專利名稱：：一種治療老年骨質(zhì)疏松性腰痛的復(fù)方制劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明屬中藥領(lǐng)域，具體涉及一種治療老年骨質(zhì)疏松性腰痛的復(fù)方制劑及制備方法。
背景技術(shù)：
：腰腿痛是人們最為常見(jiàn)的疼痛癥候群，給生產(chǎn)、工作、學(xué)習(xí)和生活帶來(lái)諸多不便。隨著社會(huì)生活水平的提高，人均壽命延長(zhǎng)，老年骨質(zhì)疏松性腰痛發(fā)病人數(shù)不斷增長(zhǎng)。老年骨質(zhì)疏松性腰痛是50歲以上老年人群最常見(jiàn)的腰部疾患，在老年人群中的發(fā)病率約為25.2%。其發(fā)病主要是椎體骨質(zhì)疏松后，導(dǎo)致椎體骨小梁骨折、腰椎間盤退行性改變、腰椎管狹窄、椎體壓縮性骨折等，使相鄰的神經(jīng)根、脊髓等遭受化學(xué)性刺激或物理性壓迫，從而產(chǎn)生腰痛、一側(cè)或雙側(cè)下肢疼痛、麻木等癥狀。老年骨質(zhì)疏松性腰痛以持續(xù)性腰部鈍痛多見(jiàn)，大多先出現(xiàn)腰痛，之后又出現(xiàn)腿痛。其中，伴有腰椎間盤退行性改變、腰椎管狹窄改變者，由于椎管內(nèi)壓力增加、馬尾神經(jīng)缺血、神經(jīng)根受壓，引起馬尾神經(jīng)或神經(jīng)根癥狀，出現(xiàn)下肢無(wú)力，嚴(yán)重者足下垂，行走拖步；伴有椎體骨小梁骨折、椎體壓縮性骨折者，往往纏綿難愈，導(dǎo)致長(zhǎng)期慢性腰痛；一些嚴(yán)重的老年骨質(zhì)疏松性腰痛病人，可出現(xiàn)會(huì)陰部麻木、刺痛，大小便失禁等馬尾神經(jīng)受損的表現(xiàn)；胸、腰椎壓縮性骨折導(dǎo)致脊椎后彎、胸廓畸形，可使肺活量和最大換氣量顯著減少，肺氣腫發(fā)生率可高達(dá)40%，出現(xiàn)胸悶、氣短、呼吸困難等癥狀。據(jù)美國(guó)國(guó)家骨質(zhì)疏松基金會(huì)估計(jì)，美國(guó)全年有0.7億人患有腰痛，每年新增70萬(wàn)骨質(zhì)疏松癥引起的椎體骨折性腰痛，其中26萬(wàn)由于疼痛接受非手術(shù)治療，15萬(wàn)人次住院治療?；颊邽橹委熕冻龅馁M(fèi)用以及不能工作所造成的損失價(jià)值約70億美元。歐洲有關(guān)的老年婦女的大樣本研究表明椎體壓縮性骨折的發(fā)病率隨年齡的增加而增長(zhǎng)，50-54歲為11.5%;55-59歲為14.6%;60-64為16.8%;65-69歲為23.5%;70-74歲為27.2%;75-79歲為34.8%。在我國(guó)則有〃五口人家，一人腰痛"之說(shuō)。隨著人口老齡化，用于治療老年骨質(zhì)疏松性腰痛的費(fèi)用不斷上升。因此，開(kāi)發(fā)質(zhì)量穩(wěn)定、療效確切、安全價(jià)廉、服用方便的中藥新藥具有很好的經(jīng)濟(jì)和社會(huì)效益。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明目的在于提供一種療效確切、安全性高的治療老年骨質(zhì)疏松性腰痛的中藥復(fù)方制劑。中醫(yī)認(rèn)為，老年骨質(zhì)疏松性腰痛的病因主要是"氣虛腎虧、血瘀絡(luò)阻"。本發(fā)明以"益氣補(bǔ)腎，化瘀通絡(luò)"為治療老年骨質(zhì)疏松性腰痛之法則，遵循"標(biāo)本兼顧"、"未病先防"的學(xué)術(shù)思想，采用下述原料藥組分制成復(fù)方制劑，通過(guò)改善腰椎局部微循環(huán)、抑制炎癥介質(zhì)、延緩骨質(zhì)疏松、修復(fù)腰神經(jīng)損傷等預(yù)防并治療老年骨質(zhì)疏松性腰痛。