專(zhuān)利名稱(chēng)：：白芍總苷在制備治療慢性濕疹藥物中的新用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種藥物白芍總苷的新用途，具體而言是白芍總苷在制備治療慢性濕疹藥物中的用途。
背景技術(shù)：
：中藥白芍為毛茛科植物芍藥的干燥根，具有平肝止痛，養(yǎng)血調(diào)經(jīng)，斂陰止汗作用；用于頭痛眩暈，脅痛，腹痛，四肢攣痛，血虛萎黃，月經(jīng)不調(diào)，自汗，盜汗。白芍中含有的主要有效成分為芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷、氧化芍藥苷、苯甲酰芍藥苷等，合稱(chēng)為白芍總苷(TGP)，其中芍藥苷含量較多，為其主要有效成分之一。藥理研究表明，白芍總苷具有較強(qiáng)的抗炎和免疫調(diào)節(jié)作用，主要用于治療類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎，亦有用于治療病毒性肝炎、幼年慢性關(guān)節(jié)炎(JCA)、系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)、干燥綜合征、白塞病、系統(tǒng)性硬化癥、膝骨性關(guān)節(jié)炎(0A)、強(qiáng)直性脊柱炎等疾病的報(bào)道(如中國(guó)藥業(yè)2004年第134期第67頁(yè)、浙江中西醫(yī)結(jié)合雜志2004年第14巻第10期第605頁(yè)和中華風(fēng)濕病學(xué)雜志2004年第8巻第7期第443頁(yè)等)，未見(jiàn)白芍總苷用于治療慢性濕疹的報(bào)道。濕疹的病因及發(fā)病機(jī)制相當(dāng)復(fù)雜，涉及體內(nèi)、外多種因素，是發(fā)生在皮膚的遲發(fā)性超敏反應(yīng)(delayedtypehypersensitivity,DTH)，牽涉到體內(nèi)的免疫失衡?，F(xiàn)在主要是用HI受體拮抗劑、糖皮質(zhì)激素生物制劑、中藥、抗菌藥等進(jìn)行局部或全身藥物治療。此類(lèi)藥物主要作用于I型變態(tài)反應(yīng)，治療時(shí)出現(xiàn)嗜睡、口干、乏力、頭暈、惡心等副作用以及長(zhǎng)期用藥可發(fā)生耐受現(xiàn)象；糖皮質(zhì)激素可抑制DTH，是治療皮炎，亞急性和慢性濕疹的常用藥物，有一定的臨床效果，但無(wú)論是局部還是全身用藥均表現(xiàn)出較明顯的不良反應(yīng)，如滿月臉、水牛背、肌肉萎縮、降低胃粘膜的抵抗力等，此外在臨床治療時(shí)經(jīng)常會(huì)出現(xiàn)停藥后皮損加重或激素依賴(lài)性皮炎，上述藥物由于其副作用在應(yīng)用于慢性濕疹時(shí)都受到了極大的限制。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的內(nèi)容是發(fā)現(xiàn)了白芍總苷在治療慢性濕疹方面的用途。白芍總苷的新用途，是用于治療慢性濕疹。白芍總苷的新用途在于能調(diào)節(jié)輔助性T細(xì)胞Thl和Th2之間的平衡、糾正免疫紊亂。本發(fā)明提供一種治療慢性濕疹的藥物，在于其中含有治療有效量的白芍總苷及藥用載體或賦形劑。白芍總苷在治療慢性濕疹中，可以單獨(dú)給藥，也可以加藥用輔料以及白芍總苷與其他藥物組合加輔料共同制備而成各種制劑劑型；經(jīng)制備而成的劑型可以是硬膠囊劑、軟膠囊劑、顆粒劑、片劑、合劑(口服溶液劑)、糖槳?jiǎng)┑瓤诜┬?，也可以是注射劑、大輸液等注射劑。