專利名稱：一種吡拉西坦腦蛋白水解物片中腦蛋白水解物的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種吡拉西坦腦蛋白水解物片中腦蛋白水解物的制備方法，具體地說，涉及一種由從除人以外的哺乳動(dòng)物腦組織中提取的含有特異性多肽以及包括游離賴氨酸和游離谷氨酸在內(nèi)的多種氨基酸的腦蛋白水解物，屬于生物制劑領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
腦組織中的游離氨基酸含量以谷氨酸為最高，其次是?；撬幔倬褪翘於彼?。谷氨酸是大腦內(nèi)主要興奮性神經(jīng)遞質(zhì)。腦損傷可能導(dǎo)致腦組織離子失衡，引起與谷氨酸和其他興奮性氨基酸相關(guān)的興奮毒性級(jí)聯(lián)反應(yīng)，并導(dǎo)致最初損傷部位周圍腦組織的神經(jīng)元死亡。賴氨酸是八種必需氨基酸之一，它在生物機(jī)體的代謝中起著重要的作用，賴氨酸缺乏會(huì)引起蛋白質(zhì)功能障礙，影響生長(zhǎng)發(fā)育，導(dǎo)致生長(zhǎng)障礙。因植物性蛋白中普遍缺乏賴氨酸，故營(yíng)養(yǎng)學(xué)家稱之為“第一必須氨基酸”。賴氨酸在醫(yī)藥上具有特殊的用途，它是合成腦神經(jīng)及生殖細(xì)胞、核蛋白、血紅蛋白的必須物質(zhì)。隨著人口自然增長(zhǎng)、結(jié)構(gòu)老齡化以及飲食結(jié)構(gòu)的變化，老年疾病的發(fā)生日趨嚴(yán)重， 其中腦血管病主要致死病之一。動(dòng)物腦蛋自水解物類藥物作為這類疾病的特效藥，近年來得到了廣泛關(guān)注，它的化學(xué)成分、藥理作用、臨床應(yīng)用、生產(chǎn)工藝等都得到不同程度的研究。已面市的腦蛋自水解物類藥物主要成分都是動(dòng)物腦脫脂后再經(jīng)蛋白酶降解產(chǎn)生的含有游離氨基酸和分子量在10，000以下的小分子肽的混合物，但具體藥效成分有差別， 如腦蛋白水解物注射液是由豬腦組織中提取的不含蛋白質(zhì)，約含80%游離氨基酸和20% 小分子肽，與進(jìn)口腦活素為同類產(chǎn)品，在臨床上作為腦代謝改善藥取的了不錯(cuò)的療效。腦蛋白水解物能增加腦組織內(nèi)葡萄糖和氧的利用，從而增加腦組織抗氧能力和機(jī)體應(yīng)激能力， 減輕腦組織損傷，促進(jìn)腦細(xì)胞功能恢復(fù)，具有良好的健腦、益智、修復(fù)腦損傷的功效。但注射劑的應(yīng)用除了一些不便外，同時(shí)也存在不少不良反應(yīng)。因此，有必要尋找一種成分更合理、效果更好、服用更方便的腦代謝改善藥物。本發(fā)明的腦蛋白水解物能與吡拉西坦合理配伍，且使成分產(chǎn)生良好的協(xié)同作用，可以用于制備吡拉西坦腦蛋白水解物片。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種腦蛋白水解物，由除人以外的哺乳動(dòng)物腦組織中提取得到。本發(fā)明的另一目的在于提供上述腦蛋白水解物的制備方法。本發(fā)明的最后一目的是提供上述腦蛋白水解物在制備治療急慢性腦血管疾病、由腦血管疾病或腦外傷所引起的腦代謝障礙等后遺癥、先天性腦發(fā)育不全、中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染、閉塞綜合癥、動(dòng)脈硬化、血栓性靜脈炎、毛細(xì)血管出血以及血管通透性升高引起的水腫藥物方面的用途。本發(fā)明所述的腦蛋白水解物由從除人以外的哺乳動(dòng)物腦組織中提取得到，含有特異性多肽以及包括游離賴氨酸和游離谷氨酸在內(nèi)的多種氨基酸，所有組分分子量為 5000 10000道爾頓以下。