本發(fā)明復(fù)方制劑由有效成分與藥物載體制成，其特征在于所述有效成分是由下列重量配比范圍的原料藥組分組成黃芪450250g、淫羊藿350150g、墨旱蓮350150g、丹參300100g、懷牛膝300100g、青風(fēng)藤300100g(生藥劑量)。所述的原料藥的優(yōu)選重量配比范圍是黃芪400300g、淫羊藿300200g、墨旱蓮300200g、丹參250150g、懷牛膝250150g、青風(fēng)藤250150g(生藥劑量)。所述的原料藥的更優(yōu)選重量配比是黃芪350250g、淫羊藿250150g、墨旱蓮250150g、丹參200100g、懷牛膝200100g、青風(fēng)藤200100g(生藥劑量)。本發(fā)明復(fù)方制劑可按常規(guī)方法制成各種口服制劑，包括片劑、顆粒劑、膠囊劑、合劑、散劑等。本發(fā)明的進(jìn)一步目的是提供上述復(fù)方制劑的制備方法。本發(fā)明復(fù)方制劑通過(guò)下述方法和步驟制備①按組方重量稱取各藥材，浸泡lh，煎煮13次，每次0.51.5h，一煎加水1014倍，二、三煎加水610倍，合并煎煮液，濾過(guò)，在607(TC溫度下，濾液濃縮至相對(duì)密度為1.051.30的浸膏。其中，優(yōu)選煎煮2次，每次煎煮lh，一煎加水14倍，二煎加水量10倍，合并煎煮液，濾過(guò)，優(yōu)選濾液濃縮至相對(duì)密度為1.051.07的浸膏液；②上述①浸膏液中加入乙醇，至乙醇濃度為50%80%，優(yōu)選加乙醇至濃度為60%;靜置過(guò)夜，醇沉，濾過(guò)，濾液在607(TC溫度下回收乙醇，并濃縮至相對(duì)5密度為1.351.40的濃浸膏；③上述②濃浸膏在708(TC時(shí)減壓干燥，粉碎成細(xì)粉，過(guò)60目篩，得本發(fā)明藥物組分的浸膏粉；按照浸膏粉填充劑崩解劑=12:5:1重量配比(浸膏粉300g，微晶纖維素101是125g，交聯(lián)羧甲基纖維素納25g)，取上述③制得的組分，加入上訴比例的填充劑、崩解劑，混勻，采用干法制粒，壓制成1000片，片重0.45g。包薄膜衣，制成成品片劑，即得。本發(fā)明所述的藥物活性組分的制備方法，采用了水提取法并優(yōu)選了煎煮次數(shù)、時(shí)間和加水量后提取了黃芪、淫羊藿中皂甙類的化合物、丹參中的酚酸類化合物和丹參素及其它組分中的主要有效成分，然后優(yōu)選了醇沉的密度和乙醇濃度進(jìn)行醇沉純化，最大限度的提取有效成分并去除雜質(zhì)，在減壓低溫條件下濃縮、干燥，同時(shí)對(duì)干燥方法及條件、制劑成型工藝的輔料、制粒方法及條件等進(jìn)行了考査、篩選，優(yōu)選出適合于工業(yè)化生產(chǎn)的制備工藝。本發(fā)明復(fù)方制劑能避免中藥湯劑服用前臨時(shí)煎煮，久置易酶敗變質(zhì)及給患者帶來(lái)很多不方便，根據(jù)臨床用藥特點(diǎn)、保存處方中主要藥味的理化性質(zhì)并結(jié)合現(xiàn)代制劑技術(shù)，制成顆粒劑、片劑、膠囊劑、散劑等固體制劑，方便有效的滿足了患者的需求。