專利名稱：一種中藥制劑金嗓清音丸的質(zhì)量檢測方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬中藥成方制劑領(lǐng)域，具體來說是涉及一種中藥制劑金嗓清音丸的質(zhì)量檢測方法。
背景技術(shù)：
以玄參、地黃、麥冬、黃芩、牡丹皮等制成的一種中藥制劑金嗓清音丸具有養(yǎng)陰清肺，化痰利咽。用于肺熱陰虛所致的慢喉喑、慢喉痹，癥見聲音嘶啞、咽喉腫痛、咽干；慢性喉炎、慢性咽炎見上述證候者，效果明顯。然而中藥成份比較復(fù)雜，含有許多未知成份。目前既能有效控制治療慢性咽喉炎的中藥制劑的產(chǎn)品質(zhì)量，又能操作方便的檢測方法，還沒有報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于能提供一種中藥制劑金嗓清音丸的質(zhì)量，準(zhǔn)確度高的質(zhì)量檢測方法。
本發(fā)明的一種中藥制劑金嗓清音丸的質(zhì)量檢測方法，將玄參、地黃、麥冬、黃芩、牡丹皮、赤芍、川貝母、澤瀉、薏苡仁(炒)、石斛、僵蠶(麩炒)、薄荷、胖大海、蟬蛻、木蝴蝶、甘草，粉碎成細(xì)粉，過篩，混勻。每100g粉末加煉蜜35～50g與適量的水，制丸，干燥，用活性炭包衣，制成水蜜丸；或加煉蜜110～130g制成大蜜丸，即得，其檢測方法包括以下步驟(1)取本品水蜜丸10g，研細(xì)；或取大蜜丸16g，剪碎，加硅藻土8g，研勻。加水80ml，超聲處理20分鐘，在轉(zhuǎn)速為3500轉(zhuǎn)/分鐘的離心機中離心10分鐘，取上清液加鹽酸2ml，微沸5分鐘，濾過，濾液用三氯甲烷提取3次，每次20ml，合并三氯甲烷提取液，揮干，殘渣加三氯甲烷1ml使溶解，作為供試品溶液；另取麥冬對照藥材0.5g，加水40ml，同法制成對照藥材溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以4∶1的三氯甲烷-丙酮為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在105℃烘至斑點顯色清晰；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點；(2)取本品水蜜丸10g，研細(xì)，或取大蜜丸16g，剪碎，加硅藻土8g，研勻；加乙醚60ml，低溫回流1小時，濾過，濾液揮去乙醚，殘渣加丙酮1ml使溶解，作為供試品溶液；另取丹皮酚對照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各10ul，分別點于同一硅膠G薄層板上，以3∶1的環(huán)己烷-乙酸乙酯為展開劑，展開，取出，晾干，噴以鹽酸酸性5％三氯化鐵乙醇溶液，加熱至斑點顯色清晰；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的藍褐色斑點；(3)取本品水蜜丸12g，研細(xì)，或取大蜜丸18g，切碎，加硅藻土9g，研勻；加甲醇80ml，超聲處理20分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加水20ml使溶解，用鹽酸調(diào)節(jié)PH值至約為2，用乙酸乙酯振搖提取2次，每次20ml，合并提取液，蒸干，殘渣加甲醇1ml使溶解，作為供試品溶液；另取黃芩苷對照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各10ul，分別點于同一硅膠G薄層板上，以5∶3∶1∶1的乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水為展開劑，展開，取出，晾干，噴以鹽酸酸性5％三氯化鐵乙醇溶液；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點；(4)芍藥苷含量測定對照品溶液的制備取芍藥苷對照品適量，精密稱定，加稀乙醇制成每1ml含0.1mg的溶液，即得；供試品溶液的制備取本品水蜜丸適量，研細(xì)，取約1g；或取重量差異項下的大蜜丸，剪碎，混勻，取約1.6g，精密稱定；置具塞錐形瓶中，精密加入稀乙醇25ml，密塞，稱定重量，超聲處理30分鐘，放冷，再稱定重量，用稀乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得；用高效液相色譜法測定以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以17∶83的乙腈-0.1％磷酸溶液為流動相；檢測波長為232nm；理論板數(shù)按芍藥苷峰計算應(yīng)不低于2000；分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各10ul，注入液相色譜儀，測定，計算樣品中芍藥苷的含量。
本發(fā)明通過試驗得出，本品含赤芍和牡丹皮以芍藥苷(C23H28O11)計，水蜜丸每1g不得少于0.60mg；大蜜丸每丸不得少于3.3mg。
本發(fā)明質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提高的意義在于本發(fā)明提供了對丹皮酚、黃芩苷的定性鑒別，制定出了最佳的供試品制備方法，找到了合適的展開劑，能對該制劑進行有效的定性鑒別。此外本發(fā)明提供了芍藥苷的含量測定方法，因為芍藥苷與其它組份分離度、重現(xiàn)性、精密度、回收率好，所以采用高效液相色譜法測定本品中芍藥苷的含量，制定出了最佳的供試品制備方法和流動相配制方法，大大提高了芍藥苷的含量檢測準(zhǔn)確度。本方法的建立，有利于市場上對該中藥制劑的真?zhèn)蝺?yōu)劣進行鑒別。