所述的除人以外的哺乳動(dòng)物為豬、狗、牛、羊、鹿、馬或兔，從生產(chǎn)成本、生產(chǎn)工藝、 產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定性、臨床療效等因素考慮，上述除人以外的哺乳動(dòng)物優(yōu)選豬。所述的腦蛋白水解物中多肽游離賴氨酸游離谷氨酸的重量份比為1 200 0. 1 100 01 80。該腦蛋白水解物中多肽游離賴氨酸游離谷氨酸的重量份比進(jìn)一步優(yōu)選為 3 40 0.3 30 0. 3 20 ；同時(shí)所有組分分子量?jī)?yōu)選為6000 8000道爾頓；該腦蛋白水解物中多肽游離賴氨酸游離谷氨酸的重量份比更優(yōu)選為15 30 3 15 2 6 ；并且所有組分分子量?jī)?yōu)選為8000道爾頓。本發(fā)明所述的腦蛋白水解物的制備方法為取除人以外的哺乳動(dòng)物腦組織，加0.5 2. 5倍重量注射用水，高壓勻漿， 在-30°C _40°C下冷凍，凍實(shí)后在10 40°C融化后，加熱至80 95°C，保持15 30分鐘，然后自然降溫至常溫，在0 5°C下以10000 12000轉(zhuǎn)/分的速度在高速冷凍離心機(jī)上離心15 30分鐘，然后分離上清液和沉淀，上清液備用；向沉淀中加入0. 1 1. 5%沉淀重量的蛋白水解酶，在35 50°C下酶解2 8小時(shí)，酶解PH值控制為7. 5 8. 5，然后加入前述上清液，調(diào)節(jié)pH值至3. 0 4. 0，加熱至80 95°C，保持15 30分鐘后，自然降溫至常溫后，在0 5°C下以3500 4000轉(zhuǎn)/分的速度在低速冷凍離心機(jī)上離心20 30分鐘，然后將上清液過濾，濾液調(diào)pH值為6. 5 7. 5，加熱至80 95°C，保持15 30分鐘后，自然降溫至常溫，在0 5°C下以；3500 4000轉(zhuǎn)/ 分的速度在低速冷凍離心機(jī)上離心20 30分鐘，離心后的上清液在-15°C -20°C冷凍， 凍實(shí)后在室溫下融化，過濾，濾液用截留分子量為5000 10000超濾膜超濾，超濾液即為腦蛋白水解物。所述的高壓勻漿優(yōu)選使用GRB1500-4S高壓勻漿泵(上海東華高壓勻漿廠)。動(dòng)物腦組織應(yīng)為新鮮健康。所述蛋白水解酶可以是胃蛋白酶或胰蛋白酶；優(yōu)選使用胰蛋白酶；所述胰蛋白酶常用規(guī)格為1 250(上海伯奧生物科技有限公司)。酶解適合溫度為35 50°C，優(yōu)選為37 42°C ；為保持溫度穩(wěn)定，可采取夾層水浴保溫的方法。 酶解適合pH值為7.5 8.5，優(yōu)選為7. 8 8. 2。為使本發(fā)明生產(chǎn)工藝、產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定，使用的酶應(yīng)盡可能由固定生產(chǎn)商提供。所述的過濾為現(xiàn)有技術(shù)中通用的紙漿過濾或澄清板過濾。上述過程調(diào)pH值使用鹽酸和/或氫氧化鈉。上述超濾膜優(yōu)選為截留分子量為6000 10000的超濾膜，更優(yōu)選截留分子量為
8000的超濾膜。使用的超濾膜為市售產(chǎn)品，其生產(chǎn)商應(yīng)為行業(yè)認(rèn)可的生產(chǎn)單位，使用的濾膜型號(hào)與尺寸可根據(jù)具體的生產(chǎn)量、選用的超濾器尺寸來確定。本發(fā)明所述的腦蛋白水解物中氨基氮含量達(dá)到總氮含量的40% 50%，可用于制備復(fù)方吡拉西坦腦蛋白水解物片。本發(fā)明所述的腦蛋白水解物的制備方法優(yōu)選為