本發(fā)明進(jìn)行了動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，結(jié)果顯示小鼠熱板實(shí)驗(yàn)，本發(fā)明復(fù)方制劑2倍劑量組、等倍劑量組、0.5倍劑量組、0.25倍劑量組痛閾值在60min和120min均高于對(duì)照組，有顯著性差異；小鼠耳腫脹實(shí)驗(yàn)，本發(fā)明復(fù)方制劑2倍劑量組、等倍劑量組、0.5倍劑量組腫脹抑制率均低于對(duì)照組，有顯著性差異；細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)，MTT法檢測(cè)結(jié)果表明，本發(fā)明復(fù)方制劑能明顯促進(jìn)成骨細(xì)胞的增殖，與對(duì)照組比較，有非常顯著性差異(P〈0.01);實(shí)時(shí)熒光定量PCR反應(yīng)結(jié)果顯示，與對(duì)照組比較，本發(fā)明復(fù)方制劑可以促進(jìn)成骨細(xì)胞BMP-2mRNA的表達(dá)(P<0.01),促進(jìn)成骨細(xì)胞TypeICollagenmRNA的表達(dá)，促進(jìn)成骨細(xì)胞BGPmRNA表達(dá)(P〈0.01)。結(jié)果證實(shí)，本發(fā)明復(fù)方制劑不僅可以解除老年骨質(zhì)疏松性腰痛臨床癥狀體征，而且可以通過(guò)改善腰椎局部微循環(huán)、抑制炎癥介質(zhì)、延緩骨質(zhì)疏松、修復(fù)腰神經(jīng)損傷等方面預(yù)防老年骨質(zhì)疏松性腰痛，鞏固治療效果，減少?gòu)?fù)發(fā)，體現(xiàn)了"標(biāo)本兼顧"、"未病先防"的學(xué)術(shù)思想。具體實(shí)施方式實(shí)施例1原料組方黃芪450g、淫羊藿350g、墨旱蓮350g、丹參300g、懷牛膝300g、青風(fēng)藤300g。①按組分重量稱取藥材，浸泡lh，煎煮2次，每次煎煮lh,—煎加水14倍，二煎加水量10倍，合并煎煮液，濾過(guò)，濾液濃縮至相對(duì)密度為1.051.07的浸膏液，備用；②上述①浸膏液中加入乙醇，至乙醇濃度為60%。靜置過(guò)夜，醇沉。濾過(guò)，濾液在607(TC溫度下回收乙醇，并濃縮至相對(duì)密度為1.351.40的濃浸膏；(D上述②濃浸膏在6080'C時(shí)減壓干燥，粉碎成細(xì)粉，過(guò)60目篩，即得本發(fā)明藥物的活性組分；④取上述③制備的活性組分250350g，加入微晶纖維素101120130g、交聯(lián)羧甲基纖維素納2030g,混勻。采用干法制粒，并壓制成1000片，包薄膜衣，制成片劑，即得。按實(shí)施的組分重量及采用上述制備方法所制成的中藥片劑，每片重0.45g，每片相當(dāng)于生藥1.75g。生產(chǎn)單位可根據(jù)各自的生產(chǎn)規(guī)模按此比例放大相應(yīng)的倍數(shù)。實(shí)施例2原料組方黃芪400g、淫羊藿300g、墨旱蓮300g、丹參250g、懷牛膝250g、青風(fēng)藤250g。①按組分重量稱取藥材，浸泡lh，煎煮2次，每次煎煮lh，一煎加水14倍，二煎加水量10倍，合并煎煮液，濾過(guò)，濾液濃縮至相對(duì)密度為1.051.07的浸膏液，備用；②上述①浸膏液中加入乙醇，至乙醇濃度為60%。靜置過(guò)夜，醇沉。濾過(guò)，濾液在607(TC溫度下回收乙醇，并濃縮至相對(duì)密度為1.351.40的濃浸膏；③上述②濃浸膏在6080'C時(shí)減壓干燥，粉碎成細(xì)粉，過(guò)60目篩，即得本發(fā)明藥物的活性組分；④取上述③制備的活性組分250350g，加入微晶纖維素101120130g、交聯(lián)羧甲基纖維素納2030g，混勻。采用干法制粒，并壓制成1000片，包薄膜衣，7制成成品片劑，即得。實(shí)施例3原料組方黃芪350g、淫羊藿250g、墨旱蓮250g、丹參200g、懷牛膝200g、青風(fēng)藤200g。