具體實施例方式實施例1將玄參、地黃、麥冬、黃芩、牡丹皮、赤芍、川貝母、澤瀉、薏苡仁(炒)、石斛、僵蠶(麩炒)、薄荷、胖大海、蟬蛻、木蝴蝶、甘草，粉碎成細(xì)粉，過篩，混勻。每100g粉末加煉蜜35～50g與適量的水，制丸，干燥，用活性炭包衣，制成水蜜丸；其檢測方法包括以下步驟(1)取本品水蜜丸10g，研細(xì)；加水80ml，超聲處理20分鐘，在轉(zhuǎn)速為3500轉(zhuǎn)/分鐘的離心機中離心10分鐘，取上清液加鹽酸2ml，微沸5分鐘，濾過，濾液用三氯甲烷提取3次，每次20ml，合并三氯甲烷提取液，揮干，殘渣加三氯甲烷1ml使溶解，作為供試品溶液；另取麥冬對照藥材0.5g，加水40ml，同法制成對照藥材溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以4∶1的三氯甲烷-丙酮為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在105℃烘至斑點顯色清晰；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點；(2)取本品水蜜丸10g，研細(xì)，加乙醚60ml，低溫回流1小時，濾過，濾液揮去乙醚，殘渣加丙酮1ml使溶解，作為供試品溶液；另取丹皮酚對照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各10ul，分別點于同一硅膠G薄層板上，以3∶1的環(huán)己烷-乙酸乙酯為展開劑，展開，取出，晾干，噴以鹽酸酸性5％三氯化鐵乙醇溶液，加熱至斑點顯色清晰；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的藍褐色斑點；(3)取本品水蜜丸12g，研細(xì)，加硅藻土9g，研勻；加甲醇80ml，超聲處理20分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加水20ml使溶解，用鹽酸調(diào)節(jié)PH值至約為2，用乙酸乙酯振搖提取2次，每次20ml，合并提取液，蒸干，殘渣加甲醇1ml使溶解，作為供試品溶液；另取黃芩苷對照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各10ul，分別點于同一硅膠G薄層板上，以5∶3∶1∶1的乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水為展開劑，展開，取出，晾干，噴以鹽酸酸性5％三氯化鐵乙醇溶液；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點；(4)芍藥苷含量測定對照品溶液的制備取芍藥苷對照品適量，精密稱定，加稀乙醇制成每1ml含0.1mg的溶液，即得；供試品溶液的制備取本品水蜜丸適量，研細(xì)，取約1g；精密稱定；置具塞錐形瓶中，精密加入稀乙醇25ml，密塞，稱定重量，超聲處理30分鐘，放冷，再稱定重量，用稀乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得；用高效液相色譜法測定以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以17∶83的乙腈-0.1％磷酸溶液為流動相；檢測波長為232nm；理論板數(shù)按芍藥苷峰計算應(yīng)不低于2000；分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各10ul，注入液相色譜儀，測定，計算樣品中芍藥苷的含量。
重復(fù)上述步驟一次，計算樣品中芍藥苷含量的平均值為0.9mg/g。
實施例2將玄參、地黃、麥冬、黃芩、牡丹皮、赤芍、川貝母、澤瀉、薏苡仁(炒)、石斛、僵蠶(麩炒)、薄荷、胖大海、蟬蛻、木蝴蝶、甘草，粉碎成細(xì)粉，過篩，混勻。每100g粉末加煉蜜110～130g制成大蜜丸，即得，其檢測方法包括以下步驟(1)取大蜜丸16g，剪碎，加硅藻土8g，研勻。加水80ml，超聲處理20分鐘，在轉(zhuǎn)速為3500轉(zhuǎn)/分鐘的離心機中離心10分鐘，取上清液加鹽酸2ml，微沸5分鐘，濾過，濾液用三氯甲烷提取3次，每次20ml，合并三氯甲烷提取液，揮干，殘渣加三氯甲烷1ml使溶解，作為供試品溶液；另取麥冬對照藥材0.5g，加水40ml，同法制成對照藥材溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以4∶1的三氯甲烷-丙酮為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在105℃烘至斑點顯色清晰；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點；(2)取大蜜丸16g，剪碎，加硅藻土8g，研勻；加乙醚60ml，低溫回流1小時，濾過，濾液揮去乙醚，殘渣加丙酮1ml使溶解，作為供試品溶液；另取丹皮酚對照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各10ul，分別點于同一硅膠G薄層板上，以3∶1的環(huán)己烷-乙酸乙酯為展開劑，展開，取出，晾干，噴以鹽酸酸性5％三氯化鐵乙醇溶液，加熱至斑點顯色清晰；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的藍褐色斑點；(3)取大蜜丸18g，切碎，加硅藻土9g，研勻；加甲醇80ml，超聲處理20分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加水20ml使溶解，用鹽酸調(diào)節(jié)PH值至約為2，用乙酸乙酯振搖提取2次，每次20ml，合并提取液，蒸干，殘渣加甲醇1ml使溶解，作為供試品溶液；另取黃芩苷對照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各10ul，分別點于同一硅膠G薄層板上，以5∶3∶1∶1的乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水為展開劑，展開，取出，晾干，噴以鹽酸酸性5％三氯化鐵乙醇溶液；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點；(4)芍藥苷含量測定對照品溶液的制備取芍藥苷對照品適量，精密稱定，加稀乙醇制成每1ml含0.1mg的溶液，即得；
供試品溶液的制備取重量差異項下的大蜜丸，剪碎，混勻，取約1.6g，精密稱定；置具塞錐形瓶中，精密加入稀乙醇25ml，密塞，稱定重量，超聲處理30分鐘，放冷，再稱定重量，用稀乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得；用高效液相色譜法測定以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以17∶83的乙腈-0.1％磷酸溶液為流動相；檢測波長為232nm；理論板數(shù)按芍藥苷峰計算應(yīng)不低于2000；分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各10ul，注入液相色譜儀，測定，計算樣品中芍藥苷的含量。
重復(fù)上述步驟一次，計算樣品中芍藥苷含量的平均值為3.9mg/丸。
用實施例1和實施例2所述的質(zhì)量檢測方法反復(fù)試驗8次，得出水蜜丸中芍藥苷含量(mg/g)的平均值和大蜜丸中芍藥苷含量(mg/丸)的平均值，結(jié)果見下表

