專利名稱：：通過(guò)施用人il-18組合來(lái)治療癌癥的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：一般地，本發(fā)明涉及與針對(duì)癌細(xì)胞表面上所表達(dá)的抗原的單克隆抗體組合的，或與化療劑組合的IL-18(也稱為干擾素-Y誘導(dǎo)因子，IGIF)治療癌癥的用途。
背景技術(shù)：
：白介素-18(IL-18)是在先天性免疫應(yīng)答和獲得性免疫應(yīng)答中均起作用的一種有力細(xì)胞因子。在臨床前研究中，IL-18誘導(dǎo)T細(xì)胞和天然殺傷(NK)細(xì)胞合成IFN-y，提升NK細(xì)胞和細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞(CTL)的溶細(xì)胞活性，促進(jìn)活化的CD4T細(xì)胞分化成輔助效應(yīng)細(xì)胞，而且誘導(dǎo)免疫記憶。基于廣譜的免疫刺激特性，已經(jīng)在多種臨床前腫瘤模型中研究了IL-18。在免疫原性腫瘤中觀察到作為單一療法使用的IL-18的抗腫瘤活性。在MOPC-315漿細(xì)胞瘤(高度免疫原性腫瘤)的晚期腫瘤(大于100cm3)模型中觀察到最有力的抗腫瘤效果。因?yàn)槟[瘤通常是非免疫原性的，所以臨床前研究的焦點(diǎn)在于IL-18與單克隆抗體或化療劑的聯(lián)合療法。這些研究顯示了組合兩種不同藥劑的益處，其中每種藥劑具有不同腫瘤殺傷機(jī)制，導(dǎo)致協(xié)同性抗腫瘤活性?；钚匀薎L-18含有157個(gè)氨基酸殘基。它具有有力的生物學(xué)活性，包括誘導(dǎo)T細(xì)胞和脾細(xì)胞生成干擾素-Y,增強(qiáng)服細(xì)胞的殺傷活性和促進(jìn)幼稚〔04+T細(xì)胞分化成Thl細(xì)胞。另外，人IL-18提升GM-CSF的生成，并降低IL-10的生成。CD4+T細(xì)胞是所有免疫應(yīng)答的中樞調(diào)控元件。它們分成兩個(gè)子集，Thl和Th2。每個(gè)子集以其分泌不同細(xì)胞因子的能力來(lái)限定。有趣的是，最有力的分化誘導(dǎo)物是細(xì)胞因子自身。幼稚前體發(fā)育成Th2細(xì)胞是由IL-4誘導(dǎo)的。在發(fā)現(xiàn)IL-18前，認(rèn)為IL-12是主要的Th1誘導(dǎo)性細(xì)胞因子。Thl細(xì)胞分泌IL-2、干擾素-Y、和TNF-P。干擾素-y(特征性的Thl細(xì)胞因子)直接對(duì)巨噬細(xì)胞起作用以增強(qiáng)它們殺微生物的和吞噬細(xì)胞的活性。結(jié)果，活化的巨噬細(xì)胞能有效地破壞胞內(nèi)病原體和腫瘤細(xì)胞。Th2細(xì)胞生成IL-4、IL-5、IL-6、IL-10和IL-13,它們通過(guò)幫助B細(xì)胞發(fā)育成抗體生成細(xì)胞而起作用?？傊琓hl細(xì)胞主要負(fù)責(zé)細(xì)胞介導(dǎo)的免疫，而Th2細(xì)胞負(fù)責(zé)體液免疫?；趶V譜的免疫剌激特性，已經(jīng)在多種臨床前腫瘤模型中研究了IL-I8。在免疫原性腫瘤中觀察到作為單一療法使用的IL-18的抗腫瘤活性。在MOPC-315漿細(xì)胞瘤(高度免疫原性腫瘤)的晚期腫瘤(大于100cm3)模型中觀察到最有力的抗腫瘤效果。在這種模型中，每日施用鼠IL-18(5mg/Kg)持續(xù)約30天導(dǎo)致可再現(xiàn)的腫瘤消退和治愈。用親本腫瘤再次考驗(yàn)導(dǎo)致腫瘤排斥，提示對(duì)免疫記憶的誘導(dǎo)。關(guān)于此模型中牽涉細(xì)胞免疫的別的證據(jù)來(lái)自在攜帶晚期MOPC-315腫瘤的重度聯(lián)合免疫缺陷小鼠(SCID)中進(jìn)行的實(shí)驗(yàn)，所述晚期MOPC-315腫瘤在使用類(lèi)似的IL-18日程表后未能消退。關(guān)于IL-18介導(dǎo)細(xì)胞免疫的進(jìn)一步支持還來(lái)自對(duì)對(duì)照和經(jīng)IL-18處理的小鼠中建立的MOPC-315腫瘤實(shí)施的免疫組織化學(xué)。這表明相對(duì)于對(duì)照而言，經(jīng)IL-18處理的動(dòng)物中由008+T淋巴細(xì)胞、NK細(xì)胞、活化的巨噬細(xì)胞、和樹(shù)突細(xì)胞組成的細(xì)胞浸潤(rùn)增加。在體外，來(lái)自用IL-18處理的動(dòng)物的PBMC或脾細(xì)胞顯示了針對(duì)腫瘤的NK和CTL細(xì)胞毒性。另外，看起來(lái)完整的Fas/Fas配體途徑對(duì)抗腫瘤應(yīng)答是有益的。利妥昔單抗(rituximab)是一種嵌合單克隆抗體，其由識(shí)別人CD20抗原的鼠抗原結(jié)合位點(diǎn)與人IgGl恒定區(qū)融合而組成。利妥昔單抗(作為單一藥劑)在無(wú)痛性NHL中具有顯著活性。在166名患有復(fù)發(fā)性或頑固性無(wú)痛性NHL的患者的樞要單臂臨床研究(pivotalsingle-armclinicalstudy)中，總體應(yīng)答率是48%，且完全應(yīng)答(CR)率是6。/。。McLaughlin等，J.Clin.Oncol.16:2825-2833(1998)。在先前未治療的患有無(wú)痛性NHL的患者中，利妥昔單抗療法具有64-73。/。的總體應(yīng)答率和15-26。/。的CR率。Hainsworth等，Blood95:3052-3056(2000);Colombat等，Blood97:101-106(2001)。此外，多項(xiàng)隨機(jī)化III期研究顯示了，向常規(guī)化療添加利妥昔單抗改善了NHL患者的存活。Marcus等，Blood105:1417-1423(2005);Marcus等,Blood104:3064-3071(2004);Hiddemann等,Blood106:3725-3732(2005);Feugier等，J.Clin.Oncol.23:4117-4126(2005)。然而，由于化療的毒性較高，利妥昔單抗單一療法仍被認(rèn)為是無(wú)痛性淋巴瘤患者中的一個(gè)選項(xiàng)。正在進(jìn)行研究，以確定增強(qiáng)抗腫瘤活性的方式，并改善利妥昔單抗的功效。數(shù)種機(jī)制可有助于利妥昔單抗的體內(nèi)功效。利妥昔單抗對(duì)淋巴瘤細(xì)胞表面上的CD20的結(jié)合能觸發(fā)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)途徑，導(dǎo)致凋亡或程序性細(xì)胞死亡。Shan等,Blood91:1644-1652(1998);Pedersen等，Blood99:1314-1319(2002)。此外，利妥昔單抗能活化補(bǔ)體種類(lèi)，引起補(bǔ)體依賴性細(xì)胞溶解。Cragg等,Blood101:1045-1052(2003);Manches等，Blood101:949-954(2003)。然而，越來(lái)越多的證據(jù)提示，ADCC在施用利妥昔單抗后在消除腫瘤細(xì)胞中發(fā)揮支配性作用。Manches等，見(jiàn)上文；Golay等，Haematologica88:1002-1012(2003);Clynes等，Nat.Med.6:443-446(2000)。在抗體的恒定(Fc)區(qū)結(jié)合至效應(yīng)細(xì)胞(諸如NK細(xì)胞或單核細(xì)胞/巨噬細(xì)胞譜系的細(xì)胞)表面上的Fc受體時(shí)，ADCC被觸發(fā)。在人B細(xì)胞淋巴瘤的鼠模型中，在缺乏活化性Fc受體的小鼠中，利妥昔單抗的功效被消除。相比之下，在缺乏抑制性Fc受體的小鼠中，單克隆抗體療法得到增強(qiáng)。攜帶Fc受體的效應(yīng)細(xì)胞對(duì)于利妥昔單抗在此模型中的功效是至關(guān)重要的。人體內(nèi)的主要活化性Fc受體是CD16(FcyRIIIA)，其由NK細(xì)胞和單核細(xì)胞表達(dá)。已經(jīng)顯示了，人FcyyRIIIA基因中第158位的多態(tài)性(苯丙氨酸對(duì)纈氨酸)與對(duì)利妥昔單抗的響應(yīng)相關(guān)。158VV純合基因型與在體外較強(qiáng)的IgG結(jié)合人NK細(xì)胞和觸發(fā)通過(guò)NK細(xì)胞進(jìn)行的ADCC有關(guān)(Koene等,Blood90:1109-1114(1997);Dall，Ozzo等,CancerRes.64:4664-4669(2004》，而且還與利妥昔單抗療法后較高的應(yīng)答率有關(guān)。Weng等，J.Clin.Oncol.21:3940-3947(2003);Cartron等，Blood104:2635-2642(2004)。這些數(shù)據(jù)支持如下假設(shè)，即NK細(xì)胞介導(dǎo)的ADCC對(duì)于利妥昔單抗療法在淋巴瘤患者中的效力是重要的。一種用于改善利妥昔單抗功效的策略是施用能引起攜帶Fc受體的效應(yīng)細(xì)胞(包括NK細(xì)胞和單核細(xì)胞/巨噬細(xì)胞譜系的細(xì)胞)擴(kuò)充和/或活化的細(xì)胞因子。I期臨床試驗(yàn)顯示了，利妥昔單抗能安全地與IL-2、IL-12、或GM-CSF組合地給予淋巴瘤患者。Rossi等，Blood106:2760(abst2432)(2005);McLaughlin等，Ann.Oncol,16(Suppl5):v68(abstr104)(2005);Ansell等,Blood99:67-74(2002);Eisenbeis等，Clin.CancerRes.10:6101-6110(2004);Gluck等，Clin.CancerRes.10:2253-2264(2004);Friedberg等，Br.J.Haematol117:828-834(2002)。在這些研究中觀察到22-79。/。的總體客觀應(yīng)答率(overa11objectiveresponserate)和5-45Yo的完全應(yīng)答率(completeresponserate)。另夕卜，生物標(biāo)志(諸如絕對(duì)NK計(jì)數(shù)和離體ADCC活性)與應(yīng)答率相關(guān)。這些研究中的大多數(shù)主要包括患有復(fù)發(fā)性和頑固性疾病和患有攻擊性淋巴瘤亞型(DLBCL和套細(xì)胞淋巴瘤)的患者。這些不利患者群體中相對(duì)較高的客觀應(yīng)答率指明，細(xì)胞因子和利妥昔單抗的組合值得在B細(xì)胞淋巴瘤中進(jìn)一步調(diào)查。發(fā)明概述一方面，本發(fā)明涉及一種在有所需要的患者中治療癌癥的方法，包括分開(kāi)給所述患者施用(或是同時(shí)地，或是序貫地)包含如下各項(xiàng)的組合物的步驟(i)與載體組合的人IL-18多肽(SEQIDNO:1);和(ii)針對(duì)癌細(xì)胞表面上所表達(dá)的抗原的單克隆抗體，其中所述抗體具有抗體依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性(ADCC)效應(yīng)器功能，且進(jìn)一步地其中所述抗體不是抗CD20抗體。這第一種方法可以牽涉施用包含針對(duì)選自下組的抗原的單克隆抗體的組合物CD22、CD19、HER2、HER3、EGFR(Erbitux)、IGF-1R、AXL-1、FGFR、整聯(lián)蛋白受體、CEA、CD44、和VEGFR。另一方面，所述抗原是HER-2,且所述單克隆抗體是HERCEPTIN②。另外，這種方法牽涉治療選自下組的癌癥何杰金氏淋巴瘤(Hodgkin，slymphoma)、B細(xì)胞非何杰金氏淋巴瘤(B-cellnon-Hodgkin，slymphoma)、伯基特淋巴瘤(Burkittlymphoma)、T細(xì)胞非何杰金氏淋巴瘤(T-cellNon-Hodgkin，slymphoma)、AML、CLL、MM、其它白血病(leukemias)、卵巢癌(ovariancancer)、乳&泉癌(breastcancer)、月巿癌(lungcancer)、肉瘤(sarcoma)、月旁月光癌(bladdercancer)、月夷A,癌(pancreaticcancer)、曱狀A(yù)泉癌(thyroidcancer)、肝瘤(hepatoma)、胃癌(gastriccancer)、維爾姆斯氏腫瘤(Wilms'tumor)、成神經(jīng)細(xì)胞瘤(neuroblastoma),成月交質(zhì)細(xì)胞瘤(glioblastoma)禾口其它月S瘤(braintumors)、纟吉腸癌(coloncancer)、直腸癌(rectalcancer)、前列&，癌(prostatecancer)、黑素瘤(melanoma)、腎纟田月包癌(renalcellcarcinoma)、和皮膚癌(skincancers)。第二方面，本發(fā)明關(guān)于一種在有所需要的患者中治療癌癥的方法，包括分開(kāi)給所述患者施用(或是同時(shí)地，或是序貫地)包含如下各項(xiàng)的組合物的步驟(i)與載體組合的人IL-18多肽(SEQIDNO:1);和(ii)化療劑。