專利名稱：：菊苣酸在制備治療冠心病藥物中的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及菊苣酸新的醫(yī)藥用途，尤其是在制備治療冠心病藥物中的用途，屬于中醫(yī)藥學(xué)
技術(shù)領(lǐng)域：
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背景技術(shù)：
：本發(fā)明涉及的菊苣酸是菊科植物抱莖苦賣菜(熟稱苦碟子)中提取的有機酸類化合物，結(jié)構(gòu)式如下分子式C22H18012分子量474。經(jīng)檢索未見該物質(zhì)用于制備治療冠心病藥物中的應(yīng)用。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明公開了菊苣酸在制備制備治療冠心病藥物中的用途。本發(fā)明以菊苣酸作為主要活性成分制備制備治療冠心病藥物，可加入一種或多種天然或合成的與其具有協(xié)同或輔助作用的活性成分制成。本發(fā)明菊苣酸制備的治療冠心病藥物包括藥物學(xué)上的任何劑型。下列實驗表明了本發(fā)明菊苣酸對冠心病的藥理作用-試驗?zāi)康倪x用相近似的動物模型或試驗方法，對本發(fā)明藥物的制備治療冠心病作用進行研究，為其有效性做出科學(xué)的評價。試驗藥物菊苣酸由吉林省中醫(yī)藥科學(xué)院提供，批號20071215，純度與性狀均為98%以上，白色結(jié)晶，丙二酸及超氧化物歧化酶測定試劑盒由南京建成生物工程研究所提供；6-酮-前列腺素Fu放免藥盒及血栓素B2放免藥盒由中國人民解放軍總醫(yī)院東亞免疫技術(shù)研究所提供。試驗動物Wistar大鼠，體重190280g，由吉林大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院實驗動物中心提供，合格證號SYXK-(吉)2003-0001。統(tǒng)計方法實驗數(shù)據(jù)以均值±標(biāo)準(zhǔn)差(X±S)表示，采用兩組樣本均數(shù)比較的,檢驗進行統(tǒng)計分析。方法與結(jié)果1、菊苣酸對垂體后葉素誘發(fā)大鼠心肌缺血性心電圖的影響1.1方法經(jīng)心電篩選合格的Wistar大鼠50只，雌雄各半，體重190220g,隨機分為5組，g卩對照組、菊苣酸低劑量(100mg/kg)組及菊苣酸高劑量(200mg/kg)組，每組10只。各藥物組均灌胃給藥，每閂1次，連續(xù)7R，對照組灌胃蒸餾水，給藥體積均為5ml/kg。術(shù)次藥后50min，各組均自舌下靜脈注射垂體后葉素(上海未豐制藥有限公司產(chǎn)品，試驗時以生理鹽水稀釋)lu/kg，于10秒內(nèi)注射完畢，描記20min的心電圖，測量給垂體后葉素30秒內(nèi)ST段及T波變化。1.2結(jié)果對照組舌下靜脈注射(iv)垂體后葉素后，可見大鼠ST段及T波均明顯抬高，表明垂體后葉素能誘發(fā)大鼠急性心肌缺血性心電圖改變。與對照組比較，菊苣酸低、高劑量組對iv垂體后葉素誘發(fā)的大鼠急性心肌缺血性心電圖變化均有明顯的改善作用(pO.Ol或pO.OOl)，提示其可緩解冠脈痙攣所致的心肌缺血，見表l。表l菊片:酸對垂體后葉素誘發(fā)火鼠急性心肌缺血心屯圖的影響(x",w=10)<table>tableseeoriginaldocumentpage4</column></row><table>與對照組比較*p<0.05，**p<0.01，***p<0.0012、菊苣酸對大鼠急性心肌梗死的保護作用2.1方法Wistar大鼠90只，雌雄兼用，體重260280g，隨機分為6組，g卩假手術(shù)組、梗死模型組、菊苣酸低劑量(100mg/kg)組及菊苣酸高劑量(200mg/kg)組，每組15只。各藥物組均灌胃給藥，每R1次，連續(xù)7閂，對照組灌胃蒸餾水，給藥體積均為5ml/kg。