實驗報告1、儀器與試藥儀器TSP2000高效液相色譜儀。P2000二元梯度泵，UV1000紫外檢測器，N2000色譜工作站。
試劑乙睛為色譜試劑，水為重蒸水，其它試劑均為分析純。
對照品芍藥苷 批號為0736-200117，供含量測定用，由中國藥品生物制品檢定所提供供試品金嗓清音丸(水蜜丸)，批號020306；規(guī)格每10粒重1g；包裝塑料瓶，每瓶裝36g，由本公司生產(chǎn)。
2、色譜條件色譜柱5μm，250mm×4.6mm的Poaris-ODS柱流動相17∶83的乙睛-0.1％磷酸溶液流速1.0ml/min；柱溫25℃；檢測波長232nm；3、前處理條件的選擇提取方法的考察精密稱取本品(批號020306)約1g，置具塞錐形瓶中，精密加入稀乙醇25ml，稱定重量，分別用不同的提取方法提取30min，提取液放冷后，用稀乙醇補足減失的重量，濾過，取續(xù)濾液進樣，測得其含量，結(jié)果見表1。
表1不同提取方法的比較(n＝2)

以上結(jié)果表明超聲處理與回流提取差別不大，但超聲簡便，故確定超聲提取為提取方法。
提取時間的考察精密稱取本品(批號020306)約1g，置具塞錐形瓶中，精密加入稀乙醇25ml，稱定重量，分別超聲處理不同時間，放冷，用稀乙醇補足減失的重量，濾過，取續(xù)濾液進樣，測得其含量，結(jié)果見表2。
表2不同提取時間的考察

