以上羧基的酸或該酸的酯，主要包含L-谷氨酸、L-天冬氨酸、檸檬酸、氨基丙二酸、丙三酸等，以最常見為例，其結(jié)構(gòu)式可以表示如下，但不限于此，其中η = 0、1、2、3。
hooc^LN^JT^COOHCOOHOHhooc'^LV^V^COOHCOOHCOOHH7NCOOHΗ,Ν-H2l /COOC2H5 C fCHn COOC2H5OHHOOC
COOHCOOH
Y-PGA的側(cè)鏈羧基既可以用含游離羥基的酸修飾，也可以用含游離氨基的酸修飾，而ε "PL的側(cè)鏈氨基因其需與游離羧基反應(yīng)，因此，上述含三個以上游離羧基的修飾劑均可用來修飾ε-PL。
本發(fā)明中提供的經(jīng)小分子修飾劑修飾后聚氨基酸的典型結(jié)構(gòu)式表示如下，以 α-羥基多酸修飾Y-PGA和多酸修飾8^^為例，但不限于此，其中111 = 0、1、2、3。
權(quán)利要求
1.一種大分子-順鉬復(fù)合物，其特征是，所述復(fù)合物由聚氨基酸用小分子修飾劑修飾得到聚氨基酸衍生物，再通過離子鍵與順鉬結(jié)合而得到，其中聚氨基酸包含但不局限于 Y -聚谷氨酸、ε -聚賴氨酸、聚天冬氨酸、聚精氨酸，其中小分子修飾劑為含兩個以上羧基的酸或該酸的酯，包含L-谷氨酸、L-天冬氨酸、檸檬酸、氨基丙二酸、丙三酸；所述復(fù)合物的分子量為40 70KDa。
2.如權(quán)利要求1中所述的復(fù)合物，其特征是順鉬與修飾后的聚氨基酸有多種結(jié)合方式，可以是成環(huán)結(jié)合，也可以是開環(huán)結(jié)合，其結(jié)合主要是通過順鉬中的氯離子與聚氨基酸衍生物的活性羧基反應(yīng)來實(shí)現(xiàn)的。
3.如權(quán)利要求1中所述的復(fù)合物，其特征是選自以下復(fù)合物 Y-聚谷氨酸檸檬酸-順鉬復(fù)合物；Y-聚谷氨酸天冬氨酸-順鉬復(fù)合物； Y-聚谷氨酸氨基丙二酸順鉬復(fù)合物； ε-聚賴氨酸檸檬酸順鉬復(fù)合物； ε-聚賴氨酸丙三酸順鉬復(fù)合物； 聚天冬氨酸檸檬酸-順鉬復(fù)合物； 聚天冬氨酸谷氨酸順鉬復(fù)合物； 聚天冬氨酸氨基丙二酸順鉬復(fù)合物； 聚精氨酸檸檬酸順鉬復(fù)合物； 聚精氨酸丙三酸順鉬復(fù)合物。
4.權(quán)利要求1的復(fù)合物的制備方法，其特征是其中聚氨基酸衍生物的制備方法包括以下步驟(1)將聚氨基酸溶于反應(yīng)溶劑中，在多肽縮合劑的作用下與小分子修飾劑進(jìn)行反應(yīng)， 通過聚氨基酸側(cè)鏈羧基或氨基與小分子修飾劑中游離羥基、氨基或羧基的酯化或酰胺化作用，將小分子修飾劑連接于聚氨基酸上；(2)透析除去小分子物質(zhì)，冷凍干燥得聚氨基酸衍生物。
5.如權(quán)利要求4中所述的制備方法，其特征是步驟(1)的反應(yīng)溶劑可以是惰性有機(jī)溶劑，如DMSO，DMF或環(huán)己烷，也可以是純水，優(yōu)選純水做反應(yīng)溶劑；參與反應(yīng)的多肽縮合劑可以是1-乙基-(3- 二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(EDCI)，二環(huán)己基碳化二亞胺(DCC) ,N, N'-羰基二咪唑(⑶I)，N-羥基硫代琥珀酰亞胺(NHSS)，1-羥基-苯并-三氮唑(HOBT)，4- 二甲氨基吡啶(DMAP)，優(yōu)選為EDCI與NHSS組合參與反應(yīng)；小分子修飾劑與聚氨基酸(-C00H或-NH2)的摩爾比為0.5 1 5 1，優(yōu)選比例為1 1 ；反應(yīng)時間為 6h Mh，優(yōu)選反應(yīng)時間為Mh ；反應(yīng)pH為7. 0 9. 0，優(yōu)選為7. 5 8. 5。
6.權(quán)利要求1中所述復(fù)合物的制備方法，該方法包括(1)將順鉬與硝酸銀在純水中反應(yīng)，對順鉬進(jìn)行充分水化；(2)將順鉬與硝酸銀的反應(yīng)液離心取上清，得水化后的順鉬；(3)將聚氨基酸衍生物溶于水化后的順鉬溶液中，調(diào)節(jié)pH至7.0 9. 0，通過離子鍵將順鉬連于聚氨基酸衍生物上；(4)透析除去未反應(yīng)的順鉬，冷凍干燥即得。
7.如權(quán)利要求6中所述復(fù)合物的制備方法，其特征是該方法中步驟(1)提供的順鉬水化反應(yīng)，順鉬與硝酸銀的摩爾比例為1 2;反應(yīng)時間為12 36h，優(yōu)選Mh;該反應(yīng)需避光。
8.如權(quán)利要求6中所述復(fù)合物的制備方法，其特征是所述步驟(3)中順鉬與聚氨基酸衍生物的結(jié)合方式是離子鍵結(jié)合，順鉬與載體聚合物的摩爾比為1 1 5 1，優(yōu)選為 5 1 ；該反應(yīng)的pH為7.0 9.0，優(yōu)選為7. 5 8.0 ；該反應(yīng)的反應(yīng)溫度為25°C 37°C，優(yōu)選為25°C ；該反應(yīng)的反應(yīng)時間為M 48h，優(yōu)選為Mh。
9.如權(quán)利要求6中所述復(fù)合物的制備方法，其特征是所述步驟中提供的復(fù)合物的純化方法既可以采用透析袋透析純化，也可以采用離心濃縮管純化。
10.權(quán)利要求1中所述的復(fù)合物在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種大分子-順鉑復(fù)合物及其制備方法與應(yīng)用，本發(fā)明以聚氨基酸為原料，通過降解或純化得到分子量合適的聚氨基酸載體，先用修飾劑小分子酸與其側(cè)鏈活性基團(tuán)進(jìn)行反應(yīng)，對其結(jié)構(gòu)進(jìn)行修飾，再把順鉑巧妙地連接到該聚合物上制備得載藥復(fù)合物，并對該載藥復(fù)合物的性質(zhì)進(jìn)行了研究，結(jié)果表明其性質(zhì)明顯優(yōu)于現(xiàn)有報道，所制得復(fù)合物體內(nèi)毒性低且無溶血性。
文檔編號A61K33/24GK102499986SQ20111034786
公開日2012年6月20日 申請日期2011年11月7日 優(yōu)先權(quán)日2011年11月7日
發(fā)明者吳建梅, 涂家生, 蔣薇薇 申請人:南京泛太化工醫(yī)藥研究所