末次藥后30min，給大鼠測定正常心電圖后，按文獻方法制作心肌梗死模型[1]。在乙醚麻醉下，將大鼠仰位，固定于手術(shù)臺上，自左側(cè)34肋間開胸，暴露心臟，于肺動脈圓錐及左心房間找出冠脈左甜降支，用0號線立即結(jié)扎之，將心臟送回胸腔，并擠出胸腔內(nèi)血液和氣體，迅速關(guān)閉胸腔，整個開胸時間不超過30秒。假手術(shù)組不結(jié)扎而只置手術(shù)線。待結(jié)扎冠脈24小時后，用戊巴比妥鈉30mg/kgi.p麻醉，測定大鼠II導(dǎo)聯(lián)心電圖。然后，腹主動脈插管取血，測血清磷酸肌酸激酶(CK)及乳酸脫氫酶(LDH)活性。用LDZ5-2離心機3500轉(zhuǎn)/秒離心血液，取血漿，測定血漿粘度，并測全血低切、中切、高切粘度。迅速取出大鼠心臟，用生理鹽水洗去心腔內(nèi)血液，去除心房和脂肪組織,稱重。將心室橫切45片，置氯化硝基四氮唑藍(NB-T)磷酸緩沖液中，于37'C恒溫水浴染色完全后取出。正常組織染色，缺血組織不染色。切下缺血組織稱重，以缺血心肌與心室濕重的百分比計算心肌梗死范圍(MIS)。2.2結(jié)果2.2.1菊苣酸對急性心肌梗死大鼠心電圖的影響結(jié)扎甜各組II導(dǎo)聯(lián)心電圖T波及ST段均無明顯差異(p>0.05)。急性心肌梗死后24小時，梗死模型組II導(dǎo)聯(lián)心電圖T波及ST段均明顯抬高，與假手術(shù)組比較差異顯著(p<0.05p<0.001)，提示大鼠急性心肌梗死時伴有明顯的缺血性心電圖變化。與梗死模型組比較菊苣酸低、高劑量組對上述心電圖T波及ST段抬高均有明顯改善作用(p〈0.05p〈0扁),見表2。表2菊苣酸對急性心肌梗死人鼠n導(dǎo)聯(lián)心屯圖的影響oc"，"=io)<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>與梗死對照組比較*p<0.05，**p<0.01，***p<0.0012.2.2菊苣酸對急性心肌梗死大鼠MIS、CK及LDH的影響與假手術(shù)組比較，梗死模型組MIS及血清CK、LDH活性均明顯增加(p<0.01或p<0.001)，提示大鼠急性心肌梗死模型建立成功。與梗死模型組相比，菊苣酸低、高劑量組均能明顯縮小MIS，降低血清CK及LDH活性(p<0.05或p<0.01)，見表3。表3菊苣酸對急性心肌梗死大鼠MIS及血清CK、LDH活性的影響(x±、"=10)<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>與梗死對照組比較*p<0.05，**p<0.01，***p<0.0012.2.3菊苣酸對急性心肌梗死大鼠全血及血漿粘度的影響與假手術(shù)組比較，梗死模型組全血低切、中切、高切及血漿粘度均明顯增加(p<0.05或pO.Ol)，提示大鼠急性心肌梗死時伴有血液粘度的增高。與梗死模型組相比，菊苣酸低、高劑量組均能明顯降低全血低切、中切、高切及血漿粘度(p0.05或pO.Ol)，見表4。表4菊苣酸對急性心肌梗死大鼠全血及血槳粘度的影響(x","=10)<table>tableseeoriginaldocumentpage0</column></row><table>丄j梗死對照組比較*p<0.05,**p<0.013、菊苣酸對大鼠心肌缺血再灌注損傷(MIRI)的保護作用3.1方法Wistar大鼠120只，雌雄兼用，體重250280g,隨機分為6組，g卩假手術(shù)組、梗死模型組、菊苣酸低劑量(100mg/kg)組及菊苣酸高劑量(200mg/kg)組，每組20只。各藥物組均灌胃給藥，每日1次，連續(xù)7日，對照組灌胃蒸餾水，給藥體積均為5ml/kg。末次藥后30min，給大鼠測定正常心電圖后，在乙醚麻醉下仰位固定于手術(shù)臺，自左側(cè)34肋間開胸，暴露心臟，于肺動脈圓錐及左心房間找出冠脈左前降支，除假手術(shù)組僅穿線不結(jié)扎外，其余各組均以O(shè)號線立即結(jié)扎冠脈，結(jié)扎時用一細小乳膠管墊于血管與結(jié)扎線之間，將心臟送回胸腔，并擠出胸腔內(nèi)血液和氣體，迅速關(guān)閉胸腔，開胸時間不超過30秒。