本發(fā)明專(zhuān)利所用白芍總苷是符合中國(guó)國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局發(fā)布現(xiàn)行的白芍總苷國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，標(biāo)準(zhǔn)編號(hào)為WS1-(X-159)-2003Z，按干燥品計(jì)算，用高效液相色譜法測(cè)定白芍總苷原料芍藥苷(C23H280n)含量，不得少于40.0%;圖1，TGP對(duì)慢性濕疹小鼠血清中IL-2和IL-4水平的影響圖圖2，TGP對(duì)慢性濕疹豚鼠血清中IL-2和IL-4水平的影響圖具體實(shí)施例方式下面結(jié)合動(dòng)物實(shí)驗(yàn)對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明，但并不意味著對(duì)本發(fā)明有任何限制。實(shí)施例1材料與方法實(shí)驗(yàn)動(dòng)物昆明種雄行小鼠,體重(20±2)g，由安徽醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，皖實(shí)動(dòng)字第01號(hào)。藥物與試劑白芍總苷(TGP)由寧波立華制藥有限公司提供，強(qiáng)的松(predisone，Pre)浙江仙琚制藥股份有限公司生產(chǎn)，產(chǎn)品批號(hào)060203，實(shí)驗(yàn)時(shí)均以0.5%羧甲基纖維素鈉配制成所需濃度的懸液；二硝基氯苯(dinitrochlorobenzol,DNCB)，上海化學(xué)試劑公司產(chǎn)品，以丙酮配成O.1%,1%，5W和7X的DNCB丙酮溶液；IL-2和IL-4放射性免疫(radioimmunoassay,RIA)試劑盒購(gòu)自北京普爾偉業(yè)生物科技有限公司。模型的制備小鼠慢性濕疹模型的制備將昆明種小鼠于實(shí)驗(yàn)前l(fā)天于腹部去毛,面積約2cmX2cm，實(shí)驗(yàn)當(dāng)天以7^二硝基氯苯丙酮溶液100wl涂于小鼠的腹部致敏，5天后在小鼠右耳內(nèi)側(cè)外涂1%二硝基氯苯丙酮溶液5ixl激發(fā)，同時(shí)左耳涂予丙酮,每隔3天激發(fā)一次，共激發(fā)4次。實(shí)驗(yàn)分組與給藥昆明種小鼠隨機(jī)分為6組正常對(duì)照組，模型組，TGP30,60和120mg.kg-'組和陽(yáng)性藥物對(duì)照組(Pre5mg.kg—')。各用藥組于致敏當(dāng)天給予灌胃給藥，qd，正常對(duì)照組和模型組灌以等體積的0.5%羧甲基纖維素鈉。末次激發(fā)后24小時(shí)處死小鼠，檢測(cè)各項(xiàng)指標(biāo)。觀察指標(biāo)1.耳厚度差于誘導(dǎo)前及每次激發(fā)后24小時(shí)用千分卡尺單盲法測(cè)量右耳中部厚度，計(jì)算激發(fā)前后右耳厚度差。2.耳重量差末次激發(fā)后24小時(shí)處死實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，用直徑0.9cm的金屬打孔器在耳中部打孔，用電子天平稱(chēng)得每個(gè)組織塊重量，計(jì)算左右耳重量差，同時(shí)將右耳片制成石蠟塊備用。3.服染色及觀察:將石蠟塊切為5um厚的切片，HE染色,在光鏡下觀察炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)情況。4.血清IL-2和IL-4值檢測(cè)小鼠經(jīng)眼球，豚鼠經(jīng)股動(dòng)脈取血lml，1500r/min離心20分鐘，取出血清置于微量離心管內(nèi)，-80冰箱保存?zhèn)溆?，采用放射免疫測(cè)定法測(cè)定血清IL-2和IL-4值,步驟按IL-2和IL-4試劑盒說(shuō)明進(jìn)行。統(tǒng)計(jì)學(xué)處理測(cè)定結(jié)果以^士?jī)鍪?采用單因素方差分析和q檢驗(yàn)進(jìn)行組間差異。