這種方法中的化療劑可以選自下組doxil(鹽酸多柔比星脂質(zhì)體)、托泊替康(topotecan)、改變DNA的藥物(例如卡柏(carboplatin))、抗代謝物(例如吉西他濱(gemcitabine))、阻止細(xì)月包分裂的藥物(例如長(zhǎng)春新堿(vincristine))和抗血管發(fā)生劑(例如帕唑帕尼(pazopanib))。在這種方法中，要治療的癌癥選自下組何杰金氏淋巴瘤、B細(xì)胞非何杰金氏淋巴瘤、T細(xì)胞非何杰金氏淋巴瘤、乳腺癌、肺癌、肉瘤、膀胱癌、曱狀腺癌、肝瘤、胃癌、維爾姆斯氏胂瘤、成神經(jīng)細(xì)胞瘤、結(jié)腸癌、結(jié)腸直腸癌、前列腺癌、黑素瘤、和腎細(xì)胞癌。另一方面，本發(fā)明提供了供癌癥治療中使用的組合物，其包含人IL-18多肽(SEQIDNO:l)和針對(duì)癌細(xì)胞表面上所表達(dá)的抗原的單克隆抗體，其中所述抗體具有抗體依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性(ADCC)效應(yīng)器功能，且其中所述抗體不是抗CD20抗體。包含所述hlL-18多肽(SEQIDN0:1)和所述抗體的組合物可以分開(kāi)給所述患者施用，或任選地，.同時(shí)地或序貫地。另一方面，本發(fā)明提供了包含人IL-18多肽(SEQIDNO:l)和針對(duì)癌細(xì)胞表面上所表達(dá)的抗原的單克隆抗體的組合物在制備藥物中的用途，所述藥物用于治療患者中的癌癥，其中所述單克隆抗體具有抗體依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性(ADCC)效應(yīng)器功能，且其中所述抗體不是抗CD20抗體。所述ML-18多肽和所述抗體可以分開(kāi)給所述患者施用，任選地，同時(shí)地或序貫地。另一方面，本發(fā)明提供了包含人IL-18多肽(SEQIDNO:l)的組合物在制備藥物中的用途，所述藥物與針對(duì)癌細(xì)胞表面上所表達(dá)的抗原的單克隆抗體組合地用于治療患者中的癌癥，其中所述單克隆抗體具有抗體依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性(ADCC)效應(yīng)器功能，且其中所述抗體不是抗CD20抗體。另一方面，本發(fā)明提供了針對(duì)癌細(xì)胞表面上所表達(dá)的抗原的單克隆抗體在制備藥物中的用途，所述藥物用于包含具有人IL-18多肽(SEQIDN0:1)的組合的組合物，用于治療患者中的癌癥，其中所述單克隆抗體具有抗體依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性(ADCC)效應(yīng)器功能，且其中所述抗體不是抗CD20抗體。另一方面，本發(fā)明提供了一種組合物，其包含(i)人IL-18多肽(SEQIDNO:l)，和(ii)化療劑，其用于治療癌癥。包含所述hlL-18多肽(SEQIDNO:l)和所述化療劑的組合物可以分開(kāi)給所述患者施用，任選地，同時(shí)地或序貫地。另一方面，本發(fā)明提供了包含人IL-18多肽(SEQIDNO:l)和化療劑的組合物在制備用于治療癌癥的藥物中的用途。所述hlL-18多肽(SEQIDNO:l)和化療劑可以分開(kāi)給所迷患者施用，任選地，同時(shí)地或序貫地。另一方面，本發(fā)明提供了人IL-18多肽(SEQIDNO:l)在制備藥物中的用途，所述藥物與化療劑組合地用于組合物，用于治療癌癥。另一方面，本發(fā)明提供了化療劑在制備藥物中的用途，所述藥物用于包含具有人IL-18多肽(SEQIDNO:1)的組合的組合物，用于治療癌癥。又一方面，本發(fā)明提供了一種在有所需要的患者中治療癌癥的方法，所述方法包括給所述患者施用包含與化療劑或針對(duì)癌細(xì)胞表面上所表達(dá)的抗原的單克隆抗體組合的人IL-18(SEQIDNO:1)的組合物的步驟，其中所述抗體具有抗體依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性(ADCC)效應(yīng)器功能，且進(jìn)一步地其中所述抗體不是抗CD20抗體，由此所述治療導(dǎo)致所述患者中的長(zhǎng)期存活和/或?qū)Π┌Y復(fù)發(fā)的預(yù)防和對(duì)免疫記憶的誘導(dǎo)。附圖筒述圖1顯示了天然人IL-18的氨基列(SEQIDNO:1)。圖2顯示了鼠IL-18的氨基晚字列(SEQIDNO:2)。圖3顯示了與RITUXAN⑧組合的mlL-18(SEQIDNO:2)在人B細(xì)胞淋巴瘤鼠模型中的抗腫瘤活性。圖4顯示了在使用GraphPadPrism⑧對(duì)來(lái)自圖3的數(shù)據(jù)進(jìn)行繪圖和分析時(shí)的統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性。具體地，此圖比較植入后第19天的腫瘤體積。圖5顯示了人B細(xì)胞淋巴瘤模型中鼠IL-18(SEQIDNO:2)/RITUXAN⑧組合的植入后第25天腫瘤體積。圖6A和圖6B顯示了人B細(xì)胞淋巴瘤模型中鼠IL-18(SEQIDNO:2)/RITUXAN⑧組合的腫瘤生長(zhǎng)體積中值和均值。圖7和圖8顯示了人B細(xì)胞淋巴瘤模型中鼠IL-18(SEQIDNO:2)/RITUXAN⑧組合的植入后第27天腫瘤體積，與任一單獨(dú)的藥劑相比。圖9顯示了與多柔比星組合的mlL-18(SEQIDNO:2)處理后的EL-4T細(xì)胞存活，與單獨(dú)的多柔比星和單獨(dú)的IL-18兩者相比。圖10顯示了圖9中所表明的數(shù)據(jù)的存活者概率曲線圖，其顯示了EL-4T細(xì)胞淋巴瘤模型中給定藥物的劑量與抗腫瘤活性之間的相關(guān)性。圖llA和圖llB顯示了EL-4T細(xì)胞淋巴瘤模型中與單獨(dú)的mlL-18(SEQIDNO:2)和單獨(dú)的多柔比星兩者相比多柔比星/IL-18組合的植入后第13天的PBL(圖11A)和脾細(xì)胞(圖11B)的Facs分析。圖12顯示了EL-4T細(xì)胞淋巴瘤模型中與單獨(dú)的IL-18和單獨(dú)的多柔比星兩者相比多柔比星/mlL-18(SEQIDNO:2)組合的處理后21小時(shí)的NK細(xì)胞毒性測(cè)定法。圖13顯示了MOPC315.D3j005研究中mIL-18(SEQIDNO:2)和HERCEPTIN的聯(lián)合療法對(duì)SCID小鼠中MOPC315鼠漿細(xì)胞瘤生長(zhǎng)的影響。(數(shù)據(jù)以均值+ASD表示。)圖14顯示了MOPC315.D3j005研究中mIL-18(SEQIDNO:2)和HERCEPTIN⑧的聯(lián)合療法對(duì)SCID小鼠中MOPC315鼠漿細(xì)胞瘤生長(zhǎng)的影響。(數(shù)據(jù)以中值+ASD表示。)圖15顯示了mlL-18(SEQIDNO:2)和HERCEPTIN⑧的聯(lián)合療法對(duì)SCID小鼠中MOPC315鼠漿細(xì)胞瘤生長(zhǎng)的植入后第24天的腫瘤體積的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。(數(shù)據(jù)以均值+Z-SD表示。)圖16顯示了mlL-18(SEQIDNO:2)和HERCEPTIN⑧的聯(lián)合療法對(duì)SCID小鼠中MOPC315.D3j005鼠漿細(xì)胞瘤生長(zhǎng)的植入后第24天的腫瘤體積。(數(shù)據(jù)以中值+ASD表示。)圖17顯示了MOPC315.D3j03研究中mIL-18(SEQIDNO:2)和HERCEPTIN的聯(lián)合療法對(duì)SCID'J、鼠中MOPC315鼠漿細(xì)胞瘤生長(zhǎng)的影響。(數(shù)據(jù)以均值+ASD表示。)圖18顯示了MOPC315.D3j03研究中mIL-18(SEQIDNO:2)和HERCEPTIN的聯(lián)合療法對(duì)SCID小鼠中MOPC315鼠漿細(xì)胞瘤生長(zhǎng)的影響。(數(shù)據(jù)以中值+ASD表示。)圖19顯示了MOPC315.D3j03研究中來(lái)自mIL-18(SEQIDNO:2)和HERCEPTIN的聯(lián)合療法的SCID小鼠中植入后第24天的MOPC315漿細(xì)胞瘤體積。(數(shù)據(jù)以均值+/-SD表示。)圖20顯示了MOPC315.D3j03研究中來(lái)自mIL-18(SEQIDNO:2)和HERCEPTIN的聯(lián)合療法的SCID小鼠中植入后第24天的MOPC315漿細(xì)胞瘤體積。(數(shù)據(jù)以中值+Z-SD表示。)圖21顯示了接種后第24天mlL-18(SEQIDNO:2)和5-氟尿嘧啶(5-FU)的聯(lián)合療法在同基因鼠Colo26結(jié)腸癌模型中的效果。(數(shù)據(jù)以均值+/-50表示。)圖22顯示了接種后第24天mlL-18(SEQIDNO:2)和5-FU的聯(lián)合療法在同基因鼠Colo26結(jié)腸癌模型中的效果。(數(shù)據(jù)以中值+ASD表示。)圖23顯示了接種后第24天11111^18(SEQIDNO:2)和5-FU的聯(lián)合療法在同基因鼠Colo26結(jié)腸癌模型中的效果，并且為了更好地觀察單獨(dú)的IL-18和與5-FU的組合之間的統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性而排除對(duì)照組。(數(shù)據(jù)以均值+Z-SD表示。)圖24顯示了mlL-18(SEQIDNO:2)和5-FU的聯(lián)合療法在同基因鼠Cob26結(jié)腸癌模型中的效果。(數(shù)據(jù)以中值+/-80表示。)圖25顯示了mIL-l8(SEQIDNO:2)和5-FU的聯(lián)合療法在同基因鼠Cob26結(jié)腸癌模型中的效果。(數(shù)據(jù)以均值+ASD表示。)圖26顯示了接種后第24天11111^-18(SEQIDNO:2)和5-FU的聯(lián)合療法在同基因鼠Colo26結(jié)腸癌模型中的效果。(數(shù)據(jù)以Kaplan-Meyer存活曲線表示。)圖27顯示了小鼠腎癌瘤的晚期同基因模型中植入后第32天mlL-18(SEQIDNO:2)和帕唑帕尼(GW786034)(VEGFR和PDGFR和c-kit酪氨酸激酶的一種抑制劑)的聯(lián)合療法對(duì)腫瘤生長(zhǎng)的影響。(c-Kit受體屬于III型酪氨酸激酶受體，其由胞外配體結(jié)合域和胞內(nèi)激酶域組成。c-Kit受體在極其多種正常的和贅生性的組織中表達(dá))。圖28顯示了小鼠腎癌瘤的晚期同基因模型中植入后第32天mlL-18(SEQIDNO:2)和帕唑帕尼(GW786034)的聯(lián)合療法對(duì)腫瘤生長(zhǎng)的影響。此圖比較所述組合與單獨(dú)的IL-18或帕唑帕尼的單一療法的統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性。圖29顯示了經(jīng)IL-2處理的免疫缺陷小鼠的體重增加，所述小鼠接受來(lái)自EL-4肺瘤存活者或來(lái)自未接觸抗原的對(duì)照的細(xì)胞的過(guò)繼轉(zhuǎn)移。圖30顯示了接種EL-4腫瘤后用IL-2療法處理的Pf^/Rag2接受者小鼠的百分比存活。發(fā)明詳述因?yàn)槟[瘤通常是非免疫原性的，所以臨床前研究的焦點(diǎn)聚焦于IL-18與化療劑或與單克隆抗體的聯(lián)合療法。在組合物中組合兩種不同藥劑(每種藥劑具有不同的腫瘤殺傷機(jī)制)導(dǎo)致協(xié)同性抗腫瘤活性。下文呈現(xiàn)IL-18聯(lián)合療法的4個(gè)例子。實(shí)施例1聚焦于與RITUXAN⑧組合的IL-18在人B細(xì)胞淋巴瘤中的應(yīng)用。此研究的目標(biāo)是調(diào)查IL-18和RITUXAN⑥的組合在人B細(xì)胞淋巴瘤模型中是否提供超過(guò)單獨(dú)的IL-18或RITUXAN⑧的單一療法的益處。利妥昔單抗是一種得到批準(zhǔn)的嵌合單克隆抗體，其由識(shí)別人CD20抗原的鼠抗原結(jié)合位點(diǎn)和人IgGl恒定區(qū)組成。促成利妥昔單抗在體內(nèi)的功效的作用機(jī)制包括結(jié)合至CD20陽(yáng)性淋巴瘤細(xì)胞后對(duì)凋亡的誘導(dǎo)、補(bǔ)體依賴性細(xì)胞毒性(CDC)和抗體依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性(ADCC)。越來(lái)越多的證據(jù)提示，ADCC在施用利妥昔單抗后在消除肺瘤細(xì)胞中發(fā)揮支配性作用。在抗體的恒定(Fc)區(qū)結(jié)合至效應(yīng)細(xì)胞(諸如天然殺傷(NK)細(xì)胞、T細(xì)胞、或單核細(xì)胞/巨噬細(xì)胞譜系的細(xì)胞)表面上的Fc受體后，ADCC被觸發(fā)。