①按組分重量稱取藥材，浸泡lh，煎煮2次，每次煎煮lh，一煎加水14倍，二煎加水量10倍，合并煎煮液，濾過(guò)，濾液濃縮至相對(duì)密度為L(zhǎng)051.07的浸膏液，備用；②上述①浸膏液中加入乙醇，至乙醇濃度為60%。靜置過(guò)夜，醇沉。濾過(guò)，濾液在607(TC溫度下回收乙醇，并濃縮至相對(duì)密度為1.351.40的濃浸膏；③上述②濃浸膏在608(TC時(shí)減壓干燥，粉碎成細(xì)粉，過(guò)60目篩，即得本發(fā)明藥物的活性組分；④取上述③制備的活性組分250350g，加入微晶纖維素101120130g、交聯(lián)羧甲基纖維素納2030g，混勻。采用干法制粒，并壓制成1000片，包薄膜衣，制成片劑，即得。按實(shí)施的組分重量及采用上述制備方法所制成的中藥片劑，每片重0.45g，每片相當(dāng)于生藥1.75g。生產(chǎn)單位可根據(jù)各自的生產(chǎn)規(guī)模，按此比例放大相應(yīng)的倍數(shù)。實(shí)施例4黃芪300g、淫羊藿200g、墨旱蓮200g、丹參150g、懷牛膝150g、青風(fēng)藤150g。①按組分重量稱取藥材，浸泡lh，煎煮2次，每次煎煮lh,—煎加水14倍，二煎加水量10倍，合并煎煮液，濾過(guò)，濾液濃縮至相對(duì)密度為1.051.07的浸膏液，備用；②上述①浸膏液中加入乙醇，至乙醇濃度為60%。靜置過(guò)夜，醇沉。濾過(guò)，濾液在607(TC溫度下回收乙醇，并濃縮至相對(duì)密度為1.351.40的濃浸膏；③上述②濃浸膏在608(TC時(shí)減壓干燥，粉碎成細(xì)粉，過(guò)60目篩，即得本發(fā)明藥物的活性組分；④取上述③制備的活性組分350250g，加入微晶纖維素101120130g、交聯(lián)羧甲基纖維素納2030g，混勻。采用干法制粒，并壓制成1000片，包薄膜衣,制成成品片劑，即得。實(shí)施例5黃芪250g、淫羊藿150g、墨旱蓮150g、丹參150g、懷牛膝100g、青風(fēng)藤100g(生藥劑量)。①按組分重量稱取藥材，浸泡lh，煎煮2次，每次煎煮lh，一煎加水14倍，二煎加水量10倍，合并煎煮液，濾過(guò)，濾液濃縮至相對(duì)密度為1.051.07的浸膏液，備用；②上述①浸膏液中加入乙醇，至乙醇濃度為60%。靜置過(guò)夜，醇沉。濾過(guò)，濾液在607(TC溫度下回收乙醇，并濃縮至相對(duì)密度為1.351.40的濃浸膏；③上述②濃浸膏在608(TC時(shí)減壓干燥，粉碎成細(xì)粉，過(guò)60目篩，即得本發(fā)明藥物的活性組分；④取上述③制備的活性組分350250g，加入微晶纖維素101120130g、交聯(lián)羧甲基纖維素納2030g，混勻。采用干法制粒，并壓制成1000片，包薄膜衣，制成成品片劑，即得。實(shí)施例6將實(shí)施例l、2或3中所得活性組分，按常規(guī)方法粉碎，加入糊精，混合均勻后制粒，6065'C干燥，整粒，即得。實(shí)施例7將實(shí)施例l、2或3中所得活性組分，按常規(guī)方法粉碎，加入微晶纖維素、碳酸鈣,混合均勻，裝入膠囊。實(shí)施例8將實(shí)施例l、2或3中所得活性組分，按常規(guī)方法粉碎，加入羧甲基淀粉鈉、瓜耳樹(shù)膠、藻酸鈉等崩解劑，制?；蛑苯訅浩?。實(shí)施例9將實(shí)施例l、2或3中所得活性組分，按常規(guī)方法粉碎，加入甜菊糖苷、吐溫80等輔料，加水至足量，濾過(guò)，分裝。