專利名稱：黃體生成激素在控制性超排卵中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及體內(nèi)外輔助生殖技術(shù)(ART)領(lǐng)域，特別是使用促性腺激素的控制性超排卵(controlled ovarian hyperstimulation，COH)。
背景技術(shù)：
許多不孕婦女每年進(jìn)行誘導(dǎo)排卵程序。直至20年前，誘導(dǎo)排卵還只用于治療無卵性不孕癥；然而，采用輔助生殖技術(shù)(ART)可將這些程序發(fā)展至用在月經(jīng)正常的婦女中，目的是獲得多卵泡發(fā)育。
對(duì)于輔助生殖技術(shù)(ART)，例如體外受精(IVF)或IVF與卵子胞漿內(nèi)單精子注射(ICSI)結(jié)合以及胚胎移植(ET)，排卵前才從女患者上收集卵母細(xì)胞。卵母細(xì)胞在體外受精，評(píng)估所得的胚胎，選擇適合移植的胚胎。并非每個(gè)卵母細(xì)胞都會(huì)受精，也不是每個(gè)受精卵母細(xì)胞都會(huì)發(fā)育為一個(gè)可存活的胚胎。此外，移植也有可能不成功。因?yàn)樵斐山Y(jié)果失敗的可能性很多，而且收集卵細(xì)胞具有相對(duì)侵犯性，所以最好收集盡可能多的卵母細(xì)胞。
為此，通常利用COH來進(jìn)行ART以增加卵母細(xì)胞的數(shù)量(1)。COH的標(biāo)準(zhǔn)方案(2)包括一個(gè)向下調(diào)節(jié)的階段，在這個(gè)階段中，通過給予促性腺激素釋放激素(GnRH)激動(dòng)劑使內(nèi)源性黃體生成激素(LH)下調(diào)，接著的是一個(gè)刺激階段，在這一階段中，每日給予卵泡刺激素(FSH)，通常約150-225IU/天，誘導(dǎo)卵泡發(fā)育(卵泡生成)。也可采用有FSH活性的其他分子。另一種選擇是在自然月經(jīng)或誘導(dǎo)月經(jīng)后用FSH開始刺激，再給予GnRH拮抗劑(一般在刺激階段第6天前后時(shí)間開始)。當(dāng)至少有3個(gè)卵泡＞16毫米(其中一個(gè)是18毫米)時(shí)，給予單丸劑(single bolus)hCG(5-10,000IU)以模擬自然LH峰和引發(fā)排卵。注射hCG后36-38小時(shí)定為回收卵母細(xì)胞的時(shí)間。
本發(fā)明使用GnRH類似物，例如激動(dòng)劑或拮抗劑的基本原理是防止在不適當(dāng)?shù)臅r(shí)間出現(xiàn)可能導(dǎo)致未成熟排卵和卵泡黃體化的LH峰(3)。一直以來，人們發(fā)現(xiàn)GnRH激動(dòng)劑長(zhǎng)時(shí)間治療方案(即在周期的黃體中期先開始誘導(dǎo)排卵或之前開始的方案)更容易給患者安排給藥時(shí)間、卵泡產(chǎn)率更高、臨床整體結(jié)果更好(4)。采用拮抗劑在臨床上相對(duì)較新穎，但預(yù)計(jì)可獲得相似的有益效果，還有給藥時(shí)間更短的優(yōu)點(diǎn)。
若延長(zhǎng)給予GnRH激動(dòng)劑的時(shí)間，內(nèi)源性LH在整個(gè)周期會(huì)被大大抑制，若延長(zhǎng)給予GnRH拮抗劑的時(shí)間，內(nèi)源性LH在刺激階段后期會(huì)被大大抑制。這種與卵泡發(fā)育相矛盾的情形與自然周期不同。自然周期的LH水平慢慢遞增，幾天后在中期達(dá)到高峰。