因?yàn)镮L-18提升并活化ADCC效應(yīng)細(xì)胞，所以預(yù)期這兩種試劑的組合顯示會(huì)導(dǎo)致卓越抗腫瘤活性的協(xié)同性。利妥昔單抗(RITUXAN⑧)是一種嵌合單克隆抗體，其由識(shí)別人CD20抗原的鼠抗原結(jié)合位點(diǎn)與人IgGl恒定區(qū)融合而組成。CD20抗原在惡性和非惡性B淋巴細(xì)胞上表達(dá)。作為單一藥劑，RITUXAN⑧在NHL中具有顯著活性。RITUXAN⑧是商品化的。多柔比星(Doxorubicin)(阿霉素(adriamycin))是一種商品化的化療劑，并用于治療乳腺癌、淋巴瘤、肉瘤、肺癌、膀胱癌、曱狀腺癌、肝瘤、胃癌、維爾姆斯氏腫瘤、成神經(jīng)細(xì)胞瘤、急性淋巴細(xì)胞性白血病(ALL)、和卵巢癌。實(shí)施例2顯示了EL-4T細(xì)胞淋巴瘤模型中的IL-18與多柔比星的組合。此研究的目標(biāo)是調(diào)查同基因EL-4T細(xì)胞淋巴瘤腫瘤模型中的IL-18與多柔比星的組合，并證明聯(lián)合療法超過(guò)單獨(dú)的IL-18或多柔比星的單一療法的益處。這種同基因模型揭示IL-18對(duì)宿主免疫細(xì)胞的免疫刺激活性的全部益處。因?yàn)檫@兩種試劑具有非常不同的作用機(jī)制，所以它們可以彼此互補(bǔ)，導(dǎo)致抗腫瘤活性升高。有提示的是，化療劑提供直接的細(xì)胞毒性、腫瘤抗原的斷裂和調(diào)控，而IL-18提升并活化效應(yīng)細(xì)胞，導(dǎo)致卓越的抗原呈遞和協(xié)同性抗腫瘤活性。組合物中IL-18與單克隆抗體的組合(例如IL-18與利妥昔單抗(RITUXAN))在晚期腫瘤模型(SCID小鼠異種移植物)中顯示協(xié)同性抗腫瘤活性。利妥昔單抗是一種得到批準(zhǔn)的嵌合單克隆抗體，其由識(shí)別人CD20抗原的鼠抗原結(jié)合位點(diǎn)和人IgG1恒定區(qū)組成。作為單一藥劑的利妥昔單抗在無(wú)痛性非何杰金氏淋巴瘤中具有顯著活性。促成利妥昔單抗體內(nèi)功效的作用機(jī)制包括結(jié)合至CD20陽(yáng)性的淋巴瘤細(xì)胞后對(duì)凋亡的誘導(dǎo)、補(bǔ)體依賴性細(xì)胞毒性(CDC)和抗體依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性(ADCC)。實(shí)施例1中所顯示的臨床前數(shù)據(jù)證明IL-18和利妥昔單抗的組合導(dǎo)致協(xié)同性抗腫瘤活性。因?yàn)槔孜魡慰箖H結(jié)合表達(dá)CD20的人肺瘤細(xì)胞，所以對(duì)抗肺瘤活性的評(píng)估限于SCID小鼠異種移植物模型。認(rèn)為IL-18和利妥昔單抗的抗腫瘤活性和協(xié)同性歸于NK細(xì)胞，它們?cè)赟CID小鼠中應(yīng)答IL-18和鼠CDC而活化。因?yàn)镾CIDS沒(méi)有活化T細(xì)胞的能力，所以不能在此模型中測(cè)試潛在CTL提升和記憶生成的分支(arm)。組合中IL-18與化療劑的組合在治療各種形式的癌癥中可能會(huì)具有有益的治療效果。例如，實(shí)施例2顯示，IL-18與多柔比星的組合在同基因晚期EL4T細(xì)胞淋巴瘤腫瘤模型中具有協(xié)同性抗腫瘤活性。此數(shù)據(jù)^是示，IL-18的作用機(jī)制包括卓越的抗原呈遞，在抗腫瘤活性中起關(guān)鍵作用的抗腫瘤CTL和NK細(xì)胞的擴(kuò)充。基于這些結(jié)果，IL-18與其它化療劑的組合可能會(huì)導(dǎo)致腫瘤消退、肺瘤治愈和對(duì)免疫記憶的誘導(dǎo)。在臨床試驗(yàn)中，顯示IL-18單一療法是安全的、耐受良好的、和有生物學(xué)活性的(如通過(guò)生物標(biāo)志變化所測(cè)量的)。在臨床前，IL-18單一療法僅在免疫^(guò):感性腫瘤模型中起作用。非免疫原性模型僅在IL-18與其它抗癌劑組合時(shí)才顯示抗腫瘤活性。重組鼠IL-18(SEQIDNO:2)已經(jīng)證明了經(jīng)由多種機(jī)制的臨床前抗腫瘤活性，包括CD4+、CD8+、和NK細(xì)胞以及Fas/FasL途徑和細(xì)胞因子/趨化因子(諸如INFy、GM-CSF、IP-IO、MCP-1)的活化，和效應(yīng)細(xì)胞在腫瘤中的浸潤(rùn)及對(duì)免疫記憶的誘導(dǎo)。在我們的臨床前模型中已經(jīng)證明了IL-18的益處，諸如對(duì)溶胞性T細(xì)胞的誘導(dǎo)，活化的NK細(xì)胞和在抗體依賴性細(xì)胞的細(xì)胞毒性(ADCC)中起關(guān)鍵作用的細(xì)胞的擴(kuò)充。下文實(shí)施例調(diào)查IL-18與其它臨床重要癌癥治療的組合是否會(huì)導(dǎo)致增強(qiáng)的抗腫瘤活性，其優(yōu)于單獨(dú)的人IL-18單一療法。本申請(qǐng)例示了IL-18聯(lián)合療法的5個(gè)例子(l)人B細(xì)胞淋巴瘤異種移植物模型中IL-18和RITUXAN⑧的組合；(2)同基因T細(xì)胞淋巴瘤模型中IL-18和多柔比星的組合；(3)鼠漿細(xì)胞瘤模型中IL-18和HERCEPTIN⑧的組合；和(4)鼠結(jié)腸腫瘤模型中IL-18和5-FU的組合；和(5)腎癌瘤的鼠模型中IL-18和帕唑帕尼(VEGFR、PDGFR、和c-kit酪氨酸激酶的一種抑制劑)的組合。所有的這些組合提供超過(guò)單獨(dú)的IL-18、RITUXAN、多柔比星、HERCEPTIN⑧、5-FU或帕唑帕尼的單一療法的益處。與單克隆抗體的組合提供增強(qiáng)殺死腫瘤細(xì)胞的ADCC機(jī)制的潛力。本申請(qǐng)中所公開(kāi)的臨床前數(shù)據(jù)支持這種機(jī)制，并顯示RITUXAN⑧的抗腫瘤活性在與mlL-18(SEQIDNO:2)組合時(shí)得到增強(qiáng)。數(shù)種機(jī)制可能促成RITUXAN⑧的功效；然而，越來(lái)越多的證據(jù)提示，ADCC在施用RITUXAN⑧后在消除肺瘤細(xì)胞中起支配性作用。在抗體的恒定(Fc)區(qū)結(jié)合至效應(yīng)細(xì)胞(諸如天然殺傷(NK)細(xì)胞或單核細(xì)胞/巨噬細(xì)胞譜系的細(xì)胞)表面上的Fc受體后ADCC被觸發(fā)。在人B細(xì)胞淋巴瘤的一種鼠模型中，在缺乏活化性Fc受體的小鼠中RITUXAN⑧的功效被消除。Cartron等，Blood99:754-758(2002);Dall，Ozzo等,CancerRes64:4664-4669(2004);Koene等，Blood90:1109-1114(1997);Weng等，JClinOncol21:3940-3947(2003)。如此，攜帶Fc受體的效應(yīng)細(xì)胞對(duì)于RITUXAN⑧的功效是至關(guān)重要的。CD16(FcyRIIIA)在人體內(nèi)是重要的Fc受體，其由NK細(xì)胞和巨噬細(xì)胞表達(dá)。同上。實(shí)施例l中的數(shù)據(jù)支持如下假設(shè)，即NK細(xì)胞介導(dǎo)的ADCC對(duì)于RITUXAN⑧療法在淋巴瘤患者中的效力是重要的。一種用于改善RITUXAN⑧功效的有希望的策略是施用能51起攜帶Fc受體的效應(yīng)細(xì)胞(包括NK細(xì)胞和單核細(xì)胞/巨噬細(xì)胞語(yǔ)系的細(xì)胞)擴(kuò)充和/或活化的細(xì)胞因子，諸如IL-18。實(shí)施例1中用IL-18與RITUXAN⑧組合進(jìn)行的臨床前小鼠肺瘤模型研究顯示了超過(guò)單一療法的益處。在這種模型中，無(wú)法測(cè)試IL-18的全部益處，因?yàn)樵撃Ｐ鸵髢H具有NK功能細(xì)胞的SCID免疫受損小鼠中的人異種移植物。然而，實(shí)施例l中的數(shù)據(jù)支持的是，這些'ADCCNK效應(yīng)細(xì)胞的擴(kuò)充在IL-18和RITUXAN⑧組合中顯示益處。RITUXAN⑧作為單一療法在所測(cè)試的最高劑量是有活性的。然而，在與mlL-18(SEQIDNO:2)聯(lián)合使用較低劑量的RITUXAN⑧時(shí)能看到類(lèi)似水平的活性，指明兩點(diǎn)，即該模型對(duì)RITUXAN⑧的機(jī)制敏感，和響應(yīng)可以由IL-18增強(qiáng)。認(rèn)為IL-18與其它針對(duì)諸如CD22、CD19、HER2、HER3、EGFR(Erbitux)、IGF-1R、IGF-1R、AXL-1、FGFR、整聯(lián)蛋白受體、CEA、CD44和VEGFR等抗原的單克隆抗體和其它抗血管發(fā)生劑的組合會(huì)顯示相同協(xié)同效應(yīng)。事實(shí)上，進(jìn)一步設(shè)想IL-18與針對(duì)腫瘤細(xì)胞表面上所找到的抗原的其它單克隆抗體的類(lèi)似組合會(huì)以相同方式起作用，所述腫瘤細(xì)胞表達(dá)所生成的單克隆抗體所針對(duì)的受體。理想的是，此類(lèi)受體會(huì)結(jié)合NK細(xì)胞、單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、B細(xì)胞、T細(xì)月包、和任何其它含有Fc受體并參與ADCC效應(yīng)器活性的細(xì)胞。實(shí)施例1和2中的數(shù)據(jù)提示，抗癌劑與IL-18的組合可顯示臨床益處，因?yàn)檫@些組合提供了兩種不同作用機(jī)制一種對(duì)腫瘤細(xì)胞直接作用，而IL-18能夠提升患者的免疫細(xì)胞。這兩種機(jī)制能彼此互補(bǔ)，而且潛在地導(dǎo)致持久的、卓越的抗腫瘤活性，這是由于IL-18產(chǎn)生免疫記憶的能力。總的來(lái)說(shuō)，實(shí)施例l和2證明IL-18與抗腫瘤劑(或是單克隆抗體或是化療劑)的組合導(dǎo)致協(xié)同性和卓越的活性。IL-18與化療劑多柔比星的組合顯示了超過(guò)單獨(dú)的IL-18或多柔比星的卓越抗腫瘤活性。值得注意的是，實(shí)施例2顯示IL-18與多柔比星的組合不破壞響應(yīng)IL-18處理而擴(kuò)充的活化的免疫細(xì)胞。令人驚訝的是，與此相反，實(shí)施例2證明該組合提升活化的T和NK細(xì)胞，并維持它們的溶胞功能。實(shí)施例3是目前正在進(jìn)行的I期臨床方案，用以評(píng)估IL-18與利妥昔單抗組合在CD2(fB細(xì)胞非何杰金氏淋巴瘤(NHL)患者中的安全性和生物學(xué)活性。此研究使用利妥昔單抗與漸增劑量的IL-18組合的標(biāo)準(zhǔn)治療方案以鑒定安全的且可耐受的，而且給出最大限度的生物學(xué)效應(yīng)(如由選定的生物標(biāo)志例如活化的NK細(xì)胞所表明的)的劑量。自此研究選定的劑量會(huì)在將來(lái)的II期研究中使用，所述II期研究評(píng)估IL-18/利妥昔單抗組合在復(fù)發(fā)性濾泡性淋巴瘤患者中的功效。鑒于IL-18在以單一療法給轉(zhuǎn)移性黑素瘤患者施用時(shí)優(yōu)良的安全性和耐受性概況，預(yù)期不會(huì)在本研究中達(dá)到組合的最大限度耐受劑量(MTD);然而，若在非何杰金氏淋巴瘤患者中鑒定出劑量限制性毒性，則將此研究設(shè)計(jì)成限定MTD。實(shí)施例4提供了人IL-18與HERCEPTIN⑧的聯(lián)合療法對(duì)鼠漿細(xì)胞瘤(用ErbB2(HER2)轉(zhuǎn)染的MoPC315細(xì)胞)生長(zhǎng)的分析和數(shù)據(jù)。對(duì)數(shù)據(jù)的詳細(xì)分析揭示IL-18和HERCEPTIN的聯(lián)合療法優(yōu)于單獨(dú)的HERCEPTIN的單一療法?；谶@些數(shù)據(jù)，認(rèn)為人IL-18與腫瘤細(xì)胞上所表達(dá)的抗原的其它抗體會(huì)是有效的治療組合。實(shí)施例5評(píng)估IL-18與5-氟尿嘧啶(5-FU)的聯(lián)合療法的功效，與單獨(dú)的5不1;或111正-18的單一療法相比。5-FU是目前在臨床中作為用于治療結(jié)腸直腸癌和胰腺癌的一線化療劑之一使用的嘧啶類(lèi)似物。然而，這種化療劑具有多種嚴(yán)重的副作用，而且希望使用與其它藥劑的聯(lián)合療法來(lái)降低其劑量的可能性。在BALB/cd、鼠中在鼠結(jié)腸癌瘤的完善建立的同基因皮下模型Colo26中實(shí)施此研究。實(shí)施例5中對(duì)腫瘤體積數(shù)據(jù)的詳細(xì)分析揭示，與對(duì)照組相比，10叫IL-18和75^g5-FU的聯(lián)合療法是對(duì)腫瘤生長(zhǎng)具有顯著效果的唯一處理組。這意味著聯(lián)合療法(75pg/10嗎)優(yōu)于單獨(dú)的5-FU或單獨(dú)的mIL-18的單一療法組，因?yàn)閱我化煼](méi)有顯示好于對(duì)照的治療效果。與IL-18組合的其它化療劑，諸如doxil、托泊替康、改變DNA的藥物(例如卡鉑)、抗代謝物(例如吉西他濱)、阻止細(xì)胞分裂的藥物(例如長(zhǎng)春新堿)和抗血管發(fā)生劑(例如帕唑帕尼)。