實(shí)施例10本發(fā)明復(fù)方制劑治療老年骨質(zhì)疏松性腰痛有關(guān)藥理研究(一)本發(fā)明復(fù)方制劑(簡(jiǎn)稱健腰密骨片)消腫、止痛實(shí)驗(yàn)研究1、藥物健腰密骨片四種濃度2倍劑量組、等倍劑量組、0.5倍劑量組、0.25倍劑量組和生理鹽水組比較，按公斤體重折算，劑量相當(dāng)于臨床60KG體重9病人用藥量；用藥劑量按照人與動(dòng)物體表?yè)Q算關(guān)系確定《中藥藥效研究思路與方法》P18-19，《現(xiàn)代醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)P335》相當(dāng)于臨床等效劑量。用藥劑量按照人與動(dòng)物體表?yè)Q算關(guān)系確定，等倍劑量組用藥劑量相當(dāng)于臨床等效劑量。2、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物昆明種雄性小鼠，清潔級(jí)(復(fù)旦大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué)部，許可證號(hào)Scxk滬2003-0003,實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量合格證0019761);體重20士2克；動(dòng)物數(shù)每組小鼠12只；隨機(jī)分為2倍劑量組(14.6g/Kg體重/日)、等倍劑量組(7.3g/Kg體重/日)、0.5倍劑量組(3.65g/Kg體重/日)、0.25倍劑量組(1.825g/Kg體重/日)、生理鹽水組。給藥劑量每10g體重給藥0.lml，給藥3天，末次給藥1小時(shí)后進(jìn)行藥效實(shí)驗(yàn)。①小鼠熱板法鎮(zhèn)痛試驗(yàn)篩選合格小鼠，將小鼠放在熱板上至出現(xiàn)舔足所需時(shí)間(s)作為該鼠的痛閾值。凡舔足所用時(shí)間小于5s或大于60s或跳躍者，棄之不用。將合格小鼠隨機(jī)分為7組，再測(cè)其痛閾值，作為該鼠給藥前的痛閾值。試驗(yàn)前小鼠禁食12h,各組均灌胃給藥，給藥后30、60、120min分別測(cè)小鼠痛閾值。如60s仍無(wú)反應(yīng)，將小鼠取出，其痛閾以60s計(jì)算。結(jié)果顯示，小鼠熱板實(shí)驗(yàn)痛閾值，2倍劑量組、等倍劑量組、0.5倍劑量組、0.25倍劑量組和對(duì)照組比較，60min和120min均有顯著性差異。各用藥劑量組無(wú)顯著性差異，0.5倍劑量組優(yōu)于其它治療組。表l是小鼠熱板法鎮(zhèn)痛試驗(yàn)結(jié)果。表l<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>與對(duì)照組比較'P〈0.05，**P<0.01②二甲苯所致小鼠耳腫脹實(shí)驗(yàn)?zāi)┐谓o藥后30min，小鼠右耳涂二甲苯O.lml/只致炎，左耳為對(duì)照；15min后脫頸臼處死,沿耳廓基線剪下雙耳，用6mm角膜環(huán)鉆在左右耳相同位置沖下耳片，在電子分析天平上稱重(精確到O.Img)，右耳重量減去左耳重量之差值(單位:mg)即為腫脹度，計(jì)算各組平均腫脹度并求出腫脹抑制率(%),腫脹抑制率(100%)=(右耳重-左耳重)/左耳重乂100%。結(jié)果表明小鼠耳腫脹抑制率，2倍劑量組、等倍劑量組、0.5倍劑量組和對(duì)照組比較有顯著性差異，其中2倍劑量組優(yōu)于0.5倍劑量組和等倍劑量組。各用藥劑量組間無(wú)顯著性差異。表2是實(shí)驗(yàn)小鼠耳腫脹抑制率。