專利名稱：一種山慈菇提取物的提取方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及中藥提取技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及一種山慈菇提取物的提取方法。
背景技術(shù)：
山慈燕為蘭科植物杜胃$蘭Cremastra appendiculata (D. Don) Makino、獨蒜蘭Pleione bulbocodioides (Franch. ) Rolfe 和云南獨蒜蘭P. yunnanensis Rolfe 的干燥假鱗莖，具清熱解毒、化痰散結(jié)等功效，常用于癰腫疔毒，瘰疬結(jié)核，淋巴結(jié)結(jié)核，蛇蟲叮咬等癥狀的治療，廣泛分布于長江流域以南地區(qū)及山西、陜西、甘肅等地。山慈菇作為中醫(yī)抗癌中藥已得到廣泛應用，特別是近年來在臨床上對乳腺癌、食道癌、胃癌、白血病等惡性腫·瘤表現(xiàn)出的良好療效而備受關(guān)注。但就當前山慈菇的開發(fā)利用來看，臨床上主要以中藥復方的形式應用，其有效成分及藥理作用尚不十分明確，嚴重限制了山慈菇的深度開發(fā)及市場潛能的發(fā)揮。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是克服目前山慈菇在應用于藥物時有效成分及藥理作用不十分明確的缺陷，提供一種山慈菇提取物的提取方法，明確了各提取部位的藥理作用，可將提取物應用于制藥以提高藥效、減小服用劑量。為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用如下的技術(shù)方案
本發(fā)明山慈菇提取物的提取方法，包括如下步驟
(1)粗提取山慈菇，用乙醇提取，濾液濃縮得粗提物浸膏；
(2)萃取將粗提物浸膏用蒸餾水稀釋，稀釋液依次用氯仿和乙酸乙酯萃取，萃取液分別濃縮得氯仿層浸膏和乙酸乙酯層浸膏，該浸膏即為山慈菇提取物。優(yōu)選的，上述提取方法為
(1)粗提取山慈菇，粉碎，用5 15重量倍75 100%乙醇在室溫下浸提I 4次，然后再用5 15重量倍40 75%乙醇在室溫下浸提I 4次，殘渣用5 10重量倍50 95%乙醇于50 90°C水浴回流提取I 4次，合并所有提取液，過濾，濃縮，得粗提物浸膏；
(2)萃取將粗提物浸膏用蒸餾水混懸均勻，用氯仿萃取I 7次，合并萃取液，減壓濃縮得氯仿層浸膏，萃余物再用乙酸乙酯萃取I 7次，合并萃取液，減壓濃縮得乙酸乙酯層浸膏，該浸膏即為山慈菇提取物。最佳的，前述山慈菇提取物的提取方法為
(1)粗提取山慈菇，粉碎，用12重量倍95%乙醇在室溫下浸提2次，然后再用12重量倍75%乙醇在室溫下浸提2次，每次48小時，殘渣用8重量倍75%乙醇于70°C水浴回流提取2次，每次2h，合并所有提取液，過濾，減壓濃縮至無醇味，得粗提物浸膏；
(2)萃取將粗提物浸膏用蒸餾水稀釋至室溫下相對密度I.I I. 2，混懸均勻，用氯仿等體積萃取5次，合并萃取液，減壓濃縮得氯仿層浸膏，萃余物再用乙酸乙酯等體積萃取5次，合并萃取液，減壓濃縮得乙酸乙酯層浸膏，該浸膏即為山慈菇提取物。
申請人對山慈菇提取物的化學成分進行了系統(tǒng)預試和體外抗腫瘤活性驗證，具體如下
一、提取物化學成分系統(tǒng)預試
I、提取