實(shí)施例6提供了小鼠腎細(xì)胞癌瘤模型中IL-18和帕唑帕尼(GW786034)(VEGFR和PDCFR和c-kit酪氨酸激酶的一種抑制劑)的聯(lián)合療法的功效的研究。c-Kit受體屬于in型酪氨酸激酶受體，其由胞外配體結(jié)合域和胞內(nèi)激酶域組成。c-Kit受體在極其多種正常的和贅生性的組織中表達(dá)。這些數(shù)據(jù)顯示帕唑帕尼與IL-18的組合導(dǎo)致在與每種單獨(dú)的單一療法相比時(shí)在統(tǒng)計(jì)學(xué)上顯著的抗腫瘤活性(協(xié)同性)。實(shí)施例7是解決IL-18作為記憶誘導(dǎo)物的作用的研究，所述記憶會(huì)導(dǎo)致長(zhǎng)期存活和預(yù)防腫瘤復(fù)發(fā)。此實(shí)施例測(cè)試在EL-4腫瘤模型中的功效，其中用鼠IL-18(SEQIDNO:2)和多柔比星的組合處理小鼠。接受存活者淋巴細(xì)胞的EL-4接受者小鼠比接受來(lái)自正常的、未接觸抗原的供體的淋巴細(xì)胞的對(duì)照小鼠存活得顯著更長(zhǎng)。數(shù)據(jù)暗示，來(lái)自存活小鼠的過(guò)繼轉(zhuǎn)移對(duì)EL-4腫瘤接受者具有保護(hù)效應(yīng)。這些數(shù)據(jù)提供EL-4腫瘤存活者中的記憶T細(xì)胞的間接證明(圖29和圖30)。這是一項(xiàng)重要發(fā)現(xiàn)，能使任何化療劑或單抗與IL-18的組合成為優(yōu)于任何單一療法的癌癥治療。對(duì)能將腫瘤識(shí)別為"外來(lái)的"并預(yù)防復(fù)發(fā)的記憶T細(xì)胞的誘導(dǎo)會(huì)是高度有益的，并且具有優(yōu)良安全概況的IL-18是供任何潛在聯(lián)合療法用的藥物。人IL-18多肽披露于EP0692536A2、EP0712931A2、EP0767178A1、和W097/2441。天然人IL-18("hlL-18，，)的氨基酉^f列列于SEQIDNO:l中。人IL-18多肽是干擾素-Y誘導(dǎo)多肽。它們?cè)趯?duì)細(xì)胞介導(dǎo)的免疫的誘導(dǎo)中起主要作用，包括誘導(dǎo)T細(xì)胞和脾細(xì)胞生成干擾素-丫、增強(qiáng)NK細(xì)胞的殺傷活性、和促進(jìn)未接觸抗原WCD4+T細(xì)胞分化成Thl細(xì)胞?？梢酝ㄟ^(guò)公知方法自重組細(xì)胞培養(yǎng)物回收并純化本發(fā)明的多肽，包括硫酸銨或乙醇沉淀、酸提取、陰離子或陽(yáng)離子交換層析、磷酸纖維素層析、疏水相互作用層析、親和層析、羥磷灰石層析、凝集素層析、和高效液相層析。多肽在胞內(nèi)合成、分離和/或純化過(guò)程中變性后，可采用用于重折疊蛋白質(zhì)的公知技術(shù)來(lái)重建活性構(gòu)象。用于純化和生成活性人IL-18的方法在WO01/098455中列出。本發(fā)明還提供了包含人IL-18多肽(SEQIDNO:l)及其組合的藥用組合物。此類(lèi)組合物包含治療有效量的化合物，并可進(jìn)一步包含藥學(xué)可接受的載體、稀釋劑或賦形劑。此類(lèi)藥用載體可以是無(wú)菌的液體，諸如水和油，包括那些石油、動(dòng)物、植物或合成起源的，諸如花生油、大豆油、礦物油、芝麻油等?？稍陟o脈內(nèi)施用藥用組合物時(shí)使用水作為載體。也可采用鹽水溶液和水性右旋糖和甘油溶液作為液體載體，例如用于可注射溶液。合適的藥用賦形劑包括淀粉、葡萄糖、乳糖、蔗糖、明膠、麥芽、稻、面粉、白堊、硅膠、硬脂酸鈉、單硬脂酸甘油酯、滑石、氯化鈉、脫脂奶粉、甘油、丙烯、二醇、水、乙醇等。若想要的話，組合物還可含有少量的潤(rùn)濕劑或乳化劑，或pH緩沖劑。這些組合物可以采取溶液、懸浮液、乳液、片劑、丸劑、膠嚢、粉劑、持續(xù)釋放配制劑等形式。組合物可用傳統(tǒng)的粘合劑和載體(諸如甘油三酸酯)配制成栓劑?？诜渲苿┛砂?biāo)準(zhǔn)的載體，諸如藥用級(jí)的甘露醇、乳糖、淀粉、硬脂酸鎂、糖精鈉、纖維素、碳酸鎂等。合適的藥用載體的例子記載于E.W.Martin的REMINGTON'SPHARMACEUTICALSCIENCES。此類(lèi)組合物會(huì)含有治療有效量的化合物(通常以純化形式)以及合適量的載體，以便提供用于向患者正確施用的形式。配制劑應(yīng)當(dāng)適合施用模式。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，依照常規(guī)規(guī)程將組合物配制成適宜向人類(lèi)靜脈內(nèi)施用的藥用組合物。通常，用于靜脈內(nèi)施用的組合物是無(wú)菌的、等張的水緩沖液中的溶液。在合適的情況中，組合物還可以包括增溶劑和在注射位置減輕疼痛的局部麻醉劑諸如利多卡因(lignocaine)。一般而言，以單位劑量形式分開(kāi)地或混合在一起地提供各成分，例如指明活性劑數(shù)量的密封容器諸如安瓿或小袋(sachette)中的干燥的凍干粉或無(wú)水濃縮液。若通過(guò)輸注來(lái)施用組合物，則其可用含有無(wú)菌的藥用級(jí)水或鹽水的輸液瓶來(lái)分配。若通過(guò)注射來(lái)施用組合物，則可提供一安瓿的無(wú)菌注射用水或鹽水，以便可在施用前混合各成分。因而，可以在藥物制造中使用所述多肽。本發(fā)明的藥物組合物可以配制成供胃腸外施用的溶液或凍干粉。使用前可通過(guò)添加合適的稀釋劑或其它藥學(xué)可接受載體來(lái)使粉末重建。液體配制劑可以是緩沖的、等張的水溶液。合適的稀釋劑的例子是正常的、等張的鹽水溶液、水中的標(biāo)準(zhǔn)的5%右旋糖或緩沖的醋酸鈉或醋酸銨溶液。此類(lèi)配制劑尤其適合于胃腸外施用，但也可用于口服施用或包含于供吸入用的定量吸入器或霧化器中?？赡芟Ｍ虼祟?lèi)藥物組合物添加賦形劑，諸如聚乙烯吡咯烷酮、明膠、羥基纖維素、阿拉伯膠、聚乙二醇、甘露醇、氯化鈉、或檸檬酸鈉。或者，可以以乳劑或糖槳包嚢、制片或制備多肽，供口服施用?？商砑铀帉W(xué)可接受的固體或液體載體以增強(qiáng)或穩(wěn)定組合物，或促進(jìn)組合物的制備。固體載體包括淀粉、乳糖、硫酸鉀二水合物、石膏粉、硬脂酸鎂或硬脂酸、滑石、果膠、阿拉伯膠、瓊脂、或明膠。液體載體包括糖漿、花生油、橄欖油、鹽水、和水。載體還可包括單獨(dú)的或與蠟一起的持續(xù)釋放物質(zhì)，諸如單硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯。固體載體的量有所不同，但是會(huì)在每劑量單位約20mg-約lg之間。藥物制劑遵循常規(guī)藥學(xué)技術(shù)來(lái)制備，對(duì)于片劑形式，在合適時(shí)牽涉碾磨、混合、?；?、和壓緊；或者對(duì)于明膠硬膠嚢形式，牽涉碾磨、混合和填料。在使用液體載體時(shí)，制劑會(huì)處于糖漿、酏劑、乳劑、或水的、或非水的懸浮液形式。這樣的液體配制劑可通過(guò)口(p.o.)直接施用或填充入明膠軟膠嚢中。人IL-18多肽可制備為在藥學(xué)可接受載體中含有有效量的作為活性成分的多肽的藥物組合物。在本發(fā)明的組合物中，可以采用含有多肽的、緩沖于生理學(xué)pH的、準(zhǔn)備好進(jìn)行注射的形式的水懸浮液或溶液。供胃腸外施用的組合物通常會(huì)在藥學(xué)可接受的載體(諸如水性載體)中包含所溶解的本發(fā)明多肽或其混合物的溶液?？梢圆捎枚喾N水性載體，例如0.4%鹽水、0.3%甘氨酸等。這些溶液是無(wú)菌的，且通常沒(méi)有顆粒物。這些溶液可以通過(guò)常規(guī)的、公知的滅菌技術(shù)(例如過(guò)濾)來(lái)滅菌。組合物可以含有接近生理學(xué)條件所要求的藥學(xué)可接受的輔助物質(zhì)，諸如pH調(diào)節(jié)和緩沖劑等。依照選定的特定施用模式，本發(fā)明的多肽在此類(lèi)藥物配制劑中的濃度可以有廣泛變化，即從小于約0.5%,通常為或至少約1。/。，至多達(dá)15或20%(按重量計(jì)算)，并且主要會(huì)根據(jù)液體體積、粘度等來(lái)選擇。如此，用于肌肉內(nèi)注射的本發(fā)明藥物組合物可以制備成含有l(wèi)mL無(wú)菌緩沖水，和約lng-約100mg之間(例如約50ng-約30mg,或約5mg-約25mg)的本發(fā)明多肽。類(lèi)似地，用于供靜脈內(nèi)輸注的本發(fā)明藥物組合物可以制成含有約250mL無(wú)菌Ringer氏溶液，和約lmg-約30mg、或約5mg-約25mg本發(fā)明多肽。用于制備可胃腸外施用的組合物的現(xiàn)行方法是公知的或者對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員會(huì)是顯而易見(jiàn)的，而且更詳細(xì)地記載于例如REMINGTON，SPHARMACEUTICALSCIENCE,第15版，MackPublishingCompany,Easton,Pennsylvania。本發(fā)明的多肽在藥物制劑中制備時(shí)可以以單位劑量形式存在。本領(lǐng)域技術(shù)人員能容易地確定合適的治療有效劑量。若合適的話，可以在響應(yīng)期期間以內(nèi)科醫(yī)生酌情選定的合適時(shí)間間隔重復(fù)這樣的劑量。另外，任選的是，可以采用體外測(cè)定法來(lái)幫助鑒定最佳劑量范圍。配制劑中要采用的精確劑量還會(huì)取決于施用路徑、和疾病或病癥的嚴(yán)重性，并且應(yīng)當(dāng)依照從業(yè)人員的判斷和每名患者的情況決定。有效劑量可以從自體外或動(dòng)物模型測(cè)試系統(tǒng)衍生的劑量-響應(yīng)曲線外推。對(duì)于多肽，給患者施用的劑量通常是0.1mg/kg至100mg/kg患者體重。給患者施用的劑量可以在0.1mg/kg和20mg/kg患者體重之間，或者，lmg/kg至10mg/kg患者體重。一般而言，人多肽具有比來(lái)自其它物種的多肽要長(zhǎng)的人體內(nèi)半衰期，這是由于對(duì)外來(lái)多肽的免疫應(yīng)答。如此，人多肽的較低劑量和較不頻繁的施用通常是有可能的。此外，可通過(guò)修飾諸如例如脂化(lipidation)來(lái)增強(qiáng)抗體的攝取和組織穿透(例如進(jìn)入腦中)，從而降低本發(fā)明多肽的施用劑量和頻率。本發(fā)明還提供了藥物包或試劑盒，其包含裝有本發(fā)明藥物組合物的一種或多種成分的一個(gè)或多個(gè)容器。任選地，此類(lèi)容器可以結(jié)合有由管理藥物或生物學(xué)產(chǎn)品的制備、使用或銷(xiāo)售的政府機(jī)構(gòu)規(guī)定的形式的通知，該通知反映該機(jī)構(gòu)對(duì)針對(duì)人體施用的制備、使用或銷(xiāo)售的批準(zhǔn)。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方孝中，試劑盒可以裝備有滿足用于治療特定適應(yīng)癥的劑量要求所需要的合適數(shù)目的容器。在另一個(gè)實(shí)施方案中，化合物或組合物可以在媒介物(特別是脂質(zhì)體)中投遞(參見(jiàn)Langer，Science249:1527-1533(1990);Treat等，于LIPOSOMESINTHETHERAPYOFINFECTIOUSDISEASEANDCANCER,Lopez-Berestein和Fidler(編)，Liss,NewYork,頁(yè)353-365(1989);Lopez-Berestein,同上，頁(yè)317-327;通常參見(jiàn)同上)。在又一個(gè)實(shí)施方案中，化合物或組合物可以在受控釋放系統(tǒng)中投遞。在一個(gè)實(shí)施方案中，可使用泵(參見(jiàn)Langer,見(jiàn)上文；Sefton,CRCCrit.Ref.Biomed.Eng.14:201(1987);Buchwald等，Surgery88:507(1980);Saudek等,N.Engl.J.Med.321:574(1989))。在另一個(gè)實(shí)施方案中，可使用聚合材料(參見(jiàn)MEDICALAPPLICATIONSOFCONTROLLEDRELEASE,Langer和Wise(編)，CRCPres.,BocaRaton,Fla.(1974);CONTROLLEDDRUGBIOAVAILABILITY,DRUGPRODUCTDESIGNANDPERFORMANCE,Smolen和Ball(編)，Wiley,NewYork(1984);Ranger等，J.,Macromol.Sci.Rev.Mac謹(jǐn)ol.Chem.23:61(1983);還可參見(jiàn)Levy等，Science228:190(1985);During等，Ann.Neurol.25:351(l卿)；Howard等，J.Neurosurg.71:105(1989))。在又一個(gè)實(shí)施方案中，受控釋放系統(tǒng)可放置在治療靶(即腦)的附近，如此僅需要系統(tǒng)劑量的一部分(參見(jiàn)例如Goodson，于MEDICALAPPLICATIONSOFCONTROLLEDRELEASE,見(jiàn)上文，巻2，頁(yè)115-138(1984))。