表2組別數(shù)量時(shí)間(lh)對(duì)照組100.4796±0.083152倍劑量組100.2075±0.06915"等倍劑暈組100.297±0.1204**0.5倍劑量組100.3064±0.08533"0.25倍劑量組100.3597±0.1466與對(duì)照組比較*P<0.05，林P〈0.01(二)本發(fā)明復(fù)方制劑(簡(jiǎn)稱健腰密骨片)細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)研究清潔級(jí)SD大鼠，體重大鼠300士20g(上海市實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理委員會(huì)頒發(fā)的醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物合格證書(shū)，合格證號(hào)"滬動(dòng)合證字152號(hào)"；動(dòng)物實(shí)驗(yàn)環(huán)境設(shè)施等級(jí)清潔級(jí)；環(huán)境設(shè)施合格證號(hào)"醫(yī)動(dòng)字第02-24號(hào)")。分組如下(1)一陰性對(duì)照組，正常大鼠血清；(2)健腰密骨片l/4倍劑量組大鼠血清(2.1875g/Kg體重/日)；(3)健腰密骨片l/2倍劑量組大鼠血清(4.375g/Kg體重/日)；11(4)健腰密骨片l倍劑量組大鼠血清(8.75g/Kg體重/日)；(5)健腰密骨片2倍劑量組大鼠血清(17.5g/Kg體重/日)；(6)陽(yáng)性對(duì)照組，BMP-2純化蛋白(50ng/ml)。①M(fèi)TT法觀察對(duì)成骨細(xì)胞增殖的影響取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期成骨細(xì)胞，經(jīng)常規(guī)胰蛋白酶消化后制成單細(xì)胞懸液。計(jì)數(shù)細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞密度為lX10Vml左右。將細(xì)胞移入96孔培養(yǎng)板中，每孔200ml，然后放入37t、5%C02培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，第二日吸去孔內(nèi)的培養(yǎng)液，按上述分組方法分別給藥，每組8個(gè)復(fù)孔，每孔200ul含藥血清細(xì)胞培養(yǎng)液，之后，再放入37"C、5y。C02培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)，于培養(yǎng)48小時(shí)后，取出培養(yǎng)板進(jìn)行MTT法檢測(cè)，每孔加入20ulMTT溶液(5mg/ral)，放入37。C、5%002培養(yǎng)箱中孵育4小時(shí)后，棄去上清液，每孔加入DMSO180ul，震搖混勻，使結(jié)晶完全溶解，立即上酶標(biāo)儀測(cè)定OD值，波長(zhǎng)為490nm，以同時(shí)做的單純培養(yǎng)液為空白對(duì)照孔。MTT法檢測(cè)結(jié)果表明健腰密骨片能明顯促進(jìn)成骨細(xì)胞的增殖(P<0.01)，其中以l/4倍劑量最明顯。表3是MTT法觀察對(duì)成骨細(xì)胞增殖影響。<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>注*P〈0.01,與正常對(duì)照組比較有顯著性差異。