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取新鮮健康的哺乳動(dòng)物腦組織，加0. 8 1. 2倍重量注射用水，用高壓勻漿泵勻漿，-30°C _40°C速凍，在10 20°C下融化；加熱至80 85°C，保持15 20分鐘，冷卻至常溫后在高速冷凍離心機(jī)上離心，0 5°C條件下以10000 12000轉(zhuǎn)/分離心25 30 分鐘，上清液備用；沉淀加入按重量加入0. 4 0. 8%的胰蛋白酶，在37 42°C酶解3 5 小時(shí)，酶解PH值控制為7. 8 8. 2，酶解結(jié)束將前述上清液加入，調(diào)節(jié)pH值至3. 3 3. 7， 加熱至80 90°C，保持15 20分鐘，冷卻至常溫后在低速冷凍離心機(jī)上離心，0 5°C條件下以4000轉(zhuǎn)/分的速度離心25 30分鐘。上清液過濾，濾液調(diào)PH值為6. 8 7. 2，加熱至80 90°C，保持15 20分鐘，冷卻至常溫后在低速冷凍離心機(jī)上離心，0 5°C條件下以4000轉(zhuǎn)/分的速度離心25 30分鐘，上清液-15°C _20°C冷凍，冷凍后融化，再經(jīng)過濾處理，濾液用截留分子量為8000超濾膜超濾，超濾液即為腦蛋白水解物。本發(fā)明所述腦蛋白水解物含有一種大腦所特有的肽能神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)物，能以多種方式作用于中樞神經(jīng)，調(diào)節(jié)和改善神經(jīng)元的代謝，促進(jìn)突觸的形成，誘導(dǎo)神經(jīng)元的分化，并進(jìn)一步保護(hù)神經(jīng)細(xì)胞免受各種缺血和神經(jīng)毒素的損害。所述腦蛋白水解物可通過血腦屏障，促進(jìn)腦內(nèi)蛋白質(zhì)的合成，影響呼吸鏈，具有抗缺氧的保護(hù)能力，改善腦內(nèi)能量代謝，可激活腺苷酸環(huán)化酶和催化其他激素系統(tǒng)，提供神經(jīng)遞質(zhì)，肽類激素及輔酶前體；可用于老年癡呆、腦供血不足，老年腦力退化及抑郁癥；帕金森氏綜合癥的支持治療；腦神經(jīng)功能障礙、精神分裂癥；神經(jīng)衰弱，神經(jīng)性頭痛；先天性大腦發(fā)育遲緩、發(fā)育不全、智力低下，記憶障礙等；腦外傷急性期及其后遺癥；各類型腦炎、腦膜炎急性期及其后遺癥；促進(jìn)神經(jīng)外科手術(shù)(腦腫瘤、顱腦外傷、腦血管炎癥等)腦神經(jīng)組織修復(fù)；對(duì)腦代謝不全有輔助改善作用，也用于蛋白質(zhì)缺乏、神經(jīng)衰弱病人以及對(duì)一般蛋白質(zhì)消化吸收障礙的病例；可用于制備治療腦血栓、腦栓塞、腦痙攣等急慢性腦血管疾病， 顱腦外傷及腦血管疾病、腦供血不全、腦梗塞所引起的腦代謝障礙及后遺癥，閉塞綜合癥、 動(dòng)脈硬化、血栓性靜脈炎、毛細(xì)血管出血以及血管通透性升高引起的水腫，先天性腦發(fā)育不全、中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染、老年性癡呆，周圍神經(jīng)損傷疾病藥物。本發(fā)明在現(xiàn)有工藝上進(jìn)行了多年的研究，出人意料的發(fā)現(xiàn)，將一般生化實(shí)驗(yàn)室中應(yīng)用的低溫高速離心應(yīng)用到制備腦蛋白水解物中，可以收集到更多的低分子量活性多肽和重要的氨基酸，同時(shí)也將大分子的蛋白酶沉淀下來，避免了對(duì)活性物質(zhì)的降解；本發(fā)明經(jīng)過多次試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)其中氨基酸以賴氨酸、谷氨酸為主，較一般工藝富集，同時(shí)在藥理、臨床試驗(yàn)中也發(fā)現(xiàn)了積極的效果。