Langer(Science249:1527-1533(1990))的綜述中討論了其它受控釋放系統(tǒng)。人IL-18多肽(SEQIDNO:l)可以通過(guò)任何合適的內(nèi)部路徑施用，而且可以根據(jù)需要重復(fù)，例如頻率為每天l-3次持續(xù)l天-約3周之間至每周一次或兩周一次?；蛘撸筛淖兯鲭囊越档碗姾擅芏?，如此容許口服生物利用度。治療的劑量和持續(xù)時(shí)間與本發(fā)明的分子在人循環(huán)中的相對(duì)持續(xù)時(shí)間有關(guān)，并且可由本領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)所治療的疾患和患者的一般健康來(lái)調(diào)整。本發(fā)明提供了通過(guò)給人患者施用有效量的包含人IL-18多肽(SEQIDNO:l)的本發(fā)明藥物組合物或化合物來(lái)治療、抑制和預(yù)防的方法。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，化合物是基本上純化的(例如基本上沒(méi)有限制其效果或產(chǎn)生不想要的副作用的物質(zhì))?？稍诨衔锇衔乃枋龅亩嚯臅r(shí)采用配制劑和施用方?jīng)i；可從那些下文中所描述的之中選擇別的合適的配制劑和施用路徑。多種投遞系統(tǒng)是已知的，并且可用于施用本發(fā)明的化合物，例如脂質(zhì)體、微粒、微膠嚢中的包嚢，能夠表達(dá)該化合物的重組細(xì)胞、受體介導(dǎo)的胞吞(參見(jiàn)例如Wu等，J.Biol.Chem.262:4429-4432(1987))、構(gòu)建作為逆轉(zhuǎn)錄病毒或其它載體的一部分的核酸等。導(dǎo)入方法包括但不限于真皮內(nèi)、肌肉內(nèi)、腹膜內(nèi)、靜脈內(nèi)、皮下、鼻內(nèi)、硬膜外、和口服路徑?；衔锘蚪M合物可通過(guò)任何常規(guī)路徑，例如通過(guò)輸注或推注，通過(guò)經(jīng)由上皮或粘膜皮膚襯里(mucocutaneouslining)(例如口腔粘膜、直腸粘膜和腸粘膜等)的吸收來(lái)施用，并且可以與其它生物學(xué)活性劑一起施用。施用可以是系統(tǒng)的或局部的。另外，可能想要的是，通過(guò)任何合適的路徑(包括腦室內(nèi)和鞘內(nèi)注射)將本發(fā)明的藥物化合物或組合物導(dǎo)入中樞神經(jīng)系統(tǒng)中；可用例如附接至貯器(諸如Ommaya貯器)的腦室內(nèi)導(dǎo)管來(lái)促進(jìn)腦室內(nèi)注射。還可采用肺部施用，例如通過(guò)使用吸入器或噴霧器和含霧化劑的配制劑實(shí)現(xiàn)。在不背離本發(fā)明的精神或本質(zhì)屬性的前提下，本發(fā)明可以以其它特定的形式體現(xiàn)，因而，應(yīng)當(dāng)參考指明本發(fā)明范圍的所附的權(quán)利要求書(shū)，而非上述i^明書(shū)或下列實(shí)施例。術(shù)語(yǔ)表提供了.下列定義以便于理解上文中頻繁使用的某些術(shù)語(yǔ)。如本文中所使用的，"抗體依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性(ADCC)"和"抗體依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性(ADCC)效應(yīng)器功能"都屬于細(xì)胞介導(dǎo)的免疫的機(jī)制，由此免疫系統(tǒng)的效應(yīng)細(xì)胞活躍地溶解已經(jīng)被特定抗體所結(jié)合的靶細(xì)胞。ADCC是抗體(作為體液免疫應(yīng)答的一部分)可經(jīng)由它們而起作用以限制并遏制感染的機(jī)制之一。經(jīng)典的ADCC是由天然殺傷(NK)細(xì)胞介導(dǎo)的，但是嗜曙紅細(xì)胞使用另一種ADCC來(lái)殺死某些稱為蠕蟲(chóng)的寄生蟲(chóng)。由于ADCC依賴于在先抗體應(yīng)答，其是適應(yīng)性免疫應(yīng)答的一部分。典型的ADCC牽涉NK細(xì)胞的活化，并依賴于NK細(xì)胞表面上的Fc受體對(duì)抗體包被的感染細(xì)胞的識(shí)別。Fc受體識(shí)別結(jié)合至病原體感染的靶細(xì)胞的表面的抗體(諸如IgG)的Fc(恒定的)部分。NK細(xì)胞表面上存在的Fc受體稱為CD16或FcyRHI。一旦結(jié)合至IgG的Fc受體，天然殺傷細(xì)胞便釋放細(xì)胞因子(諸如IFN-y)和細(xì)胞毒性顆粒(諸如穿孔素和粒酶)，它們進(jìn)入靶細(xì)胞并通過(guò)觸發(fā)凋亡來(lái)促進(jìn)細(xì)胞死亡。這種ADCC效應(yīng)器功能類(lèi)似于，但不依賴于細(xì)胞毒性T細(xì)胞(CTL)的應(yīng)答。如本文中所使用的，術(shù)語(yǔ)"載體"指與治療劑一起施用的稀釋劑、佐劑、賦形劑或媒介物。如本文中所使用的，術(shù)語(yǔ)"完全響應(yīng)"指癌癥的所有跡象響應(yīng)治療而消失。本領(lǐng)域技術(shù)人員也稱"完全響應(yīng)"為"完全消退"。在下文實(shí)施例中所采用的模型中，實(shí)現(xiàn)"完全響應(yīng)"的動(dòng)物指可測(cè)量的腫瘤消退至測(cè)量不到的階段。換言之，它意味著動(dòng)物被"治愈"，并表現(xiàn)出健康。"分離的，，指自其天然狀態(tài)"人為"改變的，即若它在自然界中存在，則它已經(jīng)自其最初環(huán)境改變或取出，或改變和取出兩者。例如，在本文中采用該術(shù)語(yǔ)時(shí)，活生物體中天然存在的多核苷酸或多肽不是"分離的"，但是與其天然狀態(tài)中至少一種其共存的細(xì)胞物質(zhì)分開(kāi)的相同多核苷酸或多肽是2"分離的"。此外，通過(guò)轉(zhuǎn)化、遺傳#:作或通過(guò)任何其它重組方法導(dǎo)入生物體中的多核苷酸或多肽是"分離的"，即使它仍存在于所述生物體中，所述生物體可以是活的或無(wú)生命的。如本文中所使用的，術(shù)語(yǔ)"藥用的"包括本發(fā)明的獸醫(yī)應(yīng)用。術(shù)語(yǔ)"治療有效量"指對(duì)緩和選定的疾患有用的治療劑的量。如本文中所使用的，術(shù)語(yǔ)"藥學(xué)可接受的，，意味著獲得聯(lián)邦或州政府管理機(jī)構(gòu)批準(zhǔn)的或美國(guó)藥典或其它普遍認(rèn)可的藥典中所列的在動(dòng)物中，更具體地在人中使用的。"多肽，，指任何包含兩個(gè)或更多個(gè)彼此由肽鍵或修飾的肽鍵(即肽等排體)相連接的氨基酸的多肽。"多肽，，指短鏈(通常稱為肽、寡肽或寡聚物)和較長(zhǎng)的鏈(通常稱為蛋白質(zhì))兩者。多肽可以含有20種基因編碼的氨基酸以外的氨基酸。"多肽，，包括通過(guò)天然過(guò)程(諸如翻譯后加工)或通過(guò)本領(lǐng)域中公知的化學(xué)修飾技術(shù)修飾的氨基酸序列。此類(lèi)修飾詳細(xì)記載于基礎(chǔ)教科書(shū)和更詳細(xì)的專著，以及多巻的研究文獻(xiàn)中。修飾可以在多肽中的任何地方發(fā)生，包括肽主鏈、氨基酸側(cè)鏈和氨基或羧基末端?？梢灶I(lǐng)會(huì)的是，相同類(lèi)型的修飾可以以相同或不同程度存在于給定多肽中的數(shù)個(gè)位點(diǎn)。還有，給定多肽可以含有許多類(lèi)型的修飾。多肽可以由于遍在蛋白化而分支，并且它們可以是環(huán)狀的、有分支的或沒(méi)有分支的。環(huán)狀的、分支的和分支環(huán)狀的多肽可以源自翻譯后天然過(guò)程或者可以通過(guò)合成方法制備。修飾包括乙?；?、酰化、ADP-核糖基化、酰胺化、生物素化、黃素的共價(jià)附著、血紅素模塊的共價(jià)附著、核苷酸或核苷酸衍生物的共價(jià)附著、脂質(zhì)或脂質(zhì)衍生物的共價(jià)附著、磷脂酰肌醇的共價(jià)附著、交聯(lián)、環(huán)化、二硫鍵形成、脫曱基化、共價(jià)交聯(lián)的形成、半胱氨酸的形成、焦谷氨酸的形成、曱?；?、l羧化、糖基化、GPI錨形成、羥基化、碘化、曱基化、肉豆蔻?；?、氧化、蛋白水解加工、磷酸化、異戊烯化、外消旋化、硒化(selenoylation)、硫酸化、轉(zhuǎn)移RNA介導(dǎo)的氨基酸向蛋白質(zhì)的添加(諸如精氨?；?、和遍在蛋白化(參見(jiàn)例如PROTEINS-STRUCTUREANDMOLECULARPROPERTIES,第2版，T.E.Creighton,W.H.FreemanandCompany,NewYork,1993;Wold,F.,Post-translationalProteinModifications:PerspectivesandProspects,1-12,于POST-TRANSLATIONALCOVALENTMODIFICATIONOFPROTEINS,B.C.Johnson,編,AcademicPress,NewYork,1983;Seifter等，MethEnzymol,182，626-646,19卯；Rattan等，Ann.NYAcad.Sci.，663:48-62(1992))。如本文中所使用的，術(shù)語(yǔ)"存活動(dòng)物"指不因自發(fā)的腫瘤相關(guān)死亡而死亡的、或不因腫瘤體積達(dá)到預(yù)先確定的非人道的.巨大體積而實(shí)施安樂(lè)死的、或不因藥物毒性相關(guān)原因而實(shí)施安樂(lè)死的動(dòng)物。生物學(xué)方法/實(shí)施例實(shí)施例l:用于鼠人B細(xì)胞淋巴瘤模型中IL-18與RITUXAN⑧聯(lián)合療法的實(shí)驗(yàn)方案人IL-18(SEQIDNO:l)是大腸桿菌C&c&n'c/2/aco/z')的非病原性菌抹中所表達(dá)的人白介素-18的重組成熟形式。IL-18是18Kd的非糖基化單體，具有與IL-1p和IL-1三葉(trefoil)亞家族最緊密相關(guān)的一級(jí)結(jié)構(gòu)。鼠和人IL-18cDNA編碼由192個(gè)和193個(gè)氨基酸(分別是SEQIDNO:2和1)組成的前體蛋白。IL-18原要求由胱天蛋白酶加工成有生物活性的成熟蛋白質(zhì)(157個(gè)氨基酸)，以便介導(dǎo)其生物學(xué)活性。人和鼠IL-18之間的同源性是65。/。。在下文所概述的臨床前研究中，使用鼠IL-18(SEQIDNO:2)，以便提供體內(nèi)同基因系統(tǒng)，在那里可以分析IL-18的全部免疫學(xué)潛力。在缺乏T細(xì)胞和B細(xì)胞兩者的遠(yuǎn)交雌性純合SCID小鼠(ICR-iVA:^^,中實(shí)施該研究。使用遠(yuǎn)交系與使用近交系相比的優(yōu)點(diǎn)在于遠(yuǎn)交的ICRSCID系不展現(xiàn)泄漏(leakiness)(即使在10-12月齡小鼠中)。給小鼠注射最初自患有伯基特氏淋巴瘤的3歲患者衍生的人RamosB細(xì)胞淋巴瘤系(ATCC目錄，CRL1596)。將腫瘤1:10勻漿物以每只小鼠0.5ml的劑量接種入6-8周齡小鼠中。一周2-3次測(cè)量腫瘤體積，并將小鼠隨機(jī)分配入處理組中以使得各組具有相等的腫瘤體積分配。在每組腫瘤體積中值達(dá)到80-150mm、t(接種腫瘤后第12天時(shí))啟動(dòng)療法。另外，從該研究中排除那些生長(zhǎng)體積在設(shè)置限度以外的腫瘤的小鼠。在第一項(xiàng)研究中，處理組(11=6)包括對(duì)照組(沒(méi)有療法)、3個(gè)RITUXAN⑧I.V.單一療法組(分別為12.5、25、和50ttg/小鼠BIW)、mIL-18S.C.單一療法組(100嗎/小鼠q.d.)、和3個(gè)聯(lián)合療法組，每組分別接受100jig/小鼠IL-18S.C.q.d.加上12.5、25、或50pg/小鼠RITUXAN⑧I.V.。在第二項(xiàng)研究中，劑量給藥由以SID曰程表的100itig/小鼠mlL-18(SEQIDNO:2)和以qd4/3日程表的25和12.5pgRITUXAN⑧組成。動(dòng)物數(shù)目增加至n=12，以便具有測(cè)量統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性的更好窗口。使用viener測(cè)徑器一周2-3次測(cè)量腫瘤體積。在人B細(xì)胞淋巴瘤模型中IL-18和RITUXAN⑧的聯(lián)合療法提供超過(guò)單獨(dú)的IL-18或RITUXAN⑧的單一療法的益處。下文詳述的兩個(gè)實(shí)驗(yàn)顯示聯(lián)合療法在此模型中的統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著益處。在圖3中所捕獲的第一項(xiàng)實(shí)驗(yàn)中，高劑量的RITUXAN⑧(100嗎/劑)顯示了作為單一藥劑療法的強(qiáng)烈抗肺瘤活性，而在較低的劑量(12.5g/劑)，RITUXAN⑧沒(méi)有活性。