許多人探究了LH在COH刺激階段以及在誘導(dǎo)排卵方案中的重要性。眾所周知及本技術(shù)領(lǐng)域公認(rèn)誘導(dǎo)排卵的技術(shù)或方法與COH方案截然不同，盡管二者都可能涉及給予FSH。
Filicori等人研究了低劑量hCG作為L(zhǎng)H的替代品在卵泡生成和誘導(dǎo)排卵中的作用(5)。hCG的給予(50IU hCG/天)與FSH的給予同時(shí)開始。此方案以每日為基礎(chǔ)連續(xù)進(jìn)行，直至用hCG丸劑引發(fā)排卵。接受hCG的組與僅接受FSH的對(duì)照組所得到的小卵泡(＜10毫米)、中卵泡(10-14毫米)和大卵泡(＞14毫米)數(shù)量接近，但hCG治療組的FSH的累計(jì)劑量與FSH的刺激時(shí)間均減少。
WO 00/67778(Applied Research System)提出在刺激階段使用LH。一項(xiàng)研究是在刺激階段早期把FSH和LH給予患者，然后在刺激階段后期給予FSH和LH或僅給予LH。另一項(xiàng)研究是在刺激階段早期只將FSH給予患者，然后在刺激階段后期給予LH。研究結(jié)果提示LH在刺激階段后期導(dǎo)致非優(yōu)勢(shì)卵泡閉鎖。因而提出用此方案來促進(jìn)單個(gè)優(yōu)勢(shì)卵泡的發(fā)育。
歐洲重組人LH研究集團(tuán)報(bào)導(dǎo)了與僅接受rhFSH的方案相比，把用來支持rhFSH誘導(dǎo)的卵泡發(fā)育的rhLH(75和225IU/天)給予低促性腺素性功能減退癥婦女，可以增加雌二醇分泌，增強(qiáng)FSH對(duì)卵泡生長(zhǎng)的作用，并使卵泡與hCG接觸時(shí)能成功地黃體化(6)。LH給予與FSH刺激在同一天開始，連續(xù)進(jìn)行直至給予hCG引發(fā)排卵。
Sullivan等人報(bào)導(dǎo)了當(dāng)撤消FSH時(shí)，刺激階段后期的LH能維持卵泡雌二醇的產(chǎn)生(7)。
Sills等人報(bào)導(dǎo)了一項(xiàng)研究，在這項(xiàng)研究中，整個(gè)刺激階段都以FSH或者FSH和75IU rhLH來治療各類不孕癥患者。作者得到的結(jié)論是在誘導(dǎo)排卵的整個(gè)過程中加入外源性LH對(duì)周期性能的改變不大(8)。
Ben-Amor等人(9)和Werlin等人(10)觀察了在卵泡期后半段期間把rhLH給予以長(zhǎng)時(shí)間下調(diào)方案治療的正常排卵患者的影響，而Williams等人(11)研究了在整個(gè)FSH刺激階段給予不同劑量rhLH的影響。發(fā)現(xiàn)各組患者沒有實(shí)質(zhì)性有益的臨床效果。
在使用FSH的COH方案中，一些患者(“不良應(yīng)答者”)對(duì)初始劑量的FSH無反應(yīng)，因而可能放棄該治療周期，轉(zhuǎn)而以較高初始劑量的FSH開始一個(gè)新周期。另外一些組的患者需要重復(fù)多個(gè)周期，因?yàn)樗齻兗词鼓艹晒厥章涯讣?xì)胞也無法懷孕。如果需要重復(fù)多個(gè)周期，可能對(duì)患者的身體和情緒產(chǎn)生負(fù)面作用。每一個(gè)重復(fù)周期都會(huì)嚴(yán)重影響不孕夫婦的生活。
因此，有必要提供一種方法，對(duì)采用較低FSH劑量或較短給藥時(shí)間的COH可以有相同或更好的卵泡應(yīng)答。還有必要提供一種診斷測(cè)試，可以判斷哪些患者是不良應(yīng)答者或者次優(yōu)應(yīng)答者，哪些患者可以應(yīng)答較低FSH劑量。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的一個(gè)目的在于提供一種COH的改進(jìn)方案。