本發(fā)明所述的藥物組合物含有治療腦血管疾病及其引起的腦代謝障礙后遺癥的活性物質(zhì)，該活性物質(zhì)能調(diào)節(jié)和改善腦代謝。本發(fā)明所述的藥物組合物含有治療腦血管疾病及其引起的腦代謝障礙后遺癥的活性物質(zhì)，包括大量活性多肽和多種氨基酸。腦提取液所含的大量活性多肽、多種氨基酸等能透過血腦屏障，以多種形式作用于中樞神經(jīng)，調(diào)整和改善神經(jīng)元代謝，并影響其呼吸鏈， 具有激活、改善腦內(nèi)神經(jīng)遞質(zhì)和酶的活性，保護(hù)神經(jīng)細(xì)胞免受各種缺血和神經(jīng)毒素的損害。 能增加腦組織對(duì)葡萄糖的利用，改善腦細(xì)胞缺氧狀態(tài)，對(duì)缺氧的腦組織具保護(hù)作用?？蓱?yīng)用于制備治療腦血栓、腦栓塞、腦痙攣等急慢性腦血管疾病藥物方面的用途，可用于治療顱腦外傷及腦血管疾病(腦供血不全、腦梗塞)所引起腦代謝障礙等后遺癥，以及作為治療閉塞綜合癥、動(dòng)脈硬化、血栓性靜脈炎、毛細(xì)血管出血以及血管通透性升高引起的水腫與先天性腦發(fā)育不全、中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染、老年性癡呆等藥物中的應(yīng)用。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1取新鮮健康的豬腦10Kg，加IOL注射用水，使用高壓勻漿泵(GRB1500-4S，上海東華高壓勻漿)勻漿，在_35°C下冷凍，凍實(shí)后在15°C融化后，加熱至80°C，保持15分鐘，然后自然降溫至常溫，在4°C下以10000轉(zhuǎn)/分的速度在高速冷凍離心機(jī)上離心30分鐘，然后分離上清液和沉淀，上清液備用；向沉淀中加入0. 5%沉淀重量的胰蛋白酶[Trypsin，1 250，Amresco 0458]，在 37°C下酶解4小時(shí)，酶解pH值控制為8. 0，然后加入前述上清液，調(diào)節(jié)pH值至3. 5，加熱至 80°C，保持15分鐘后，自然降溫至常溫后，在4°C下以4000轉(zhuǎn)/分的速度在低速冷凍離心機(jī)上離心25分鐘，然后將上清液過濾，濾液調(diào)pH值為7. 0，加熱至85°C，保持15分鐘后，自然降溫至常溫，在4°C下以4000轉(zhuǎn)/分的速度在低速冷凍離心機(jī)上離心25分鐘，離心后的上清液在-15°C冷凍，凍實(shí)后在室溫下融化，過濾，濾液用截留分子量為8000超濾膜超濾，超濾液即為腦蛋白水解物，其特異性多肽含量為20mg/ml，游離賴氨酸含量為10mg/ml、游離谷氨酸含量為5mg/ml。實(shí)施例2取新鮮健康的狗腦lOKg，加IOL注射用水，高壓勻漿，在_35°C下冷凍，凍實(shí)后在 20°C融化后，加熱至85°C，保持15分鐘，然后自然降溫至常溫，在1°C下以10000轉(zhuǎn)/分的速度在高速冷凍離心機(jī)上離心25分鐘，然后分離上清液和沉淀，上清液備用；向沉淀中加入0. 3%沉淀重量的胰蛋白酶[Trypsin，1 250，Amresco 0458]，在 40°C下酶解4小時(shí)，酶解pH值控制為8. 0，然后加入前述上清液，調(diào)節(jié)pH值至3. 0，加熱至 85 0C，保持20分鐘后，自然降溫至常溫后，在2 °C下以3500轉(zhuǎn)/分的速度在低速冷凍離心機(jī)上離心30分鐘，然后將上清液過濾，濾液調(diào)pH值為7. 0，加熱至85 °C，保持30分鐘后，自然降溫至常溫，在2°C下以3500轉(zhuǎn)/分的速度在低速冷凍離心機(jī)上離心30分鐘，離心后的上清液在-20°C冷凍，凍實(shí)后在室溫下融化，過濾，濾液用截留分子量為6000超濾膜超濾，超濾液即為腦蛋白水解物，其特異性多肽含量為15mg/ml，游離賴氨酸含量為10mg/ml、游離谷氨酸含量為2mg/ml。