鼠IL-18(SEQIDNO:2)作為單一藥劑(100嗎/劑)沒(méi)有活性。然而，在與較低劑量的RITUXAN⑥組合時(shí)，mlL-18(SEQIDNO:2)顯示加性/協(xié)同性活性(12.5Mg/劑RITUXAN⑧與100pgmIL-18(SEQIDNO:2)組合)。在使用GraphPadPrism⑧對(duì)數(shù)據(jù)繪圖并分析后，在下圖4和圖5中表明統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性。在這些圖的第一幅(圖4)中，在植入后第19天比較腫瘤體積。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示與未處理對(duì)照組相比所有處理組中腫瘤生長(zhǎng)的顯著降低(*p<0.05,**p<0.01，***p<0.001)。第二幅圖(圖5)顯示了聯(lián)合療法比單獨(dú)的單一療法更有效(統(tǒng)計(jì)學(xué)上顯著的，*p<0.05，**p<0.01)。在第二項(xiàng)實(shí)驗(yàn)中，增加動(dòng)物的數(shù)目(n=12)提供響應(yīng)聯(lián)合療法的加性/協(xié)同性性抗腫瘤活性的更好的統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性。圖6A和圖6B中的圖代表腫瘤生長(zhǎng)體積中值和均值。在植入腫瘤后第27天分析該研究。此研究正在進(jìn)行中，并會(huì)在腫瘤體積中值達(dá)到2000mmS時(shí)終止(ACUC方案)。然而，植入后第27天的數(shù)據(jù)分析(圖7和8)表明與單獨(dú)的RITUXAN⑧(25ng/小鼠)或單獨(dú)的mIL-18(SEQIDNO:2)單一療法(100嗎/小鼠)相比，用聯(lián)合療法(25/腳g/小鼠)處理的小鼠中有肺瘤體積的統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著降低。此臨床前數(shù)據(jù)表明IL-18與利妥昔單抗的組合導(dǎo)致協(xié)同性抗腫瘤活性。利妥昔單抗作為單一療法在所測(cè)試的最高劑量是有活性的。然而，在與鼠IL-18("mIL-l8")聯(lián)合使用較低劑量的利妥昔單抗時(shí)能看到類(lèi)似水平的活性，指明該模型對(duì)利妥昔單抗是敏感的，并且該響應(yīng)可由IL-18增強(qiáng)。鼠IL-18增強(qiáng)利妥昔單抗的活性，推測(cè)通過(guò)提升NK細(xì)胞中的ADCC活性來(lái)實(shí)現(xiàn)。因?yàn)镾CID小鼠缺乏B和T細(xì)胞應(yīng)答兩者，所以IL-18經(jīng)由NK細(xì)胞活化來(lái)提升抗腫瘤應(yīng)答。另外，對(duì)非人靈長(zhǎng)類(lèi)施用IL-18產(chǎn)生體內(nèi)對(duì)NK細(xì)胞和單核細(xì)胞的活化，并導(dǎo)致單核細(xì)胞上Fc受體(FcyRI)的上調(diào)。Herzyk等，Cytokine20:38-48(2002)。在SCID小鼠模型中與HERCEPTINTM聯(lián)合使用IL-18時(shí)也觀察到協(xié)同性抗肺瘤活性，這支持如下假設(shè)，即IL-18經(jīng)由NK細(xì)胞活化來(lái)提高ADCC活性。實(shí)施例2:用于EL-4T細(xì)胞淋巴瘤中IL-18與多柔比星的組合的實(shí)驗(yàn)方案在雌性C57/BL/6小鼠中實(shí)施研究。作為一般性方案，給C57/BL小鼠I.P.注射0.2ccEL-4細(xì)胞儲(chǔ)液。在RPMIw/10。/。FCS中擴(kuò)充EL-4鼠T-淋巴瘤細(xì)胞。將所有的動(dòng)物隨機(jī)化成每研究組6或7只小鼠，無(wú)限制供應(yīng)食物和水。在第0天收獲EL-4細(xì)胞，計(jì)數(shù)，并I.P.植入5xl()S個(gè)EL-4淋巴瘤細(xì)胞。在第3天將動(dòng)物隨機(jī)化成6/7只動(dòng)物的處理組。在植入后第3天和第IO天IV施用多柔比星。在第3-16天S.C.施用mlL-18(SEQIDNO:2)。每天對(duì)動(dòng)物觀察毒性和死亡率。通過(guò)大體觀察，所有的動(dòng)物良好地耐受劑量給藥日程表和水平。第16天，終止所有的劑量給藥，而且媒介死亡中值出現(xiàn)在第17.5天。所有的媒介小鼠在植入后16-18天之間死亡。通過(guò)研究組/媒介組-1xlOO。/。來(lái)計(jì)算壽命的增加。對(duì)于EL-4T細(xì)胞淋巴瘤中mlL-18(SEQIDNO:2)與多柔比星的聯(lián)合療法，在存活時(shí)間中值和壽命增加方面分析數(shù)據(jù)。在攜帶EL-4T細(xì)胞淋巴瘤的雌性C57Bl/6小鼠的同基因腫瘤模型中評(píng)估響應(yīng)mlL-18(SEQIDNO:2)和多柔比星的聯(lián)合療法的壽命延長(zhǎng)。在下文詳述的數(shù)個(gè)實(shí)驗(yàn)中表明聯(lián)合療法超過(guò)單獨(dú)的mlL-18(SEQIDNO:2)或單獨(dú)的多柔比星的單一療法的益處。圖9中表明抗胂瘤活性和壽命延長(zhǎng)的例子。如下文所描述的，在媒介動(dòng)物死亡時(shí)(在第16天)，終止所有的劑量給藥。媒介死亡中值出現(xiàn)在第17.5天，并且所有的媒介小鼠在植入后16-18天之間死亡。這些結(jié)果顯示，在EL-4T細(xì)胞淋巴瘤中多柔比星和mlL-18(SEQIDNO:2)的組合導(dǎo)致協(xié)同性抗腫瘤活性，且存活延長(zhǎng)。多柔比星單一療法在12mg/kg劑量顯示最低限度的壽命延長(zhǎng)。1、5和25ug/劑的各劑量IL-18單一療法沒(méi)有顯示壽命的任何延長(zhǎng)。在12mg/kg多柔比星與25ng/劑量IL-18組合時(shí)，有朝向存活延長(zhǎng)和治愈增加的轉(zhuǎn)變。在用腫瘤再次考驗(yàn)這些動(dòng)物時(shí)，它們顯示保護(hù)作用。然后，發(fā)明人為IL-18和多柔比星的聯(lián)合療法檢查了存活的可預(yù)測(cè)性，認(rèn)識(shí)到為這兩種試劑鑒定會(huì)導(dǎo)致協(xié)同性抗腫瘤活性的最佳劑量會(huì)是有利的。圖IO中顯示了圖9中所顯示的數(shù)據(jù)的存活者概率曲線。對(duì)于這種分析，我們使用了來(lái)自組合或單一療法研究的數(shù)據(jù)，所述組合或單一療法研究使用O、4.2、7.2、12mg/kg劑量的多柔比星，和/或0、1、5、25lig/小鼠劑量的mlL-18(SEQIDNO:2)。曲線圖使用與使死亡風(fēng)險(xiǎn)最小化的治療組合對(duì)應(yīng)的表面概率最大值。在每種治療組合，此表面給出存活至少30天的預(yù)測(cè)概率。在分析淋巴細(xì)胞的生存力、擴(kuò)充、活化和功能性的一組實(shí)驗(yàn)中解決對(duì)響應(yīng)IL-18和多柔比星的聯(lián)合療法的免疫細(xì)胞的影響。在用多柔比星(12mg/kg)、mIL-18(SEQIDNO:2)(25pg/劑)，或者通過(guò)兩者的組合處理的動(dòng)物中測(cè)量淋巴細(xì)胞的表型概況。測(cè)試活化的CD8陽(yáng)性T細(xì)胞、NK和活化的NK的概況，并在圖11A和圖11B中顯示了數(shù)據(jù)。mIL-18(SEQIDNO:2)和多柔比星的組合增力口/維持與單獨(dú)的多柔比星相同數(shù)目的活化的CD8陽(yáng)性T細(xì)胞(CTL)、NK和活化的NK細(xì)胞。這些細(xì)胞可在細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性(特異性腫瘤殺傷)中發(fā)揮關(guān)鍵作用。與脾細(xì)胞相比，響應(yīng)多柔比星/IL-18組合的活化的CD8陽(yáng)性T細(xì)胞和NK細(xì)胞的增強(qiáng)在循環(huán)PBL中得到更多的增強(qiáng)。運(yùn)行一個(gè)實(shí)驗(yàn)以顯示多柔比星沒(méi)有降低IL-18增強(qiáng)的NK細(xì)胞活性(非特異性腫瘤殺傷)是重要的。圖12表明NK細(xì)胞毒性在僅用多柔比星處理的動(dòng)物中受到損害，而接受單獨(dú)的或與多柔比星的組合的mlL-18(SEQIDNO:2)的動(dòng)物都顯示強(qiáng)烈的NK細(xì)胞毒性。實(shí)施例3:用于IL-18與利妥昔單抗的組合的I期臨床試驗(yàn)的方案此I期是與標(biāo)準(zhǔn)利妥昔單抗療法組合的人IL-18的標(biāo)簽公開(kāi)的(open-label)、劑量遞增(dose-escalation)研究，其調(diào)查12劑每周一次上升劑量(l-100嗎/kg)的人IL-18(SEQIDNO:i;M^CD20+B細(xì)胞NHL受試者中的安全性和耐受性。利妥昔單抗和人IL-18(SEQIDNO:l)的劑量給藥是交錯(cuò)的。因此，在第l-4周的第l天，受試者每周一次地接受利妥昔單抗(375mg/m、的IV輸注。在第1-4周的第2天和第5-12周的第2天(+/-1天)，以每周一次的IV輸注物施用人IL-18(SEQIDNO:l)。人IL-18(SEQIDNO:l)的起始劑量是l嗎/kg,并且計(jì)劃將劑量擴(kuò)大進(jìn)行至名義上的最大限度劑量100嗎/kg。每個(gè)分組(cohort)內(nèi)的劑量給藥是交錯(cuò)的，其中一名受試者在第l天接受首劑利妥昔單抗，在第2天接受首劑人IL-18(SEQIDN0:1),然后內(nèi)部監(jiān)測(cè)至少24小時(shí)。若沒(méi)有安全性或耐受性顧慮，則在至少24小時(shí)后給分組內(nèi)的下一名受試者服藥，并也會(huì)在其人IL-18(SEQIDNO:l)首劑后內(nèi)部監(jiān)測(cè)24小時(shí)。在隨后的各周(第2周-第12周)，人IL-18月艮藥后對(duì)受試者監(jiān)測(cè)6小時(shí)，然后可以自臨床釋放。所有受試者相隔至少2小時(shí)進(jìn)行給藥?？梢栽谌魏畏纸M中每天給不超過(guò)兩名受試者服藥。以首劑水平(l嗎/kg/周)處理3名受試者。若完成分組中的劑量給藥后沒(méi)有與研究藥物具有"懷疑的，，或"可能的，，關(guān)系的、大于等級(jí)2的毒性的證據(jù)(即所有3名受試者都完成了第l周-第6周的研究)，則在每個(gè)隨后的分組中以下列劑量水平處理3名受試者3嗎/kg/周、10嗎/kg/周、20^ig/kg/周、30嗎/kg/周、和100嗎/kg/周。對(duì)于利妥昔單抗的所有輸注，整個(gè)劑量投遞(自輸注啟動(dòng)至輸注結(jié)束)必須不小于4小時(shí)。人IL-18輸注在2小時(shí)期間里發(fā)生。本研究的目標(biāo)是確定人11^-18在。020+B細(xì)胞淋巴瘤受試者中與標(biāo)準(zhǔn)利妥昔單抗處理聯(lián)合使用時(shí)安全的最大限度生物學(xué)有效劑量。為了對(duì)人IL-18(SEQIDNO:l)評(píng)估劑量-響應(yīng)相關(guān)性(發(fā)現(xiàn)其在先前的I期研究中是鐘形的)，使用1-100嗎/1^的劑量范圍來(lái)檢查〔020+B細(xì)胞淋巴瘤患者中的生物學(xué)活性范圍的下端(低劑量)和上端(中程或高劑量)。利妥昔單抗的劑量是批準(zhǔn)用fCD20+B細(xì)胞NHL患者的標(biāo)簽中所推薦的標(biāo)準(zhǔn)方案。.根據(jù)來(lái)自牽涉腎細(xì)胞癌瘤和轉(zhuǎn)移性黑素瘤患者的研究的先前的I期安全性、藥動(dòng)學(xué)、和藥效學(xué)數(shù)據(jù)選擇人IL-18(SEQIDNO:l)的劑量。要在本研究中使用的利妥昔單抗劑量是批準(zhǔn)用于CD2(TB細(xì)胞NHL患者的標(biāo)簽中所推薦的標(biāo)準(zhǔn)方案。根據(jù)來(lái)自牽涉腎細(xì)胞癌瘤和轉(zhuǎn)移性黑素瘤患者的研究的先前的I期安全性、藥動(dòng)學(xué)、和藥效學(xué)數(shù)據(jù)選擇人IL-18(SEQIDNO:l)的劑量。Robertson等,Proc.Am.Soc.Clin.Oncol.22:178(摘要713)(2003);Robertson等，J.Clin.Oncol.22:176s(摘要2553)(2004);Robertson等,J.Clin.Oncol.23:169s(摘要2513)(2005);Koch等，J.Clin.Oncol.23:174s(摘要2535)(2005);Koch等，Eur.J.Cancer4(12):86(270)(2006)。所測(cè)試的最高劑量(每周一次施用2000mg/kg，可長(zhǎng)至24周)沒(méi)有產(chǎn)生顯著的毒性，使得沒(méi)有鑒定出最大限度的耐受劑量；因此，使用藥效學(xué)數(shù)據(jù)來(lái)為本研究選擇劑量范圍的上限。