各組動物在結(jié)扎30min時松解結(jié)扎線進行再灌注。再灌注120min后，以戊巴比妥鈉30mg/kg腹腔注射麻醉，腹主動脈插管取血，用COBAS-FARA自動生化分析儀測血清CK及LDH活性；按試劑盒方法測血清丙二醛(MDA)含量，超氧物歧化酶(SOD)活性；另取血抗凝分離血漿，用放免法[2]測血漿PGI2和TXA2的代謝產(chǎn)物6-酮前列腺素Fla和血栓素B2水平。取血后剖取大鼠心臟，用生理鹽水洗凈心腔內(nèi)積血，去掉心房組織及脂肪，稱重，將左心室心肌橫切45片，然后浸入NB-T磷酸緩沖液中，置37'C恒溫水浴，待染色完全后取出，正常組織染色，缺血組織不染色。切下缺血心肌稱重，用缺血心肌與左心室濕重的百分比計算梗死范圍MIS。3.2結(jié)果3.2.1菊苣酸對MIRI大鼠MIS及血清CK、LDH活性的影響與假手術(shù)組相比，再灌模型組MIS及血清CK及LDH活性均明顯增加(p<0.05或p<0.01)。菊苣酸低、高劑量組均能明顯縮小心肌缺血再灌注損傷大鼠的MIS，降低血清CK及LDH活性，與再灌模型組比較差異顯著(pO.05或pO.01)，見表5。表5菊苣酸對MIRI大鼠MIS及CK、LDH活性的影響(扭&"=10)<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>與再灌模型組比較*p<0.05，**p<0.01，***p<0.0013.2.2菊苣酸對MIRI大鼠血清LPO及SOD的影響與假手術(shù)組相比，再灌模型組血清LPO含量明顯增加，而SOD活性明顯降低(p<0.05或p<0.01)，表明大鼠心肌缺血再灌注損傷時伴有體內(nèi)自由基的堆積和抗氧化酶活性的降低。菊苣酸低、高劑量組均能均可顯著降低血清LPO含量，提高血清SOD活性，與再灌模型組比較差異顯著(pO.05或pO.01)，見表6。表6菊苣酸對MIRI大鼠血清LPO及SOD的影響(x士乂"=10)<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>3.2.3菊苣酸對MIRI大鼠血漿PGI2及TXA2的影響與假手術(shù)組相比，再灌模型組血漿TXA2明顯升高，PGI2及PGI2/TXA2比值明顯降低(p<0.05或p<0.01)。菊苣酸低、高劑量組均能均可明顯降低心肌缺血再灌注損傷大鼠的血漿TXA2水平，增加血漿PGI2水平及PGI2/TXA2比值，與再灌模型組比較差異顯著(p<0.05或pO.Ol)，見表7。表7菊苣酸對MIRI大鼠血漿PGI2及TXA2的影響(x士&"二10)組另U劑量(mg/kg)PGI2(pg/ml)TXA2(pg/ml)PGI2/TXA2假手術(shù)組—475.63±58.21**183.31±50.09**2.59±0.81**再灌模型組一376.71±75.89265.14±54.261.42±0.56菊汽酸100455.87±50.53*208.12±50,24*2.19±0.71*200468.48±52.39**191.76±45.73"2.44±0,76**與再灌模型組比較*p<0.05，**p<0.01結(jié)論在垂體后葉素誘發(fā)大鼠急性心肌缺血模型，對照組舌下靜脈注射(iv)垂體后葉素后，可見大鼠ST段及T波均明顯抬高，表明垂體后葉素能誘發(fā)大鼠急性心肌缺血性心電圖改變。與對照組比較，菊苣酸低、高劑量組對iv垂體后葉素誘發(fā)的大鼠急性心肌缺血性心電圖變化均有明顯的改善作用(pO.Ol或pO.OOl)，提示其可緩解冠脈痙攣所致的心肌缺血。在大鼠急性心肌梗死模型，結(jié)扎前各組II導(dǎo)聯(lián)心電圖T波及ST段均無明顯差異(p>0.05)。