實(shí)施例3取新鮮健康的牛腦lOKg，加15L注射用水，高壓勻漿，在-30°C下冷凍，凍實(shí)后在 30°C融化后，加熱至90°C，保持30分鐘，然后自然降溫至常溫，在2°C下以11000轉(zhuǎn)/分的速度在高速冷凍離心機(jī)上離心20分鐘，然后分離上清液和沉淀，上清液備用；向沉淀中加入0. 沉淀重量的胰蛋白酶[Trypsin，1 250，Amresco 0458]，在 45°C下酶解6小時(shí)，酶解pH值控制為7. 5，然后加入前述上清液，調(diào)節(jié)pH值至3. 5，加熱至 90 0C，保持25分鐘后，自然降溫至常溫后，在1°C下以3500轉(zhuǎn)/分的速度在低速冷凍離心機(jī)上離心25分鐘，然后將上清液過濾，濾液調(diào)pH值為7. 5，加熱至90°C，保持20分鐘后，自然降溫至常溫，在1°C下以3500轉(zhuǎn)/分的速度在低速冷凍離心機(jī)上離心25分鐘，離心后的上清液在_20°C冷凍，凍實(shí)后在室溫下融化，過濾，濾液用截留分子量為10000超濾膜超濾，超濾液即為腦蛋白水解物，其特異性多肽含量為3mg/ml，游離賴氨酸含量為15mg/ml、游離谷氨酸含量為15mg/ml。實(shí)施例4取新鮮健康的羊腦10Kg，加20L注射用水，高壓勻漿，在_35°C下冷凍，凍實(shí)后在 35°C融化后，加熱至95°C，保持20分鐘，然后自然降溫至常溫，在;TC下以12000轉(zhuǎn)/分的速度在高速冷凍離心機(jī)上離心15分鐘，然后分離上清液和沉淀，上清液備用；向沉淀中加入0. 8%沉淀重量的胃蛋白酶，在50°C下酶解2小時(shí)，酶解pH值控制為8. 5，然后加入前述上清液，調(diào)節(jié)pH值至4. 0，加熱至95°C，保持30分鐘后，自然降溫至常溫后，在5°C下以4000轉(zhuǎn)/分的速度在低速冷凍離心機(jī)上離心25分鐘，然后將上清液過濾，濾液調(diào)PH值為7. 5，加熱至80°C，保持25分鐘后，自然降溫至常溫，在5°C下以4000轉(zhuǎn) /分的速度在低速冷凍離心機(jī)上離心25分鐘，離心后的上清液在_15°C冷凍，凍實(shí)后在室溫下融化，過濾，濾液用截留分子量為5000超濾膜超濾，超濾液即為腦蛋白水解物，其特異性多肽含量為40mg/ml，游離賴氨酸含量為5mg/ml、游離谷氨酸含量為10mg/ml。實(shí)施例5取新鮮健康的馬腦lOKg，加25L注射用水，高壓勻漿，在_40°C下冷凍，凍實(shí)后在 40°C融化后，加熱至80°C，保持25分鐘，然后自然降溫至常溫，在4°C下以12000轉(zhuǎn)/分的速度在高速冷凍離心機(jī)上離心25分鐘，然后分離上清液和沉淀，上清液備用；向沉淀中加入1.5%沉淀重量的胃蛋白酶，在40°C下酶解4小時(shí)，酶解pH值控制為8. 0，然后加入前述上清液，調(diào)節(jié)pH值至3. 5，加熱至85°C，保持25分鐘后，自然降溫至常溫后，在4°C下以4000轉(zhuǎn)/分的速度在低速冷凍離心機(jī)上離心20分鐘，然后將上清液過濾，濾液調(diào)PH值為6. 5，加熱至85°C，保持15分鐘后，自然降溫至常溫，在4°C下以4000轉(zhuǎn) /分的速度在低速冷凍離心機(jī)上離心20分鐘，離心后的上清液在_15°C冷凍，凍實(shí)后在室溫下融化，過濾，濾液用截留分子量為8000超濾膜超濾，超濾液即為腦蛋白水解物，其特異性多肽含量為65mg/ml，游離賴氨酸含量為20mg/ml、游離谷氨酸含量為％ig/ml。