結(jié)果TGP對(duì)小鼠慢性濕疹模型的影響1.1TGP治療給藥對(duì)慢性濕疹小鼠耳腫脹度的影響與正常組相比,模型組小鼠右耳明顯腫脹，TGP(30、60和120mg.kg—1)和Pre(5mg.kg—1)能明顯改善慢性濕疹小鼠右耳腫脹情況(表1)。表l、TGP對(duì)慢性濕疹小鼠耳腫脹度的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>1.2.TGP對(duì)慢性濕疹小鼠左右耳重量差的影響與正常組相比,模型組小鼠右耳明顯腫脹，重量比左耳明顯增加，TGP(120mg.kg—L)和Pre(5mg.kg—l)能改善右耳腫脹情況(表2)。表2TGP對(duì)慢性濕疹小鼠左右耳重量差的影響。組別劑量(mg.kg—1)基本重量耳腫脹度(A-右耳-左耳)g**p<0.01vs正常組；弁p〈0.05vs模型組1.3TGP對(duì)慢性濕疹小鼠血清中IL-2和IL-4水平的影響與正常組相比，模型組小鼠血清IL-2水平明顯降低，IL-4水平明顯升高,TGP(30、60和120mg.kg—')和Pre(5mg.kg')能升高小鼠降低的IL-2水平，降低小鼠升高的IL-4水平(表3和圖1)。表3TGP對(duì)慢性濕疹小鼠血清中IL-2和IL-4水平的影響組別~~劑量(mg.kg")IL-2/ng.mr1IL-4/ng.mr1*p〈0.05，**p<0.01vs正常組;#p〈0.05，##p〈0.01vs模型組。1.4.TGP對(duì)慢性濕疹小鼠耳病理學(xué)改變的影響與正常組相比，模型組小鼠耳片表皮角化過(guò)度、增厚，真皮以單核有細(xì)胞浸潤(rùn)為主，血管擴(kuò)張.TGP(30、60和120mgkg，和Pre(5mg-kg—')能減輕炎癥細(xì)胞的浸潤(rùn)，改善耳片病理改變。實(shí)施例2材料與方法實(shí)驗(yàn)動(dòng)物豚鼠，體重(350±20)g;均由安徽醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，皖實(shí)動(dòng)字第Ol藥物與試劑TGP由寧波立華制藥有限公司提供，強(qiáng)的松(predisone，Pre)浙江仙琚制藥股份有限公司生產(chǎn)，產(chǎn)品批號(hào)060203，實(shí)驗(yàn)時(shí)均以0.5%羧甲基纖維素鈉配制成所需濃度的0.0010±0.00100.0121±0.0040'0.010U0.00520.0119±0.00420.0078±0.0044#0.0068±0.0038#2.180±0.3361.698±0.423*2.307±0.348#2.315±0,158#2.72歸.602射3.259士0.575附0.399±0.1060.687幼.248**0.514±0.1990.286±0.138##0.152±0.062糊0.428±0.185#o2611常型M正模Kpo2常型w正模Krp懸液；二硝基氯苯(dinitrochlorobenzol，DNCB)，上?；瘜W(xué)試劑公司產(chǎn)品，以丙酮配成0.1%，1%，5%和7%的DNCB丙酮溶液；IL-2和IL-4放射性免疫(radioimmunoassay,RIA)試劑盒購(gòu)自北京普爾偉業(yè)生物科技有限公司。模型的制備豚鼠慢性濕疹模型制備在每只豚鼠背頸部剃毛2cmX2cm大小，5%DNCB50u1外涂致敏；2周后每只豚鼠右耳背側(cè)搽藥0.1%DNCB100n1作為激發(fā),每周1次,連續(xù)4次。實(shí)驗(yàn)分組與給藥豚鼠隨機(jī)分為8組正常組、模型組、TGP治療組21，42和84呢.kg-'組，，TGP(42rag.kg—。+Pre(1.4mg.kg—')組，陽(yáng)性藥物對(duì)照組(Pre1.4mg.kg—1，2.8mg.kg1)。各用藥組于實(shí)驗(yàn)d28天開(kāi)始給予灌胃給藥，每天一次，至實(shí)驗(yàn)結(jié)束，正常對(duì)照組和模型組灌以等體積的0.5%羧甲基纖維素鈉，末次激發(fā)后24小時(shí)處死豚鼠，檢測(cè)各項(xiàng)指標(biāo)。