本發(fā)明的另一個(gè)目的在于提供一種判斷哪些患者在COH中對(duì)FSH有良好、不良或次優(yōu)應(yīng)答的方法。
本發(fā)明的第一方面在于提供黃體生成激素(LH)或其類似物在制備誘導(dǎo)人患者多卵泡生成的藥物中的應(yīng)用，所述的藥物在COH刺激階段第1天至第4天或至約第4天給予。
以另一角度看，本發(fā)明提供黃體生成激素(LH)或其類似物在制備誘導(dǎo)人患者多卵泡生成的藥物中的應(yīng)用，所述的藥物在COH刺激階段第1天至第4天或至約第4天的引發(fā)期內(nèi)給予。
本發(fā)明的第二方面在于提供LH或其類似物在誘導(dǎo)人患者多卵泡生成中的應(yīng)用，所述的LH在COH刺激階段第1天至第4天或至約第4天給予。
以另一角度看，本發(fā)明提供LH或其類似物在誘導(dǎo)人患者多卵泡生成中的應(yīng)用，所述的LH在COH刺激階段第1天至第4天或至約第4天的引發(fā)期內(nèi)給予。
本發(fā)明的第三方面在于提供一種藥物組合物，所述的藥物組合物含有LH或其類似物，日劑量為20-400IU LH，在COH刺激階段第1天至第4天或至約第4天給予。
所述的藥物或藥物組合物(含有LH或其類似物)優(yōu)選從刺激階段第1天至第4天給予，更好是從第1天至第3天給予，最好從第1天至第2天給予。藥物或藥物組合物也可以單劑量給予。另外，所述的藥物或藥物組合物可在刺激階段第1天以單劑量給予。本發(fā)明的藥物組合物最好設(shè)計(jì)成用在本發(fā)明的方法和應(yīng)用中。
本發(fā)明的第四方面在于提供一種誘導(dǎo)人患者卵泡生成的試劑盒，所述的試劑盒含有每日1至5劑量LH，日劑量為20-400IU，或者其類似物等效劑量，以及每日6劑量或約6劑量或者以上FSH或其類似物。故本發(fā)明的試劑盒可含有或由每日1、2、3、4或5劑量LH或其類似物，以及每日6劑量或約6劑量或者以上FSH或其類似物組成。LH和FSH的適當(dāng)日劑量在上下文中已有敘述。優(yōu)選的試劑盒含有每日2、3或4劑量LH，日劑量為150IU或約150IU LH或者225IU LH，以及每日8-12劑量FSH，日劑量為150IU或約150IU FSH。本發(fā)明的試劑盒最好設(shè)計(jì)成用在本發(fā)明的方法和應(yīng)用中。
本發(fā)明的第五方面在于提供一種判斷患者在COH中對(duì)FSH的應(yīng)答的方法，所述方法包括以下步驟(A)測(cè)定患者的雄激素濃度，得到基礎(chǔ)值A(chǔ)1；(B)把約20至約400IU LH給予該患者；(C)在給予LH之后至少測(cè)定一次該患者的雄激素濃度，測(cè)定時(shí)間在給予LH后6小時(shí)或約6小時(shí)或以上，最好在給予LH后12小時(shí)或約12小時(shí)或以上，得到一數(shù)值A(chǔ)2；(D)根據(jù)雄激素水平的變化，將患者分為不良應(yīng)答者，次優(yōu)應(yīng)答者或良好應(yīng)答者。
另外，如下文詳述，在上述方法步驟(C)中，給予LH后的一段時(shí)間內(nèi)可以至少監(jiān)測(cè)/測(cè)定一次雄激素水平/濃度，在給予LH后最初6小時(shí)內(nèi)，例如1小時(shí)后可測(cè)一次或多次雄激素水平，這之后的一個(gè)或多個(gè)時(shí)間點(diǎn)可繼續(xù)作這樣的測(cè)定，得到一數(shù)值A(chǔ)2。一般來說，在給予LH后24小時(shí)內(nèi)進(jìn)行測(cè)定。