實(shí)施例6取新鮮健康的兔腦10Kg，加15L注射用水，高壓勻漿，在_30°C下冷凍，凍實(shí)后在 15°C融化后，加熱至85°C，保持25分鐘，然后自然降溫至常溫，在5°C下以11000轉(zhuǎn)/分的速度在高速冷凍離心機(jī)上離心30分鐘，然后分離上清液和沉淀，上清液備用；向沉淀中加入1.0%沉淀重量的胃蛋白酶，在45°C下酶解5小時(shí)，酶解pH值控制為8. 5，然后加入前述上清液，調(diào)節(jié)pH值至3. 0，加熱至80°C，保持20分鐘后，自然降溫至常溫后，在0°C下以4000轉(zhuǎn)/分的速度在低速冷凍離心機(jī)上離心30分鐘，然后將上清液過濾，濾液調(diào)PH值為7. 0，加熱至90°C，保持30分鐘后，自然降溫至常溫，在0°C下以4000轉(zhuǎn) /分的速度在低速冷凍離心機(jī)上離心30分鐘，離心后的上清液在_20°C冷凍，凍實(shí)后在室溫下融化，過濾，濾液用截留分子量為6000超濾膜超濾，超濾液即為腦蛋白水解物，其特異性多肽含量為25mg/ml，游離賴氨酸含量為13mg/ml、游離谷氨酸含量為llmg/ml。實(shí)驗(yàn)例1本實(shí)驗(yàn)例為本發(fā)明最優(yōu)制備方法所得腦蛋白水解物粉末的性狀、PH值、蛋白質(zhì)檢查項(xiàng)目的檢測(cè)。本品為淡黃色或棕黃色粉末或塊狀物。pH值取本品0. 5g，加水50ml溶解，依法測(cè)定(中國(guó)藥典2005年版二部附錄VI
7H)，PH 在 5. 0 7. 0。蛋白質(zhì)取本品0. 2g，加水2ml溶解，加20%磺基水楊酸溶液^iil，混勻，不得發(fā)生混濁或沉淀。實(shí)驗(yàn)例2本實(shí)驗(yàn)例為本發(fā)明最優(yōu)制備方法所得腦蛋白水解物粉末的定性測(cè)定。取本品約200mg，加水20ml，充分研磨，濾過，濾液供下述試驗(yàn)(1)取供試品溶液5ml，加茚三酮試液數(shù)滴，加熱，溶液應(yīng)顯藍(lán)紫色。(2)取供試品溶液5ml，加氫氧化鈉溶液(6 — 10) 2ml，至堿性，加數(shù)滴0. 5%硫酸銅溶液，即顯藍(lán)紫色。以上實(shí)驗(yàn)為本發(fā)明水解物的定性反應(yīng)，說明本發(fā)明水解物中含有確定的組份。實(shí)驗(yàn)例3本實(shí)驗(yàn)例為腦蛋白水解物中總氮定量測(cè)定。取本品10ml，精密稱定，依法測(cè)定(中國(guó)藥典2000年版二部附錄VII D第二法)。實(shí)驗(yàn)例4本實(shí)驗(yàn)例為腦蛋白水解物中氨基氮定量測(cè)定。取本品10ml，用0. lmol/L鹽酸溶液或0. lmol/L氫氧化鈉溶液，調(diào)節(jié)PH值至7. 0， 然后加入預(yù)先調(diào)節(jié)PH值至9.0的甲醛溶液10ml，攪勻，用氫氧化鈉滴定液(0. lmol/L)滴定至溶液的PH值為9.0，按加入甲醛溶液后所消耗的氫氧化鈉滴定液(0. lmol/L)的量(ml) 計(jì)算。每Iml的氫氧化鈉滴定液(0. lmol/L)相當(dāng)于1. 40Img的氨基酸。通過三批測(cè)定，每g含量結(jié)果見表1 表 權(quán)利要求
1.一種腦蛋白水解物，由除人以外的哺乳動(dòng)物腦組織中提取得到，其特征在于所述的腦蛋白水解物含有特異性多肽以及包括游離賴氨酸和游離谷氨酸在內(nèi)的多種氨基酸，所有組分分子量為5000 10000道爾頓以下。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的腦蛋白水解物，其特征在于，所述的除人以外的哺乳動(dòng)物為豬、狗、牛、羊、鹿、馬或兔，優(yōu)選豬。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的腦蛋白水解物，其特征在于，所述的腦蛋白水解物中多肽 游離賴氨酸游離谷氨酸的重量份比為1 200 0. 1 100 0. 1 80 ；進(jìn)一步優(yōu)選為 3 40 0. 3 30 0. 3 20。