②實(shí)時(shí)熒光定量PCR反應(yīng)檢測(cè)對(duì)成骨細(xì)胞中BMP-2、TypeICollagen和BGPmRNA表達(dá)的影響弓l物由Genebank數(shù)據(jù)庫(kù)中檢索出基因全長(zhǎng)序列，然后根據(jù)引物長(zhǎng)度、Tm溫度、GC免等因素設(shè)計(jì)最適合引物并合成。序列如下BMP-2:5'-GATCTGTACCGCAGGCACTC-3,，5'-TTCCCACTCATCTCTGGAAGTT-3，；TypeICollagen:5，-CATTTGCACTGGGTCACACGTA-3，，5,-GAATCTGGCCATGTTTGTGCTC-3';Osteocalcin:5'-CCCTCTCTCTGCTCACTCTGCT-3，，5，-CTTATTGCCCTCCTGCTTGG-3';3-actin:5'-CTGTCCCTGTATGCCTCTG-3，，5'_ATGTCACGCACGATTTCC-3，。將樣本cDNA分別進(jìn)行熒光定量PCR反應(yīng)。待反應(yīng)結(jié)束后，用RotorGene6.0軟件根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線自動(dòng)進(jìn)行絕對(duì)定量分析，并計(jì)算結(jié)果，以每一樣本所含目的基因的拷貝數(shù)和其e-actin內(nèi)參基因的拷貝數(shù)的比值進(jìn)行相對(duì)比較。實(shí)時(shí)熒光定量PCR反應(yīng)結(jié)果顯示，健腰密骨片可以促進(jìn)成骨細(xì)胞BMP-2mRNA的表達(dá)(P<0.01)，其中以1/4倍劑量最明顯，1/2倍劑量次之；健腰密骨片可以促進(jìn)成骨細(xì)胞TypeICollagenmRNA的表達(dá)，其中以2倍劑量最明顯(P<0.01)，1/4倍劑量次之(P〈0.05);健腰密骨片可以促進(jìn)成骨細(xì)胞BGPmRNA的表達(dá)(P<0.01)，其中以l/4倍劑量最明顯，1/2倍劑量次之。表4是治療后BMP-2、TypeICollagen和BGPmRNA表達(dá)的影響。表4分組BMP-2TypeICollagenBGP正常對(duì)照1.088±0.05621.247±0.30231.293±0.329BMP-2組2.66±0.1297*3.988±0.3173.372±0.1863*1/4倍劑量4.916±0.3472*4.452±0.2982*8.244±1.41*1/2倍劑量4.621±0.4326*4.021±0.90535.683±0.518*1倍劑量3.135±0.3491*12.016±2.7535*3.683±0.4561*2倍劑量4.11±0.5694*1.894±0.46284.635±0.6407*注*P〈0.05，與正常對(duì)照組比較有顯著性差異；*P〈0.01,與正常對(duì)照組比較有極其顯著性差異。13(三)急性毒性實(shí)驗(yàn)昆明小鼠灌胃按最大濃度(7.52g生藥/ml)、最大容積(40ml/kg)給藥體積給予健腰密骨片溶液，l日內(nèi)2次給藥，連續(xù)觀察14天，結(jié)果顯示，未出現(xiàn)明顯毒性反應(yīng)，禾一小鼠死亡。健腰密骨片臨床人用量為70g(生藥)/60kg/日，經(jīng)計(jì)算，小鼠口服的最大給藥量為32.72g干膏粉/kg,S卩600.37g生藥/kg，相當(dāng)于臨床人用量(每kg體重)的513倍。權(quán)利要求1、一種治療老年骨質(zhì)疏松性腰痛的復(fù)方制劑，由藥物有效成分與藥物載體組成，其特征是所述有效成分是由下列重量配比范圍的原料藥組分組成，生藥劑量黃芪450～250g、淫羊藿350～150g、墨旱蓮350～150g、丹參300～100g、懷牛膝300～100g、青風(fēng)藤300～100g。