以上結(jié)果表明超聲30分鐘，含量基本不變，故確定30分鐘為超聲提取時間。
4、方法學(xué)考察線性范圍的考察精密量取芍藥苷對照品溶液(0.208mg/ml)1，2，4，6，8，10μl進樣，記錄色譜圖，測定其峰面積；結(jié)果見表3，并以峰面積值(A)對進樣量(B)進行回歸，得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程方法。
表3芍藥苷對照品測定結(jié)果

A＝15778B＝1405523r＝0.9999以上結(jié)果表明在0.208-2.08μg范圍內(nèi)，芍藥苷峰面積值與進樣量有良好的線性關(guān)系精密度試驗精密吸取芍藥苷對照品溶液(0.104mg/ml)10μl，重復(fù)進樣5次，測定，結(jié)果見表4。
表4芍藥苷精密度試驗

結(jié)果表明精密度良好。
空白對照溶液的制備與測定按處方比例及工藝，制備不含赤芍、牡丹皮的空白樣品，按供試品溶液的制備方法制備陰性對照溶液，測定?？瞻讓φ丈V中，在與對照品峰保留時間相近沒有色譜峰出現(xiàn)，表明陰性空白無干擾。
穩(wěn)定性試驗取樣品(批號為020306)及對照品溶液分別于0，0.5，1，2，4小時，進樣10μl，測定，結(jié)果見表5。
表5穩(wěn)定性試驗結(jié)果

試驗結(jié)果表明，對照品與樣品溶液均在4小時內(nèi)穩(wěn)定性良好。
重現(xiàn)性試驗按擬定的含量測定方法，對同一批樣品(批號020306)分別制備樣品供試液，測得峰面積值并計算含量，結(jié)果見表6。
表6樣品重現(xiàn)性試驗(n＝2)

結(jié)果表明按擬定的含量測定方法，重現(xiàn)性良好。
加樣回收率試驗精密稱取已知含量的樣品(批號020306)適量，分別加入對照品溶液適量，按上述樣品制備方法和色譜條件制備樣品，進樣。以下列公式計算回收率，結(jié)果見表7。

表7樣品回收率試驗結(jié)果

試驗結(jié)果表明回收率均在95～105％之間，加樣回收良好。
5、樣品含量測定分別精密吸取對照品溶液與樣品溶液，按正文含量測定項下方法，測定，結(jié)果見表8。
表8樣品中芍藥苷含量測定結(jié)果

根據(jù)上述試驗結(jié)果，考慮到藥材來源，以及制劑生產(chǎn)，貯藏等因素，故暫定本品含赤芍和牡丹皮以芍藥苷(C23H28O11)計，水蜜丸每1g不得少于0.60mg；大蜜丸每丸不得少于3.3mg。
6、赤芍藥材的含量測定取本品粉末約0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加稀乙醇50ml，稱定重量，超聲處理30分鐘，放冷，用稀乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液5ml，置25ml棕色量瓶中，加稀乙醇至刻度，搖勻，即得，結(jié)果見表9。
表9不同產(chǎn)地赤芍藥材芍藥苷含量測定結(jié)果