本發(fā)明的第六方面在于提供一種判斷患者在COH中對(duì)FSH的應(yīng)答的方法，所述方法包括以下步驟(A)測(cè)定患者的雌激素濃度，得到基礎(chǔ)值E1；(B)把約20至約400IU LH給予該患者；(C)給予LH后6小時(shí)或約6小時(shí)或以上，或者優(yōu)選12小時(shí)或約12小時(shí)或以上，更好是24小時(shí)或約24小時(shí)或以上，把約50至約300IU FSH給予該患者；(D)在給予FSH后12小時(shí)或約12小時(shí)或以上測(cè)定該患者的雌激素濃度，得到一數(shù)值E2；(E)根據(jù)雌激素水平的變化(E2-E1)，將患者分為不良應(yīng)答者，次優(yōu)應(yīng)答者或良好應(yīng)答者。
另外，如下文詳述，在上述方法步驟(D)中，給予FSH后的一段時(shí)間內(nèi)可以至少監(jiān)測(cè)/測(cè)定一次雌激素水平/濃度，在給予FSH后最初12小時(shí)內(nèi)，例如6小時(shí)后可測(cè)一次或多次雌激素水平，這之后的一個(gè)或多個(gè)時(shí)間點(diǎn)可繼續(xù)作這樣的測(cè)定，得到一數(shù)值E2。
在上述所有判斷方法中，雄激素和雌激素水平的測(cè)定最好在體外用取自合適患者的樣本進(jìn)行。
本發(fā)明的另一方面在于提供誘導(dǎo)人患者多卵泡生成的LH或其類似物，所述的LH或其類似物在COH刺激階段第1天至第4天或至約第4天給予。
本發(fā)明的另一方面在于提供誘導(dǎo)人患者多卵泡生成的LH或其類似物，所述的LH或其類似物在COH刺激階段第1天至第4天或至約第4天的引發(fā)期內(nèi)給予。
本發(fā)明的另一方面在于提供一種誘導(dǎo)患者多卵泡生成的方法，所述方法包括把LH或其類似物給予患者，其中所述的給予在COH刺激階段第1天至第4天或至約第4天進(jìn)行。
本發(fā)明的再一方面在于提供一種誘導(dǎo)患者多卵泡生成的方法，所述方法包括把LH或其類似物給予患者，其中所述的給予在COH刺激階段第1天至第4天或至約第4天的引發(fā)期內(nèi)進(jìn)行。
具體實(shí)施例方式
本發(fā)明涉及給予LH(或其類似物)誘導(dǎo)人患者多卵泡生成或改進(jìn)人患者的COH方案，以便例如增加回收胚胎的數(shù)量，所述的回收胚胎在早期分裂，因而著床和妊娠機(jī)會(huì)較高，引發(fā)排卵那天大于15mm的卵泡數(shù)量增多，引發(fā)排卵那天大卵泡與小卵泡之比率較大，而且卵母細(xì)胞數(shù)量也較多。所以，還可將本發(fā)明看作提供一種COH的改進(jìn)方案，例如與進(jìn)行常規(guī)COH方案的患者或一組患者相比，該改進(jìn)方案可以提高或增加人患者的著床率和/或妊娠率。
令人驚奇的是，本發(fā)明發(fā)現(xiàn)在COH治療過程中，刺激階段初期給予LH的時(shí)間相對(duì)較短，接著再給予FSH，這樣會(huì)產(chǎn)生增強(qiáng)多卵泡生成和普遍地改進(jìn)COH方案的效應(yīng)，以致例如增加回收胚胎的數(shù)量，所述的回收胚胎在早期分裂，因而著床和妊娠機(jī)會(huì)較高，引發(fā)排卵那天大于15mm的卵泡數(shù)量增多，引發(fā)排卵那天大卵泡與小卵泡之比率較大，而且卵母細(xì)胞數(shù)量也較多。而且，還可以降低患者達(dá)到多卵泡發(fā)育所需的FSH劑量。這一技術(shù)稱為“LH引發(fā)”。