山慈菇干燥假鱗莖30kg，粉碎，用體積分數(shù)為95%及75%的乙醇分別冷浸兩次，每次48h，最后再以75%乙醇，70°C水浴回流提取2次，每次2h，合并各次提取液，過濾，減壓濃縮至無醇味，得到粗提物總浸膏約2. Okgo取粗提物總浸膏，加入適量蒸餾水均勻混懸，測試其相對密度在I. I I. 2之間為宜，再分別以氯仿、乙酸乙酯反復等體積萃取5次，合并各次萃取液，減壓濃縮，得到氯仿層 部位浸膏約150g，乙酸乙酯層部位浸膏約IOOg ;剩余部分再結(jié)合高濃度醇沉法(95%乙醇)得到醇層和水層部位浸膏。2、山慈菇提取物化學成分系統(tǒng)預試
同一天然藥物中至少含有上百種化學成分，在著手研究山慈菇的化學成分時，有必要大致知曉其主要化學成分在不同極性段中的分布情況，這樣才便于在以后的研究中根據(jù)各類化學成分的性質(zhì)選擇合理的研究方法。2. I供試樣品
A 50%乙醇-山慈菇粗提物浸膏溶液，B 50%乙醇-山慈菇水層浸膏溶液，C 90%乙醇-山慈菇醇層浸膏溶液，D :甲醇-山慈菇乙酸乙酯層浸膏溶液，E :氯仿-甲醇(1:1)-山慈燕氯仿層浸膏溶液。2. 2系統(tǒng)預試方法
山慈菇提取物化學成分的系統(tǒng)預試，主要采用試管法對山慈菇粗提物以及萃取后得到水層、醇層、乙酸乙酯層及氯仿層部位進行定性鑒定，具體方法見表I。表I山慈燕化學成分定性檢測
權(quán)利要求
1.一種山慈菇提取物的提取方法，包括如下步驟 (1)粗提取山慈菇，用乙醇提取，濾液濃縮得粗提物浸膏； (2)萃取將粗提物浸膏用蒸餾水稀釋，稀釋液依次用氯仿和乙酸乙酯萃取，萃取液分別濃縮得氯仿層浸膏和乙酸乙酯層浸膏，該浸膏即為山慈菇提取物。
2.按照權(quán)利要求I所述山慈菇提取物的提取方法，其特征在于 (1)粗提取山慈菇，粉碎，用5 15重量倍75 100%乙醇在室溫下浸提I 4次，然后再用5 15重量倍40 75%乙醇在室溫下浸提I 4次，殘渣用5 10重量倍50 95%乙醇于50 90°C水浴回流提取I 4次，合并所有提取液，過濾，濃縮，得粗提物浸膏； (2)萃取將粗提物浸膏用蒸餾水混懸均勻，用氯仿萃取I 7次，合并萃取液，減壓濃縮得氯仿層浸膏，萃余物再用乙酸乙酯萃取I 7次，合并萃取液，減壓濃縮得乙酸乙酯層浸膏，該浸膏即為山慈菇提取物。
3.按照權(quán)利要求2所述山慈菇提取物的提取方法，其特征在于 (1)粗提取山慈菇，粉碎，用12重量倍95%乙醇在室溫下浸提2次，然后再用12重量倍75%乙醇在室溫下浸提2次，每次48小時，殘渣用8重量倍75%乙醇于70°C水浴回流提取2次，每次2h，合并所有提取液，過濾，減壓濃縮至無醇味，得粗提物浸膏； (2)萃取將粗提物浸膏用蒸餾水稀釋至室溫下相對密度I.I I. 2，混懸均勻，用氯仿等體積萃取5次，合并萃取液，減壓濃縮得氯仿層浸膏，萃余物再用乙酸乙酯等體積萃取5次，合并萃取液，減壓濃縮得乙酸乙酯層浸膏，該浸膏即為山慈菇提取物。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種山慈菇提取物的提取方法，(1)粗提取山慈菇，用乙醇提取，濾液濃縮得粗提物浸膏；(2)萃取將粗提物浸膏用蒸餾水稀釋，稀釋液依次用氯仿和乙酸乙酯萃取，萃取液分別濃縮得氯仿層浸膏和乙酸乙酯層浸膏，該浸膏即為山慈菇提取物，實驗證明，山慈菇的氯仿層萃取物和乙酸乙酯層萃取物對腫瘤細胞具有較好的抑制活性，可取代山慈菇原藥材而用于制備抗腫瘤藥物，以提高療效、減小服用量。
文檔編號A61P35/00GK102895523SQ20111021006
公開日2013年1月30日 申請日期2011年7月26日 優(yōu)先權(quán)日2011年7月26日
發(fā)明者周英, 黃波, 郭東貴, 王慧娟, 錢利安 申請人:貴州大學