觀察指標(biāo)1.耳厚度差于誘導(dǎo)前及每次激發(fā)后24小時(shí)用千分卡尺單盲法測(cè)量右耳中部厚度，計(jì)算激發(fā)前后右耳厚度差。2.耳重量差末次激發(fā)后24小時(shí)處死實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，用直徑0.9cm的金屬打孔器在耳中部打孔，用電子天平稱(chēng)得每個(gè)組織塊重量，計(jì)算左右耳重量差，同時(shí)將右耳片制成石蠟塊備用。3.HE染色及觀察:將石蠟塊切為5um厚的切片,HE染色,在光鏡下觀察炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)情況。4.血清IL-2和IL-4值檢測(cè)小鼠經(jīng)眼球，豚鼠經(jīng)股動(dòng)脈取血lml,1500r/min離心20分鐘，取出血清置于微量離心管內(nèi)，-80冰箱保存?zhèn)溆?采用放射免疫測(cè)定法測(cè)定血清IL-2和IL-4值，步驟按IL-2和IL-4試劑盒說(shuō)明進(jìn)行.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理測(cè)定結(jié)果以,土凌示,采用單因素方差分析和q檢驗(yàn)進(jìn)行組間差異。結(jié)果TGP對(duì)豚鼠慢性濕疹模型的影響1.1TGP對(duì)慢性濕疹豚鼠耳腫脹度的影響與正常組相比,模型組豚鼠右耳明顯腫脹，TGP(84mg爭(zhēng)kg-')、TGP(42mg*kg-1)+Pre(1.4mg.kg.1)組、Pre(1.4nigkg—1)和Pre(2.8mg*kg—')能改善慢性濕疹豚鼠右耳腫脹情況(表4)。<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>表4.TGP對(duì)慢性濕疹豚鼠耳腫脹度的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>x±s,n=8.*p<0,05，**p<0.01vs正常組；#p<0.05，##p<0.01vs模型組1.2TGP對(duì)慢性濕疹豚鼠左右耳重量差的影響與正常組相比,模型組豚鼠右耳明顯腫脹，重量比左耳明顯增加，TGP(84mg'kg—')、TGP(42mg'kg—')+Pre(1.4mg'kg-1)組和Pre(1.4、2.8mg，kg—》能改善慢性濕疹豚鼠右耳腫脹情況。其中Pre(2.8mg'kg。組與Pre(1.4mg'kg—')組比較差異有顯著性；TGP(42mg*kg—')+Pre(1.4mg'kg—')組與單獨(dú)應(yīng)用TGP(42mg'kg—')和Pre(1.4mgkg—1)比較差異有顯著性；TGP(42mgkg—1)+Pre(1.4mgkg"組與Pre(2.8mg*kg—')組效果相似，差異無(wú)顯著性(表5)。表5.TGP對(duì)慢性濕疹豚鼠左右耳重量差的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>x±s，n=8.**p<0.01vs正常組;#p<0.05，##p<0.01vs模型組;ApO.05vs(TGP+Pre)組；口二pO.OlvsPrel.4(mg.kg-')組.1.3TGP對(duì)慢性濕疹豚鼠血清中IL-2和IL-4水平的影響與正常組相比，模型組豚鼠血清IL-2水平降低，IL-4水平升高，TGP(42、84mgkg—')、Pre(1.4、2.8mgkg-')和TGP(42mg'kg"+Pre(1.4mgkg—')組能升高IL-2水平，降低IL-4水平。