4.一種腦蛋白水解物的制備方法，其特征在于，所述方法為取除人以外的哺乳動(dòng)物腦組織，加0. 5 2. 5倍重量注射用水，高壓勻漿，在_30°C _40°C下冷凍，凍實(shí)后在10 40°C融化后，加熱至80 95°C，保持15 30分鐘，然后自然降溫至常溫，在0 5°C下以 10000 12000轉(zhuǎn)/分的速度在高速冷凍離心機(jī)上離心15 30分鐘，然后分離上清液和沉淀，上清液備用；向沉淀中加入0. 1 1. 5%沉淀重量的蛋白水解酶，在35 50°C下酶解 2 8小時(shí)，酶解pH值控制為7. 5 8. 5，然后加入前述上清液，調(diào)節(jié)pH值至3. 0 4. 0，加熱至80 95°C，保持15 30分鐘后，自然降溫至常溫后，在0 5°C下以3500 4000轉(zhuǎn)/ 分的速度在低速冷凍離心機(jī)上離心20 30分鐘，然后將上清液過濾，濾液調(diào)pH值為6. 5 7.5，加熱至80 95°C，保持15 30分鐘后，自然降溫至常溫，在0 5°C下以；3500 4000 轉(zhuǎn)/分的速度在低速冷凍離心機(jī)上離心20 30分鐘，離心后的上清液在-15°C -20°C冷凍，凍實(shí)后在室溫下融化，過濾，濾液用截留分子量為5000 10000超濾膜超濾，超濾液即為腦蛋白水解物。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的制備方法，其特征在于，所述蛋白水解酶是胃蛋白酶或胰蛋白酶；優(yōu)選使用胰蛋白酶；所述胰蛋白酶常用規(guī)格為1 250;酶解適合溫度為35 50°C， 優(yōu)選為37 42°C;為保持溫度穩(wěn)定，可采取夾層水浴保溫的方法；酶解適合pH值為7. 5 8.5，優(yōu)選為7. 8 8. 2。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的制備方法，其特征在于所述的過濾為現(xiàn)有技術(shù)中通用的紙漿過濾或澄清板過濾；上述過程調(diào)PH值使用鹽酸和/或氫氧化鈉；上述超濾膜優(yōu)選為截留分子量為6000 10000的超濾膜，更優(yōu)選截留分子量為8000的超濾膜。
7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的制備方法，其特征在于該腦蛋白水解物中氨基氮含量達(dá)到總氮含量的40% 50%，可用于制備復(fù)方吡拉西坦腦蛋白水解物片。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種吡拉西坦腦蛋白水解物片中所用腦蛋白水解物的制備方法。此腦蛋白水解物由除人以外的哺乳動(dòng)物腦組織中提取得到，含有特異性多肽以及包括游離賴氨酸和游離谷氨酸在內(nèi)的多種氨基酸，所有組分分子量為5000～10000道爾頓以下。所述的腦蛋白水解物中多肽∶游離賴氨酸∶游離谷氨酸的重量份比為1～200∶0.1～100∶0.1～80。本發(fā)明所述的藥物組合物含有治療腦血管疾病及其引起的腦代謝障礙后遺癥的活性物質(zhì)，該活性物質(zhì)能調(diào)節(jié)和改善腦代謝。經(jīng)測(cè)定該腦蛋白水解物中氨基氮含量達(dá)到總氮含量的40％～50％，可用于制備復(fù)方吡拉西坦腦蛋白水解物片。
文檔編號(hào)A61P25/00GK102188447SQ20101012498
公開日2011年9月21日 申請(qǐng)日期2010年3月16日 優(yōu)先權(quán)日2010年3月16日
發(fā)明者郭智華 申請(qǐng)人:博安兄弟制藥(中國(guó))有限公司