2、按權(quán)利要求2所述的治療老年骨質(zhì)疏松性腰痛的復(fù)方制劑，其特征是所述的原料藥的重量配比范圍是，生藥劑量黃芪400300g、淫羊藿300200g、墨旱蓮300200g、丹參250150g、懷牛膝250150g、青風(fēng)藤250150g。3、按權(quán)利要求3所述的治療老年骨質(zhì)疏松性腰痛的復(fù)方制劑，其特征是所述的原料藥的重量配比范圍是，生藥劑量黃萬(wàn)350250g、淫羊藿250150g、墨旱蓮250150g、丹參200100g、懷牛膝200100g、青風(fēng)藤200100g。4、權(quán)利要求1或2或3的治療老年骨質(zhì)疏松性腰痛的復(fù)方制劑的制備方法，其特征在于通過(guò)下列步驟①按組分重量稱取藥材，浸泡lh，煎煮13次，每次0.51.5h，一煎加水1014倍，二、三煎加水610倍，合并煎煮液，濾過(guò)，在6070。C溫度下，濾液濃縮至相對(duì)密度為1.051.30的浸膏，備用；②上述①浸膏液中加入乙醇，至乙醇濃度為50%80%，靜置過(guò)夜，醇沉，濾過(guò)，濾液在6080'C溫度下回收乙醇，并濃縮至相對(duì)密度為1.351.40的濃浸膏；③上述②濃浸膏在608(TC時(shí)減壓干燥，粉碎成細(xì)粉，過(guò)60目篩，得藥物活性組分浸膏粉；④取上述③制得的活性組分浸膏粉，加入填充劑、崩解劑，混勻，采用干法制粒，并壓制成1000片，片重0.45g，包薄膜衣，制成片劑、顆粒劑、膠囊劑、合劑或散劑。5、根據(jù)權(quán)利要求4所述的治療老年骨質(zhì)疏松性腰痛的復(fù)方制劑的制備方法，其特征在于所述填充劑為微晶纖維素101，加入量為120130g;崩解劑為交聯(lián)羧甲基纖維素納，加入量為2030g。6、根據(jù)權(quán)利要求4所述的制備方法，其特征在于所述步驟1的原料藥經(jīng)水浸泡1小時(shí)后，提取3次，每次1.5小時(shí)，濃縮至相對(duì)密度為L(zhǎng)351.40后，加入乙醇使含醇量達(dá)60%，回收乙醇后的提取物。全文摘要本發(fā)明屬中藥領(lǐng)域，涉及一種治療老年骨質(zhì)疏松性腰痛的中藥制劑及其制備方法。所述制劑由藥材黃芪、淫羊藿、墨旱蓮、丹參、懷牛膝、青風(fēng)藤的水提取物與輔料混合，制粒、壓片制成。所述藥材通過(guò)水浸泡，水煎煮后，合并煎煮液濃縮至密度約為1.05，加乙醇至濃度為60％，放置過(guò)夜，醇沉；濾液回收乙醇并濃縮、減壓干燥、粉碎成浸膏粉；加輔料混勻，制粒，壓片，包薄膜衣，即得。本發(fā)明運(yùn)用益氣補(bǔ)腎、化瘀通絡(luò)的治療法則，能改善腰椎局部微循環(huán)、抑制炎癥介質(zhì)、延緩骨質(zhì)疏松、修復(fù)腰神經(jīng)損傷，防治療老年骨質(zhì)疏松性腰痛，體現(xiàn)了“標(biāo)本兼顧”、“未病先防”的學(xué)術(shù)思想。文檔編號(hào)A61K36/59GK101590109SQ20091000416公開(kāi)日2009年12月2日申請(qǐng)日期2009年2月13日優(yōu)先權(quán)日2008年9月4日發(fā)明者煒侯,琴卞,盛盧,泉周,周重建,唐得志,崔學(xué)軍,寧張,杞施,李晨光,梁倩倩,段曉堃,江雪琴,王擁軍,冰舒申請(qǐng)人:上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬龍華醫(yī)院