給予LH的時(shí)段稱之引發(fā)期。對(duì)本說明書而言，引發(fā)期初期限定為刺激階段初期。
一般認(rèn)為，LH與受體在發(fā)育卵泡的膜細(xì)胞上相互作用，以刺激雄激素的產(chǎn)生。雌激素合成需要有雄激素作為芳香酶底物。
一般認(rèn)為，由LH誘導(dǎo)的局部雄激素濃度增大可增強(qiáng)FSH對(duì)生長(zhǎng)卵泡的作用。
在本發(fā)明所述的采用或給予LH的情況中，LH劑量可在20或約20至400或約400IU的范圍內(nèi)，優(yōu)選在50或約50至300或約300IU或者75或約75至225或約225IU的范圍內(nèi)，更好是在100或約100至200或約200IU或者75或約75至150或約150IU的范圍內(nèi)，最好是150或約150IU。其他可選擇的劑量是150或約150IU至300或約300IU LH，優(yōu)選225或約225IULH。這些劑量最好是日劑量。如果采用LH類似物，應(yīng)計(jì)算和給予相當(dāng)于這些LH劑量的等效劑量。
在本發(fā)明所述的采用或給予FSH的情況中，F(xiàn)SH劑量可在50或約50至300或約300IU的范圍內(nèi)，優(yōu)選在100或約100至250或約250IU范圍內(nèi)，最好是150或約150IU。其他可選擇的FSH劑量是75或約75IU至600或約600IU，75或約75IU至450或約450IU，優(yōu)選150或約150IU至375或約375IU，最好是300或約300IU。這些劑量最好是日劑量。如果采用FSH類似物，應(yīng)計(jì)算和給予相當(dāng)于這些劑量的等效劑量。
在一優(yōu)選方案中，把GnRH激動(dòng)劑給予患者的劑量要足以達(dá)到抑制卵巢功能。要獲得這種抑制的適當(dāng)方法已為人所知，現(xiàn)有技術(shù)中已有記載，可采用其中任何一種合適的方法，例如單次注射3.75毫克控釋型曲普瑞林(depotTriptorelin)，或者可選用日劑量布舍瑞林(Buserelin)或者醋酸亮丙瑞林(Leuprolide acetate)。通過監(jiān)測(cè)LH或雌二醇水平(LH＜5 IU/L，E2＜50pg/ml一般表示靜止期)來監(jiān)測(cè)卵巢功能的抑制。刺激階段可通過每日注射LH(如上文所述的劑量，例如約10-400IU，優(yōu)選150IU或225IU)來開始。約3至4天后，例如2.5天、3天、3.5天、4天或4.5天后，停止給予LH，轉(zhuǎn)而給予FSH(給予的劑量如上文所述的劑量，通常約50-300IU/天)。一般連續(xù)給予FSH，直至超聲成像顯示至少有3個(gè)卵泡＞16mm(其中1個(gè)卵泡是17mm或18mm或以上)。用hCG丸劑(5,000-10,000IU)引發(fā)排卵。另一可選擇的優(yōu)選方案為在同一天給予FSH和LH的天數(shù)是1天，即給予LH的最后一天可給予FSH。
給予一次LH或其類似物是足夠的，F(xiàn)SH的給予可同時(shí)，或者最好在第二天開始。當(dāng)給予單劑LH時(shí)，劑量應(yīng)約20-400IU LH。另外，LH的給予時(shí)間最多可為4天，例如，LH(或類似物)可從第1天至第4天或約第4天，或者從第1天至第3天或約第3天，或者從第1天至第2天或約第2天給予。在此情況下，LH最好為每日給予或每半日給予，劑量例如可參照上文所述的劑量。FSH的給予與LH的給予可同時(shí)開始，或者有3、2或1天是同一天給予的，但優(yōu)選在停止給予LH后開始給予或有1天是同一天給予的。換言之，在優(yōu)選實(shí)施例中，LH是在引發(fā)期中不給予外源性FSH的情況下給予的。此時(shí)FSH和LH的優(yōu)選劑量再次參照上文所述。