其中Pre(2.8mg'kg-')組與Pre(1.4mgkg—1)組比較差異有顯著性；TGP(42mgkg—')+Pre(1.4mgkg-1)組與單獨(dú)應(yīng)用TGP(42mgkg—1)和Pre(1.4mg，kg—)比較差異有顯著性；TGP(42mgkg,8—0.528±0.0520.062±0.0420.057±0.0420.057土0.0630.075±0.066—0.526±0.0270.121±0.0610.143±0.056*0.203±0.048**0.245±0.046*210.535±0.0260.106±0.0330.134±0.0710.176±0.0650.199±0.060420.537±0.0460.120±0.0510.139±0.0360.171±0.0310.189±0扁#840.558±0.0390.108±0.0540.128±0扁0.141±0.0870.152土0.086射1.40.532±0.0250.120士0.0660.133±0.0650.161±0.0710.166土0.088#2.80.538±0.0270.102±0.0460.,128±0.0400.138±0.042##0.144±0.063*^1.4+420.555±0.0360.097±0.0540.,118±0.0550.134±0.061##0.144±0.063w0.750±0.4635細(xì)±1.553**214.750±U61424.333±1.366A843.625±1.061#1.43.750±0.886#A2.82.500±0.926#s::=1.4+422.625±1.125#Pre+TGPPrePre+TGP常型w正模g常型w正模^+Pre(1.4mgkg—1)組與Pre(2.8mgkg-1)組效果相似，差異無(wú)顯著性(見(jiàn)表6和圖2)表6.TGP對(duì)慢性濕疹豚鼠血清中IL-2和IL-4水平的影響.組別劑量(mg.kg—1)IL-2/ng.mr1IL-4/ng.mr1正常3.542±0.3230.761±0.046模型3.058±0.213*0.876±0.083*TGP213.278±0.1770.797±0.081423.475±0.216#AA0.696±0.035##843.889±0.180##0.562±0.046*#Pre1.43.727±0.195##A0.813±0.078M2.84.254±0.255##—0.735±0.044##Pre+TGP1.4+424.054±0.191##0.661±0.075##x±s,n=8.*p<0.05vs正常組；#p<0.05，井#p<0.01vs模型組；Ap<0.05，厶A〈0,01vs(TGP+Pre)組；口p0.05,口口p0.01vsPrel.4(mg.kg")組.1.4.TGP對(duì)慢性濕疹豚鼠病理學(xué)改變的影響與正常組相比,模型組豚鼠耳片表皮層有大量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，血管擴(kuò)張。TGP治療組(21mg.kg\42mg.kg—1和84mg.kg-')、TGP(42mg.kg—1)+Pre("mg.kg—1)組、陽(yáng)性藥Pre組(1.4mg.kg—1、2.8mg.kg—1)，能明顯減輕炎癥細(xì)胞的浸潤(rùn)，改善耳片病理改變。權(quán)利要求1、白芍總苷在制備治療慢性濕疹藥物中的新用途，其特征在于藥物中含有有效量的白芍總苷及藥用載體或賦形劑。全文摘要本發(fā)明公開(kāi)了一種白芍總苷在制備治療慢性濕疹藥物中的新用途，其特征在于白芍總苷在治療慢性濕疹中，可以單獨(dú)給藥，也可以加藥用輔料以及白芍總苷與其他藥物組合加輔料共同制備而成各種制劑劑型；經(jīng)制備而成的劑型可以是硬膠囊劑、軟膠囊劑、顆粒劑、片劑、合劑(口服溶液劑)、糖漿劑等口服劑型，也可以是注射劑、大輸液等注射劑。文檔編號(hào)A61P17/00GK101385787SQ20081010698公開(kāi)日2009年3月18日申請(qǐng)日期2008年7月7日優(yōu)先權(quán)日2008年7月7日發(fā)明者周海濱,李傳應(yīng),江海龍,偉魏申請(qǐng)人:安徽醫(yī)科大學(xué)臨床藥理研究所;寧波立華制藥有限公司