所測(cè)試的最高劑量(每周一次施用2000mg/kg、可長(zhǎng)至24周)沒(méi)有產(chǎn)生顯著的毒性，使得沒(méi)有鑒定出最大限度的耐受劑量；因此，使用藥效學(xué)數(shù)據(jù)來(lái)為本研究選擇劑量范圍的上限。實(shí)施例4:小鼠漿細(xì)胞瘤模型中的IL-18和HERCEPTIN⑧組合分析MOPC315.D3j005和MOPC.D3j03研究?jī)烧咭栽u(píng)估鼠IL-18(SEQIDNO:2)與HERCEPTIN的聯(lián)合療法對(duì)鼠漿細(xì)胞瘤生長(zhǎng)的影響。對(duì)于此實(shí)驗(yàn)，我們必須用ErbB2(HER2)轉(zhuǎn)染MoPC315細(xì)胞。為了轉(zhuǎn)染，我們?cè)?孔板中使用1.5ugErbB2表達(dá)載體(BioCat-108912-pcdna3.1(-)ErbB2),4吏用用來(lái)自Gibco的LipofectamineTM和OptimemTM培養(yǎng)基進(jìn)行的脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染，如所描述的。2天后，將選擇壓力新霉素(450ug/mlG418SigmaG6816)添加至培養(yǎng)物。通過(guò)對(duì)用Alexafluor488標(biāo)記的HERCEPTIN單克隆抗體染色的原位培養(yǎng)物的熒光顯微鏡檢查來(lái)選擇最初的陽(yáng)性群體，并通過(guò)有限稀釋來(lái)克隆(206434p70-72)。用Alexafluor488標(biāo)記的HERCEPTIN⑧流式細(xì)胞術(shù)測(cè)試D3ErbB2表達(dá)。選擇MOPC.D3細(xì)胞系，并用于評(píng)估1^110￡丁^^)和化-18抗腫瘤功效。測(cè)量抗腫瘤活性，并且對(duì)數(shù)據(jù)的詳細(xì)分析揭示IL-18和HERCEPTIN⑧的聯(lián)合療法優(yōu)于單獨(dú)的HERCEPTIN⑥的單一療法。值得注意的是，這種差異是統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著的且強(qiáng)烈的；它是使用非參數(shù)檢驗(yàn)確定的，所述非參數(shù)檢驗(yàn)在確定統(tǒng)計(jì)學(xué)差異上不太靈^:且不太有力。對(duì)數(shù)據(jù)的詳細(xì)分析揭示IL-18和HERCEPTIN的聯(lián)合療法優(yōu)于單獨(dú)的HERCEPTIN⑧的單一療法。值得注意的是，這種差異是統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著的且強(qiáng)烈的；它是使用非參數(shù)檢驗(yàn)確定的，所述非參數(shù)檢驗(yàn)在確定統(tǒng)計(jì)學(xué)差異上不太靈敏且不太有力。a.研究弁MOPC315.D3j005本研究采用mlL-18(SEQIDNO:2)和HERCEPTIN⑧(一種抗Her2/neu受體抗體)的組合，目標(biāo)在于在臨床試驗(yàn)中在乳腺癌中使用此療法。在完善建立的鼠漿細(xì)胞瘤細(xì)胞系MOPC315中測(cè)試if關(guān)合療法。腫瘤系自ATCC獲得，并在內(nèi)部用Her2受體轉(zhuǎn)導(dǎo)。這種腫瘤系是BALB/c同基因細(xì)胞系。施藥如下鼠IL-18(SEQIDNO:2)(畫(huà)嗎/小鼠q.d"s.c.)、HERCEPTIN(200、100或50嗎/小鼠，一周兩次，i.v.)。腫瘤開(kāi)始生長(zhǎng)后'(其是在植入后第14天)啟動(dòng)MOPC315.D3j005研究中的處理。圖13和圖14中顯示了本研究的結(jié)果，以均值+ASD(圖13)和中值+/-范圍(圖14)表示數(shù)據(jù)。我們首先進(jìn)行檢查以證實(shí)數(shù)據(jù)是否遵循正態(tài)分布(高斯近似)，并且我們比較標(biāo)準(zhǔn)偏差值以確保有相等的方差(即圖14和圖15)。我們發(fā)現(xiàn)原始數(shù)據(jù)有正態(tài)分布，然而處理組之間的標(biāo)準(zhǔn)偏差是高度可變的(大于3x),因此我們不能使用參數(shù)檢驗(yàn)(諸如ANOVA)進(jìn)行分析。我們使用loglO和ln來(lái)轉(zhuǎn)換數(shù)據(jù)以察看轉(zhuǎn)換后的數(shù)據(jù)是否通過(guò)正態(tài)性和等方差檢驗(yàn)(下文所展示的樣品分析一一針對(duì)第24天的選定組)。轉(zhuǎn)換后的數(shù)據(jù)沒(méi)有通過(guò)正態(tài)性檢驗(yàn)。因此，我們選擇非參數(shù)檢驗(yàn)(Kruskal-Wallis分析)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)評(píng)估。圖13和圖14中顯示了詳細(xì)的數(shù)據(jù)和p值。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析揭示，mIL-18(SEQIDNO:2)和HERCEPTIN⑧的聯(lián)合療法好于單獨(dú)的HERCEPTIN的單一療法。圖15顯示了服用單獨(dú)的HERCEPTIN200)ag/小鼠的組和用HERCEPTIN㊣200嗎/小鼠和人IL-18100pg/小鼠兩者處理的組之間的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(Kruskal-Wallis分析，p<0.05)。圖16顯示了與單獨(dú)的HERCEPTIN⑧和IL-18相比，HERCEPTIN⑧和IL-18的聯(lián)合處理顯示最好的抗腫瘤活性窗。b.研究#MOPC.D3J03本研究與上文MOPC315.D3J005研究(實(shí)施例4.a.)相同，只是本療法在腫瘤在宏觀上變得明顯前開(kāi)始，即植入后第7天。另外，在本研究中，HERCEPTIN的最大劑量是100嗎/小鼠，而最小劑量是25嗎/小鼠。數(shù)據(jù)以均值+ASD(圖17)和中值+/-范圍(圖18)表示。我們首先檢查數(shù)據(jù)是否遵循正態(tài)分布(高斯近似)，并且我們比較標(biāo)準(zhǔn)偏差值以確保通過(guò)等方差4僉驗(yàn)。我們發(fā)現(xiàn)原始數(shù)據(jù)不遵循正態(tài)分布；轉(zhuǎn)換后的數(shù)據(jù)(logl0或ln)也不遵循高斯分布，它們也沒(méi)有通過(guò)等方差檢驗(yàn)。因此我們不能使用參數(shù)檢驗(yàn)(諸如ANOVA),并且我們選擇非參數(shù)檢驗(yàn)(Kruskal-Wallis分析)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)評(píng)估。下文圖19和圖20中顯示了詳細(xì)的數(shù)據(jù)和p值。總之，本研究的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析揭示，mIL-18(SEQIDNO:2)和HERCEPTIN的聯(lián)合療法好于單獨(dú)的HERCEPTIN⑧的單一療法。圖19和圖20中的圖顯示了與單獨(dú)的HERCEPTIN⑧(100嗎/小鼠)的單一療法相比，聯(lián)合療法組(mlL-18(SEQIDNO:2)100嗎/小鼠和HERCEPTIN⑧100嗎/小鼠)中的腫瘤消退顯著更好。作為單一療法的HERCEPTIN⑧具有最低限度的活性，然后其由IL-18聯(lián)合處理提升。因?yàn)镠ER2被轉(zhuǎn)染入細(xì)胞中，所以HERCEPTIN⑧僅能提供對(duì)HER2的結(jié)合，但是沒(méi)有誘導(dǎo)凋亡(腫瘤細(xì)胞死亡)。因此，抗肺瘤活性是聯(lián)合療法的結(jié)果，其中IL-18提升在ADCC和CDC活性中發(fā)揮關(guān)鍵作用的細(xì)胞(通過(guò)IL-18處理提升的細(xì)胞)，而HERCEPTIN提供對(duì)HER2的特異性結(jié)合并充當(dāng)ADCC/CDC靶物。實(shí)施例5:在鼠結(jié)腸癌的同基因模型Colo26中對(duì)IL-18和5-氟尿嘧啶(5-FU)聯(lián)合療法的分析本研究的目的是與單獨(dú)的5-FU或mlL-18(SEQIDNO:2)的單一療法相比，評(píng)估m(xù)lL-18(SEQIDNO:2)與5-氟尿嘧啶(5-FU)的聯(lián)合療法的功效。在BALB/c小鼠中在鼠結(jié)腸癌瘤的完善建立的同基因皮下模型Colo26中實(shí)施我們的研究。接種腫瘤后第10天-第30天每天以鼠皮下實(shí)施mlL-18(SEQIDNO:2)的劑量給藥。以上升的劑量27、45和74pg/小鼠一周兩次地腹膜內(nèi)實(shí)施5-FU的劑量給藥。對(duì)腫瘤體積數(shù)據(jù)的詳細(xì)分析揭示，與對(duì)照組相比，10ngmlL-18(SEQIDNO:2)和75pg5-FU的聯(lián)合療法是唯一對(duì)腫瘤生長(zhǎng)具有顯著效果的處理組。這意味著聯(lián)合療法(75pg/l(Hig)優(yōu)于單獨(dú)的5-FU或單獨(dú)的mlL-18(SEQIDNO:2)的單一療法組，因?yàn)閱我化煼](méi)有顯示好于對(duì)照的治療效果。重要的是，知道這種差異是統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著的且強(qiáng)烈的一一它是使用非參數(shù)檢驗(yàn)確定的，所述非參數(shù)檢驗(yàn)在確定統(tǒng)計(jì)學(xué)差異上不太靈敏且不太有力。另外，存活分析表明聯(lián)合療法(75)ig/10嗎)顯著好于單一療法組(75ng)。顯著性是極強(qiáng)烈的，且p〈0扁l。在選定的代表性時(shí)間點(diǎn)評(píng)估比較不同處理組中的月中瘤體積的數(shù)據(jù)，并以均值+ASD(圖21)和中值+/-范圍(圖22)表示。首先對(duì)數(shù)據(jù)檢查正態(tài)分布(高斯近似)，并比較標(biāo)準(zhǔn)偏差值以確保有相等的方差。然后，一些原始數(shù)據(jù)的分布不遵循高斯曲線，處理組之間的標(biāo)準(zhǔn)偏差也是高度可變的(大于3x),因此參數(shù)斗全驗(yàn)不能用于分析。使用logl0轉(zhuǎn)換數(shù)據(jù)，并且它們?nèi)詻](méi)有通過(guò)正態(tài)性和等方差檢驗(yàn)(下文所展示的樣品分析一一針對(duì)選定組)。因此，使用非參數(shù)檢驗(yàn)(Kruskal-Wallis分析和Dunn氏比較檢驗(yàn))進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)評(píng)估。在下文圖23的圖中顯示了詳細(xì)的數(shù)據(jù)和p值。圖24(中值+ASD)和圖25(均值+ASD)顯示了IL-18和5-FU聯(lián)合療法在相同的Colo26同基因結(jié)腸腫瘤模型中的效果。清楚的是，在腫瘤體積達(dá)到80-100mmS之間大小(晚期腫瘤模型)時(shí)，用單獨(dú)的IL-18、單獨(dú)的5-FU或兩種藥物的聯(lián)合處理動(dòng)物。圖26中呈現(xiàn)了聯(lián)合處理的抗腫瘤活性和協(xié)同性的較好視圖。在Kaplan-Meyer存活曲線分析中將不同處理組中攜帶Colo26的小鼠的存活繪圖，通過(guò)Logrank檢驗(yàn)評(píng)估，并顯示于圖26中。處理組之間在存活方面有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，其中最好的組是10嗎mIL-18(SEQIDNO:2)和75)Ug5-FU的聯(lián)合療法。實(shí)施例6:IL-18和帕唑帕尼(GW786034)的聯(lián)合療法在小鼠腎細(xì)胞癌瘤模型中的功效本研究(RENJ02研究)測(cè)試mlL-18(SEQIDNO:2)和帕唑帕尼(VEGFR和PDGFR和c-kit酪氨酸激酶的一種抑制劑)的聯(lián)合療法在小鼠腎癌瘤的晚期同基因模型中的功效。這種動(dòng)物模型是鼠皮下實(shí)體腎癌瘤模型。將與BALB/c小鼠同基因的鼠RENCA細(xì)胞系植入BALB/c接受者中。在下表l中描繪了所采用的劑量給藥日程表。在第14天-第42天每天一次皮下給藥IL-18。在第14天-第42天每天一次口服給藥帕唑帕尼。首先，對(duì)于統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，確定各組之間用于比較的良好時(shí)間點(diǎn)。