專利名稱：青稞提取物的新用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種青稞提取物的新用途。特別是青稞提取物在制備治療神經(jīng)干細(xì)胞缺血藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
青稞是青藏高原特有農(nóng)作物品種，也是西藏最主要的糧食作物品種，藏族群眾通常將青稞磨制成″糌粑″(青稞面)食用。青稞常年播種面積和總產(chǎn)量分別占西藏糧食總播面積和總產(chǎn)的55-60％，總產(chǎn)在55-60萬噸。生物醫(yī)學(xué)界普遍認(rèn)為β-葡聚糖具有清腸、降血脂、降膽固醇和預(yù)防心血管疾病的作用；β-葡聚糖還具有調(diào)節(jié)血糖、提高免疫力、抗腫瘤的作用。其在醫(yī)藥、食品、護(hù)膚等方面有廣泛應(yīng)用，市場開發(fā)前景廣闊。一些專家還認(rèn)為β-葡聚糖的抗癌作用具有研究價值。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供青稞提取物的一種新用途，即在制備治療神經(jīng)干細(xì)胞缺血藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明所采用的青稞提取物的主要活性成分為青稞β-葡聚糖，其純度為93％-96％。該青稞提取物可以采用下述步驟提取青稞→烘干→粉碎→石油醚脫脂→80％乙醇脫單糖及低聚糖→熱水提取→濃縮→乙醇沉淀→真空干燥→青稞多糖粗品→檢測是否含蛋白、色素(若含蛋白質(zhì)，則用Savag法脫游離蛋白；若含色素，則用20％過氧化氫脫色)→DEAE纖維素(OH-)柱分離→SepharoseCL-6B凝膠柱層析→濃縮→透析→醇沉→真空干燥。
本發(fā)明從青稞中分離純化得到青稞提取物對神經(jīng)干細(xì)胞谷氨酸鈉損傷的保護(hù)作用進(jìn)行研究，結(jié)果表明，青稞提取物對神經(jīng)干細(xì)胞谷氨酸鈉損傷有明顯的保護(hù)作用。本發(fā)明從青稞中提取了青稞提取物，并應(yīng)用神經(jīng)干細(xì)胞腦缺血模型研究其對中樞神經(jīng)系統(tǒng)的保護(hù)作用。對青稞提取物在腦功能性疾病的應(yīng)用提供了一種新方法。
具體實施例方式1.神經(jīng)干細(xì)胞的分離培養(yǎng)與鑒定無菌條件下取出大鼠胚胎的紋狀體，放入含有1％B27，20ng·mL-1表皮生長因子(EGF)，10ng·mL-1堿性成纖維細(xì)胞生長因子(bFGF)的F12-DMEM(1∶1)培養(yǎng)基中，吹打制成細(xì)胞懸液，于37℃，5％CO2飽和濕度下常規(guī)培養(yǎng)，每培養(yǎng)一周傳代一次。將細(xì)胞貼附在載玻片上生長，2d后取出。吸出培養(yǎng)液，用磷酸鹽緩沖液(PBS)洗去殘余培養(yǎng)液，4％(m/m)多聚甲醛固定20min。PBS洗2次；10％正常山羊血清封閉1h；PBS洗3次；抗nestin抗體(v/v 1∶100，用抗體稀釋液稀釋)4℃過夜，PBS洗3次；二抗(v/v 1∶50，用抗體稀釋液稀釋)32℃孵育1h，PBS洗3次；50％(v/v)甘油封片，觀察熒光。
2.腦缺血體外模型的構(gòu)建體外培養(yǎng)8d的神經(jīng)干細(xì)胞培養(yǎng)液中加200μmol·L-1谷氨酸鈉20μL作用10min，DMEM洗滌后繼續(xù)培養(yǎng)24h。不同濃度青稞提取物加入谷氨酸損傷組培養(yǎng)液中形成低(20μmol·L-1)、中(40μmol·L-1)、高(80μmol·L-1)濃度組。
3.檢測指標(biāo)神經(jīng)干細(xì)胞死亡率將1ml的5×10sml細(xì)胞懸液置24孔板中，在37℃，5％CO培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，觀察并計算活細(xì)胞的百分率(1.5％臺盼蘭染色，鏡下計數(shù)500個總細(xì)胞)；乳酸脫氫酶(LDH)漏出率換無血清培養(yǎng)液12h后收集上清液，用速率法測定細(xì)胞外液中LDH活性。
4.結(jié)果谷氨酸鈉損傷組培養(yǎng)液中細(xì)胞死亡率和LDH漏出率明顯增加，與對照組比較有顯著性差異(P＜0.01)。青稞提取物高濃度組神經(jīng)干細(xì)胞培養(yǎng)液中，細(xì)胞死亡率和LDH漏出率相對較小，與谷氨酸鈉損傷組比較有顯著性差異(P＜0.01)。低(20μmol·L-1)濃度組與谷氨酸鈉損傷組比較有顯著不顯著。說明一定劑量青稞提取物對神經(jīng)干細(xì)胞缺血損傷有明顯的保護(hù)作用。在實驗濃度范圍內(nèi)，青稞提取物對神經(jīng)干細(xì)胞缺血損傷的保護(hù)作用與其濃度呈現(xiàn)一定的量效關(guān)系。
權(quán)利要求
1.青稞提取物在制備治療神經(jīng)干細(xì)胞缺血藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
青稞提取物在制備治療神經(jīng)干細(xì)胞缺血藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明從青稞中分離純化得到青稞提取物對神經(jīng)干細(xì)胞谷氨酸鈉損傷的保護(hù)作用進(jìn)行研究，結(jié)果表明，青稞提取物對神經(jīng)干細(xì)胞谷氨酸鈉損傷有明顯的保護(hù)作用。本發(fā)明從青稞中提取了青稞提取物，并應(yīng)用神經(jīng)干細(xì)胞腦缺血模型研究其對中樞神經(jīng)系統(tǒng)的保護(hù)作用。對青稞提取物在腦功能性疾病的應(yīng)用提供了一種新方法。
文檔編號A61P9/10GK101036759SQ20071003996
公開日2007年9月19日 申請日期2007年4月25日 優(yōu)先權(quán)日2007年4月25日
發(fā)明者錢艷蓉, 段燕紅, 陳付學(xué) 申請人:上海大學(xué)