日劑量不必都相等。例如，在一優(yōu)選方案中，第1天可給予劑量150-300IU LH，優(yōu)選225IU LH，第2天可給予劑量75-225IU LH，優(yōu)選150IU LH，第3和4天可給予75-225IU LH，優(yōu)選75-150IU LH。另一個(gè)選擇是日劑量是相等的，在另一優(yōu)選方案中，日劑量可以是225IU LH。
促性腺激素的優(yōu)選給藥途徑是公知的，現(xiàn)有技術(shù)中的文獻(xiàn)也有記載，經(jīng)皮下、肌內(nèi)或靜脈注射給予。類似物可經(jīng)皮下、肌內(nèi)或靜脈注射給予，或者某些類似物也適合經(jīng)口服、皮下、直腸或鼻內(nèi)給予。
LH引發(fā)方案還可與GnRH拮抗劑而非GnRH激動(dòng)劑的治療聯(lián)用。在上一周期的黃體中期(優(yōu)選第23-26天，或者預(yù)計(jì)月經(jīng)開始前約3天)中通過給予LH(如上所述)來開始刺激階段。接著，如上所述，在月經(jīng)第1-3天開始給予FSH(先前并沒有給予GnRH激動(dòng)劑)。然后，在FSH刺激約第6天，給予GnRH拮抗劑，例如抗排卵肽、Azaline B、西曲瑞克(Cetrorelix)、加尼瑞克(Ganirelix)或Antarelix。用hCG丸劑引發(fā)排卵。通常持續(xù)給予拮抗劑直到給予hCG那天。LH和FSH最好不要在大致相同時(shí)間內(nèi)給予，例如它們同時(shí)給予的時(shí)間優(yōu)選不超過3天，更好是不超過2天，最好不超過1天。更好的情況是在停止給予LH之后才開始給予FSH，即它們不同時(shí)給予。
為了更好地預(yù)測(cè)月經(jīng)的開始時(shí)間，最好在開始LH引發(fā)方案之前讓患者服用避孕丸一個(gè)月。停藥后約2或3天會(huì)來月經(jīng)。如果用避孕丸，可在停藥當(dāng)天開始LH引發(fā)。
整個(gè)刺激階段都用超聲成像來監(jiān)測(cè)卵泡發(fā)育。
與不用LH的COH方案相比，在COH方案的刺激階段早期使用LH可以降低所用的FSH總劑量。例如，在先前無給予LH的情況下所用的FSH一般劑量為100-250IU/天，通常約150IU/天。有了LH引發(fā)，如果判斷卵泡發(fā)育是足夠的，就可以將FSH劑量降至例如少于150IU/天，或者少于100IU/天，如50-140IU/天或50-90IU/天。另外，也可用相同或較低日劑量，而引發(fā)排卵的時(shí)間比沒有LH引發(fā)的情況要早，這意味著FSH的累計(jì)劑量較少。
以黃體生成激素(LH)對(duì)本發(fā)明進(jìn)行敘述，但本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)懂得，還可使用具有LH活性的化合物，即具有與LH相同的生理、生物化學(xué)或生物作用的LH類似物。例如，絨毛膜促性腺激素(CG)可用作LH的替代物是公知的。一般來說，在Van Hell bioassay藥典(12)中1IU hCG相當(dāng)于5-7IU LH，所以本領(lǐng)域技術(shù)人員可計(jì)算hCG的等效劑量。