急性心肌梗死后24小時，梗死對照組II導(dǎo)聯(lián)心電圖T波及ST段均明顯抬高，與假手術(shù)組比較差異顯著(p<0.05p<0.001)。與梗死模型組比較，菊苣酸低、高劑量組對上述心電圖T波及ST段抬高均有明顯改善作用(p<0.05p<0.001);與假手術(shù)組比較，梗死模型組MIS及血清CK、LDH活性均明顯增加(pO.Ol或pO.OOl)。與梗死模型組相比，菊苣酸低、高劑量組均能明顯縮小MIS，降低血清CK及LDH活性(p<0.05或pO.01);與假手術(shù)組比較，梗死模型組全血低切、中切、高切及血漿粘度均明顯增加(p<0.05或pO.Ol)。與梗死模型組相比，菊苣酸低、高劑量組均能明顯降低全血低切、中切、高切及血漿粘度(pO.05或pO.01)。在大鼠心肌缺血再灌注損傷模型，與假手術(shù)組相比，再灌模型組MIS及血清CK及LDH活性均明顯增加(pO.05或pO.01)。菊苣酸低、高劑量組均能明顯縮小心肌缺血再灌注損傷大鼠的MIS，降低血清CK及LDH活性，與再灌模型組比較差異顯著(p<0.05或p<0.01);與假手術(shù)組相比，再灌模型組血清LPO含量明顯增加，而SOD活性明顯降低(p〈0.05或pO.01)。菊苣酸低、高劑量組均能均可顯著降低血清LPO含量，提高血清SOD活性，與再灌模型組比較差異顯著(pO.05或pO.01)，與假手術(shù)組相比，再灌模型組血漿TXA2明顯升高，PGI2及PGI2/TXA2比值明顯降低(p0.05或pO.Ol)。菊苣酸低、高劑量組均能均可明顯降低心肌缺血再灌注損傷大鼠的血漿TXA2水平，增加血漿PGI2水平及GI2/TXA2比值，與再灌模型組比較差異顯著(p<0.05或pO.Ol)。本發(fā)明的積極效果在于為純中藥制劑，臨床癥狀消失迅速，治療山心肌缺血等引起的心血管疾病，特別是冠心病效果顯著。具體實施例方式本發(fā)明以菊苣酸作為主要活性成分與一種或多種醫(yī)藥上可接受的載體或賦性劑按適當(dāng)比例混合，制成適用于臨床上使用的不同劑型的藥物組合物，例如將其配制成可供靜脈內(nèi)、肌肉內(nèi)、腹腔內(nèi)、皮下、腦脊髓腔內(nèi)等注射給藥的注射劑，或者制成適于口服給藥的片劑、顆粒劑、滴丸、沖劑、液體制劑、粉末劑、丸劑、膠囊劑和懸浮劑，以及適用于局部給藥的噴霧劑、氣霧劑、霜劑、軟膏和栓劑。本發(fā)明公開的用于制備制備治療冠心病藥物是由0.1-100%的菊苣酸和99.9-0%藥用輔料組成藥物制劑。為了制備適于胃腸道外途徑要的溶液劑，例如可使用蒸餾水、注射用水、等滲氯化鈉溶液或葡萄糖溶液，或者低溶液(例如l-100mM)磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)作為載體或賦形劑。為了制備適于口服給藥的片劑、粉末劑、懸浮劑或膠囊劑，可以使用蔗糖、半乳糖、玉米淀粉、明膠、脂質(zhì)、微晶纖維素、滑石粉等作為載體或賦形劑。在這些適于口服給藥的制劑中，還可含有其他適當(dāng)?shù)奶砑觿?，例如增溶劑、崩解劑、潤滑劑、吸收促進劑、防腐劑、矯味劑、稀釋劑、吸附劑、賦形劑、分散劑、表面活性劑、著色劑等。最好將本發(fā)明的藥物組合物制成給藥途徑是靜脈內(nèi)或肌肉內(nèi)注射適于這些給藥途徑的注射液，例如注射劑、凍干粉針劑等。權(quán)利要求1、菊苣酸在制備治療冠心病藥物中的用途。2、菊苣酸制備的治療冠心病藥物包括藥物學(xué)上的任何劑型。全文摘要本發(fā)明涉及菊苣酸新的醫(yī)藥用途，尤其是在制備制備治療冠心病藥物中的用途，制劑為純中藥制劑，治療由心肌缺血等引起的心血管疾病臨床癥狀消失迅速、效果顯著。文檔編號A61P9/10GK101292973SQ200810050878公開日2008年10月29日申請日期2008年6月25日優(yōu)先權(quán)日2008年6月25日發(fā)明者姜瑞芝,睢大員,陳英紅,高其品申請人:通化華夏藥業(yè)有限責(zé)任公司;華玉強