然后，對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行正態(tài)性檢驗(yàn)以確定適于分析的統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)。選擇第32天作為代表性時(shí)間點(diǎn)(到此時(shí)間點(diǎn)，一些小鼠因毒性或腫瘤大小不得不實(shí)施安樂(lè)死，因此各組顯示5-7只小鼠，雖然最初每組以7只小鼠開(kāi)始)。數(shù)據(jù)沒(méi)有顯示高斯(正態(tài))分布，因此使用非參數(shù)檢驗(yàn)。確定單一療法和聯(lián)合療法之間的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，并顯示于圖28中，即使不得不使用非參數(shù)檢驗(yàn)(檢測(cè)差異的能力比參數(shù)4企驗(yàn)低)。用于評(píng)估的統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件包括PrismGraphPad和SigmaStat。表l<table>tableseeoriginaldocumentpage32</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage33</column></row><table>圖28分析與圖27相同的數(shù)據(jù)。不過(guò)，在圖28中，不包括對(duì)照組。完成這幅額外的圖以通過(guò)僅僅比較單一療法和聯(lián)合療法組來(lái)實(shí)施"清潔"(cleaner)顯著的抗肺瘤活性。實(shí)施例7:解決IL-18作為會(huì)導(dǎo)致長(zhǎng)期存活和預(yù)防胂瘤復(fù)發(fā)的記憶的誘導(dǎo)物的作用我們通過(guò)在EL-4肺瘤模型中測(cè)試功效來(lái)解決此疑問(wèn)，其中通過(guò)鼠IL-18(SEQIDN0:2)和多柔比星的組合來(lái)治療小鼠。那些治愈的小鼠在用腫瘤再次考驗(yàn)時(shí)對(duì)腫瘤成活(take)/生長(zhǎng)有抗性，提示它們具有由IL-18和多柔比星處理所誘導(dǎo)的記憶機(jī)制。下文實(shí)驗(yàn)中呈現(xiàn)EL-4腫瘤小鼠中T記憶細(xì)胞的存在，所述EL-4腫瘤小鼠存活且它們的腫瘤通過(guò)IL-18和多柔比星處理而治愈(圖29和圖30)。此實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)如下尸》/Rag2小鼠(NK細(xì)胞和CTL活性嚴(yán)重消減的7/26單倍型)接受來(lái)自經(jīng)IL-2'(每只小鼠3000Uq.d.,s.c.)處理的存活者，或?qū)φ誄57BL/6小鼠(存活者和對(duì)照小鼠都接受IL-2)的2.5xl(T個(gè)脾和淋巴結(jié)細(xì)胞的過(guò)繼轉(zhuǎn)移。過(guò)繼轉(zhuǎn)移后2周，用EL-4腫瘤細(xì)胞考驗(yàn)所有的小鼠(EL-4是致癌原誘導(dǎo)的、C57BL/6(H2b)起源的小鼠淋巴瘤)。過(guò)繼轉(zhuǎn)移后(過(guò)繼轉(zhuǎn)移當(dāng)天開(kāi)始)用IL-2(每只小鼠3000Uq.d.，s.c.)處理所有受體達(dá)3天。有目的地選擇接受者系，以具有與所接種的腫瘤相同的遺傳背景。記錄小鼠的重量和存活以建立重量減輕/增加的時(shí)間線(time-line),并在接種EL-4后的各周期間觸摸腹腔以確定可觸知的腫瘤塊的存在。以可獲得的最大數(shù)量購(gòu)買(mǎi)尸》/iag2小鼠——4只雄性和4只雌性。我們還有自先前研究剩下的2只較老的小鼠。為了盡可能多地增加每組樣品的數(shù)目，我們決定利用所有這些小鼠為了避免性別和年齡對(duì)結(jié)果的影響，使性別和年齡在兩組之間均勻分布一組接受來(lái)自EL-4存活者的淋巴細(xì)胞，而另一組接受來(lái)自正常對(duì)照B6小鼠的細(xì)胞。結(jié)果指明EL-4考-瞼后的第一周期間兩組小鼠間在重量方面沒(méi)有顯著性差異，并且所有小鼠的重量增加停滯(圖29)。此結(jié)果可能是由于如下實(shí)情,即前3天期間所有小鼠都接受IL-2s.c.來(lái)加強(qiáng)它們的免疫應(yīng)答。EL-4考驗(yàn)后的第2周和第3周期間，我們?cè)趯?duì)照組中觀察到快速的體重增加和可觸知的腫瘤和/或腹水形成。所有的對(duì)照小鼠在2周內(nèi)死亡，然而所有的存活者細(xì)胞接受者存活，雖然2只(5只中的)在腹部具有可觸知的腫瘤。由于腫瘤的快速生長(zhǎng)，出于^f侖理原因，不得不對(duì)一只小鼠實(shí)施安樂(lè)死。表2過(guò)繼轉(zhuǎn)移的來(lái)源(IL匿2s.c.3000IU/m3天)細(xì)胞數(shù)目用IL-2s.c.3000IU/m處理接受者3天對(duì)EL-4的易感性經(jīng)IL-18和Dox處理的C57BL/6存活者2.5x107曰疋受保護(hù)的正常的C57BL/6小鼠2.5x107是不受保護(hù)的表2顯示了關(guān)于經(jīng)IL-18/多柔比星處理的小鼠中(與正常對(duì)照動(dòng)物相比)針對(duì)腫瘤考驗(yàn)的保護(hù)的發(fā)現(xiàn)的匯總表。接受來(lái)自經(jīng)IL-18/多柔比星處理的動(dòng)物的淋巴細(xì)胞的小鼠受到保護(hù)，而來(lái)自對(duì)照動(dòng)物的淋巴細(xì)胞顯示腫瘤成活(take)/生長(zhǎng)。.接受存活者淋巴細(xì)胞的EL-4接受者小鼠比接受來(lái)自未接觸抗原的正常供體的淋巴細(xì)胞的對(duì)照小鼠存活得顯著更長(zhǎng)。數(shù)據(jù)暗示來(lái)自存活者小鼠的過(guò)繼轉(zhuǎn)移對(duì)EL-4腫瘤接受者具有保護(hù)效果。這些數(shù)據(jù)提供了EL-4腫瘤存活者中記憶T細(xì)胞的間接證明(圖29和圖30)。這是一項(xiàng)重要的發(fā)現(xiàn)，其能使任何化療劑或單抗與IL-18的組合成為優(yōu)于任何單一療法的癌癥治療。對(duì)能將腫瘤識(shí)別為"外來(lái)的"并預(yù)防復(fù)發(fā)的記憶T細(xì)胞的誘導(dǎo)會(huì)是高度有益的，并且具有優(yōu)良安全性概況的IL-18是供任何潛在聯(lián)合療法用的藥物。3權(quán)利要求1.一種在有所需要的患者中治療癌癥的方法，包括分開(kāi)給所述患者施用包含如下各項(xiàng)的組合物的步驟(i)與載體組合的人IL-18多肽(SEQIDNO1)；和(ii)針對(duì)癌細(xì)胞表面上所表達(dá)的抗原的單克隆抗體，其中所述抗體具有抗體依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性(ADCC)效應(yīng)器功能，且其中所述抗體不是抗CD20抗體。2.權(quán)利要求l的方法，其中包含所述人IL-18多肽(SEQIDNO:l)和所述單克隆抗體的組合物的施用是同時(shí)的。3.權(quán)利要求l的方法，其中包含所述人IL-18多肽(SEQIDNO:l)和所述單克隆抗體的組合物的施用是序貫的，且其中首先施用所述人IL-18多肽(SEQIDNO:1)。4.權(quán)利要求l的方法，其中包含所述人IL-18多肽(SEQIDNO:l)和所述單克隆抗體的組合物的施用是序貫的，且首先施用所述單克隆抗體。5.權(quán)利要求l的方法，其中所述抗原選自下組CD22、CD19、HER2、HER3、EGFR、IGF-1R、AXL-1、FGFR、6.整聯(lián)蛋白受體、CEA、CD44、和VEGFR。7.權(quán)利要求5的方法，其中所述抗原是HER-2，且所述單克隆抗體是HERCEPTIN⑧。8.權(quán)利要求l的方法，其中所述癌癥選自下組何杰金氏淋。瘤、B細(xì)胞非何杰金氏淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、T細(xì)胞非何杰金氏淋巴瘤、AML、CLL、MM、其它白血病、卵巢癌、乳腺癌、肺癌、肉瘤、膀胱癌、胰腺癌、甲狀腺癌、肝瘤、胃癌、維爾姆斯氏腫瘤、成神經(jīng)細(xì)胞瘤、成膠質(zhì)細(xì)胞瘤和其它腦瘤、結(jié)腸癌、直腸癌、前列腺癌、黑素瘤、腎細(xì)胞癌和皮膚癌。9.一種在有所需要的患者中治療癌癥的方法，包括分開(kāi)給所述患者施用包含如下各項(xiàng)的組合物的步驟(i)與載體組合的人IL-18多肽(SEQIDNO:1);和(ii)4b療劑。10.權(quán)利要求9的方法，其中包含所述人IL-18多肽(SEQIDNO:l)和所述化療劑的組合物的施用是同時(shí)的。11.劑的組合物的施用是序貫的，且其中首先施用所述人IL-18多肽(SEQIDNO:l)。12.權(quán)利要求9的方法，其中包含所述人IL-18多肽(SEQIDNO:l)和所述化療劑的組合物的施用是序貫的，且其中首先施用所述化療劑。13.權(quán)利要求9的方法，其中所述化療劑選自下組Doxil、托泊替康、改變DNA的藥物、卡鉑、抗代謝物、吉西他濱、阻止細(xì)胞分裂的藥物、長(zhǎng)春新堿、抗血管發(fā)生劑、和帕唑帕尼。14.權(quán)利要求9的方法，其中所述癌癥選自下組何杰金氏淋巴瘤、B細(xì)胞非何杰金氏淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、T細(xì)胞非何杰金氏淋巴瘤、AML、CLL、MM、其它白血病、卵巢癌、乳腺癌、肺癌、肉瘤、膀胱癌、胰腺癌、曱狀腺癌、肝瘤、胃癌、維爾姆斯氏腫瘤、成神經(jīng)細(xì)胞瘤、成膠質(zhì)細(xì)胞瘤和其它腦瘤、結(jié)腸癌、直腸癌、前列腺癌、黑素瘤、腎細(xì)胞癌和皮膚癌。15.—種在有所需要的患者中治療癌癥的方法，所述方法包括給所述患者施用包含與化療劑組合的人IL-18(SEQIDNO:l)的組合物的步驟，由此所述治療導(dǎo)致所述患者中的長(zhǎng)期存活和/或?qū)Π┌Y復(fù)發(fā)的預(yù)防和對(duì)免疫記憶的誘導(dǎo)。16.權(quán)利要求15的方法，其中所述化療劑選自下組Doxil、托泊替康、改變DNA的藥物、卡鉑、抗代謝物、吉西他濱、阻止細(xì)胞分裂的藥物、長(zhǎng)春新石威、抗血管發(fā)生劑、和帕唾帕尼。17.權(quán)利要求15的方法，其中所述癌癥選自下組何杰金氏淋巴瘤、B細(xì)胞非何杰金氏淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、T細(xì)胞非何杰金氏淋巴瘤、AML、CLL、MM、其它白血病、卵巢癌、乳腺癌、肺癌、肉瘤、膀胱癌、胰腺癌、甲狀腺癌、肝瘤、胃癌、維爾姆斯氏腫瘤、成神經(jīng)細(xì)胞瘤、成膠質(zhì)細(xì)胞瘤和其它腦瘤、結(jié)腸癌、直腸癌、前列腺癌、黑素瘤、腎細(xì)胞癌和皮l夫癌。18.—種在有所需要的患者中治療癌癥的方法，所述方法包括給所述患者施用包含與針對(duì)癌細(xì)胞表面上所表達(dá)的抗原的單克隆抗體組合的人IL-18多肽(SEQIDNO:l)的組合物的步驟，其中所述抗體具有抗體依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性(ADCC)效應(yīng)器功能，且其中所述抗體不是抗CD20抗體，由此所述治療導(dǎo)致所述患者中的長(zhǎng)期存活和/或?qū)Π┌Y復(fù)發(fā)的預(yù)防和對(duì)免疫記憶的誘導(dǎo)。19.權(quán)利要求18的方法，其中所述抗原選自下組CD22、CD19、HER2、HER3、EGFR、IGF-1R、AXL-1、FGFR、整聯(lián)蛋白受體、CEA、CD44、和VEGFR。20.權(quán)利要求18的方法，其中所述癌癥選自下組何杰金氏淋巴瘤、B細(xì)胞非何杰金氏淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、T細(xì)胞非何杰金氏淋巴瘤、AML、CLL、MM、其它白血病、卵巢癌、乳腺癌、肺癌、肉瘤、膀胱癌、胰腺癌、曱狀腺癌、肝瘤、胃癌、維爾姆斯氏腫瘤、成神經(jīng)細(xì)胞瘤、成膠質(zhì)細(xì)胞瘤和其它腦瘤、結(jié)腸癌、直腸癌、前列&l癌、黑素瘤、腎細(xì)胞癌和皮力夫癌。全文摘要一般地，本發(fā)明涉及人IL-18組合在治療各種形式的實(shí)體瘤和淋巴瘤中的用途。具體地，本發(fā)明涉及(1)人IL-18與針對(duì)癌細(xì)胞表面上所表達(dá)的抗原的單克隆抗體的組合；和(2)人IL-18與化療劑的組合。文檔編號(hào)A61K45/00GK101641116SQ200880009463公開(kāi)日2010年2月3日申請(qǐng)日期2008年3月20日優(yōu)先權(quán)日2007年3月23日發(fā)明者茲登卡·L·喬納克,茲登卡·哈斯科瓦,斯蒂芬·H·特魯利,瑪格麗特·N·惠塔克里申請(qǐng)人:史密絲克萊恩比徹姆公司