根據(jù)測定結(jié)果，考慮到藥材產(chǎn)地、加工炮制、貯藏等因素和《中國藥典》中含量限度規(guī)定，暫定含量不低于1.8％。
權(quán)利要求
1.一種中藥制劑金嗓清音丸的質(zhì)量檢測方法，將玄參、地黃、麥冬、黃芩、牡丹皮、赤芍、川貝母、澤瀉、薏苡仁(炒)、石斛、僵蠶(麩炒)、薄荷、胖大海、蟬蛻、木蝴蝶、甘草，粉碎成細(xì)粉，過篩，混勻；每100g粉末加煉蜜35～50g與適量的水，制丸，干燥，用活性炭包衣，制成水蜜丸；或加煉蜜110～130g制成大蜜丸，即得，其特征在于包括以下步驟(1)取本品水蜜丸10g，研細(xì)；或取大蜜丸16g，剪碎，加硅藻土8g，研勻；加水80ml，超聲處理20分鐘，在轉(zhuǎn)速為3500轉(zhuǎn)/分鐘的離心機中離心10分鐘，取上清液加鹽酸2ml，微沸5分鐘，濾過，濾液用三氯甲烷提取3次，每次20ml，合并三氯甲烷提取液，揮干，殘渣加三氯甲烷1ml使溶解，作為供試品溶液；另取麥冬對照藥材0.5g，加水40ml，同法制成對照藥材溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以4∶1的三氯甲烷-丙酮為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在105℃烘至斑點顯色清晰；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點；(2)取本品水蜜丸10g，研細(xì)，或取大蜜丸16g，剪碎，加硅藻土8g，研勻；加乙醚60ml，低溫回流1小時，濾過，濾液揮去乙醚，殘渣加丙酮1ml使溶解，作為供試品溶液；另取丹皮酚對照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各10ul，分別點于同一硅膠G薄層板上，以3∶1的環(huán)己烷-乙酸乙酯為展開劑，展開，取出，晾干，噴以鹽酸酸性5％三氯化鐵乙醇溶液，加熱至斑點顯色清晰；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的藍褐色斑點；(3)取本品水蜜丸12g，研細(xì)，或取大蜜丸18g，切碎，加硅藻土9g，研勻；加甲醇80ml，超聲處理20分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加水20ml使溶解，用鹽酸調(diào)節(jié)PH值至約為2，用乙酸乙酯振搖提取2次，每次20ml，合并提取液，蒸干，殘渣加甲醇1ml使溶解，作為供試品溶液；另取黃芩苷對照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各10ul，分別點于同一硅膠G薄層板上，以5∶3∶1∶1的乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水為展開劑，展開，取出，晾干，噴以鹽酸酸性5％三氯化鐵乙醇溶液；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點；(4)芍藥苷含量測定對照品溶液的制備取芍藥苷對照品適量，精密稱定，加稀乙醇制成每1ml含0.1mg的溶液，即得；供試品溶液的制備取本品水蜜丸適量，研細(xì)，取約1g；或取重量差異項下的大蜜丸，剪碎，混勻，取約1.6g，精密稱定；置具塞錐形瓶中，精密加入稀乙醇25ml，密塞，稱定重量，超聲處理30分鐘，放冷，再稱定重量，用稀乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得；用高效液相色譜法測定以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以17∶83的乙腈-0.1％磷酸溶液為流動相；檢測波長為232nm；理論板數(shù)按芍藥苷峰計算應(yīng)不低于2000；分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各10ul，注入液相色譜儀，測定，計算樣品中芍藥苷的含量。
2.如權(quán)利要求1所述的一種中藥制劑金嗓清音丸的質(zhì)量檢測方法，其特征在于所述中藥制劑含赤芍和牡丹皮以芍藥苷計，水蜜丸每1g不得少于0.60mg；大蜜丸每丸不得少于3.3mg。
全文摘要
本發(fā)明屬中藥成方制劑領(lǐng)域，具體來說是涉及一種中藥制劑金嗓清音丸的質(zhì)量檢測方法。本發(fā)明提供了對丹皮酚、黃芩苷的定性鑒別，制定出了最佳的供試品制備方法，找到了合適的展開劑，能對該制劑進行有效的定性鑒別。此外本發(fā)明提供了芍藥苷的含量測定方法，因為芍藥苷與其它組份分離度、重現(xiàn)性、精密度、回收率好，所以采用高效液相色譜法測定本品中芍藥苷的含量，制定出了最佳的供試品制備方法和流動相配制方法，大大提高了芍藥苷的含量檢測準(zhǔn)確度。本方法的建立，有利于市場上對該中藥制劑的真?zhèn)蝺?yōu)劣進行鑒別。
文檔編號A61K9/20GK101028460SQ200710017620
公開日2007年9月5日 申請日期2007年4月4日 優(yōu)先權(quán)日2007年4月4日
發(fā)明者黃小華, 付彬, 張 浩, 雒西萍 申請人:西安碑林藥業(yè)股份有限公司