已被公開的其他LH類似物的例子可參見EP 0322226(Applied ResearchSystem)、WO 99/25 849、WO 90/06844和WO 96/05224(全部授予WashingtonUniversity)以及WO 00/61586(Akxo Nobel)。
本文以FSH為主要卵泡刺激劑來對(duì)本發(fā)明進(jìn)行討論。本領(lǐng)域技術(shù)人員懂得，F(xiàn)SH可以生物活性類似物來代替，或者以刺激內(nèi)源性FSH分泌的化合物來代替。后一種情況包括芳香酶抑制劑和抗雌激素如他莫西芬(tamoxifen)和氯芪酚檸檬酸鹽(CC)。這些化合物通過消除雌激素施加在下丘腦的負(fù)反饋(或者通過拮抗雌激素受體，作用與CC和他莫西芬一樣，或者通過大大降低雌激素濃度，作用與芳香酶抑制劑一樣)來刺激內(nèi)源性FSH分泌。在刺激階段還可將FSH與這些試劑聯(lián)用。
FSH與本發(fā)明的LH應(yīng)用聯(lián)用的特別優(yōu)選形式稱為FSH-CTP。這種長(zhǎng)效的人FSH已在WO 93/06844中描述，它有一個(gè)野生型FSHα-亞基和一個(gè)β-亞基，該β-亞基由在其羧基末端上與hCGβ-亞基(天然hCGβ序列殘基位置112-118至位置145)的羧基末端肽(CTP)融合的野生型FSHβ-亞基組成。其他種類的FSH類似物包括例如單鏈FSH類似物，其中β-亞基與hCG的CTP融合，其再與FSHα-亞基融合，如WO 96/05224所述(單鏈FSH-CTP)。在刺激階段還可將FSH與這些試劑聯(lián)用。
最好在刺激階段第1天開始給予LH，但持續(xù)時(shí)間不要超過4天。如果判斷患者是一個(gè)良好應(yīng)答者，第1和2天給予約20-400IU LH的日劑量是足夠的。若判斷患者是一個(gè)不良應(yīng)答者或次優(yōu)應(yīng)答者，可連續(xù)給予20-400IU LH的日劑量，直至在第3或第4天中任一天停藥。判斷患者是一個(gè)良好應(yīng)答者、不良應(yīng)答者或次優(yōu)應(yīng)答者，可基于以前的ART周期結(jié)果，或者基于下文所述的診斷測(cè)試結(jié)果。
如前所述，hCG與LH有許多相同的生物作用。hCG的半衰期比LH長(zhǎng)得多，所以若用hCG而不用LH，在第1天給予單次hCG(約3-100IU hCG)是足夠的。
如上所述，本發(fā)明另一方面提供一種判斷患者在COH中對(duì)FSH的應(yīng)答的方法。這樣可給患者選擇合適的COH方案，避免把過多劑量的FSH給予良好應(yīng)答者，以及增加次優(yōu)或不良應(yīng)答者的成功機(jī)會(huì)。這種方法采用單次給藥，例如在COH方案刺激階段開始時(shí)注射LH(例如上述關(guān)于LH的劑量，如約50-300IU，優(yōu)選100-200IU，更好是約150IU)，作為“攻擊”以刺激膜細(xì)胞合成雄激素。LH注射在刺激階段第1天進(jìn)行。接著在給予LH之后至少6小時(shí)或約6小時(shí)，優(yōu)選給予LH之后至少12小時(shí)或約12小時(shí)，至少測(cè)1次血清雄激素水平。在6小時(shí)之前，對(duì)LH攻擊的應(yīng)答不明顯。更好的是，在一段時(shí)間內(nèi)，例如注射LH后0、1、6、12和24小時(shí)監(jiān)測(cè)雄激素水平，以便得到雄激素濃度隨著LH注射而遞增的曲線。將LH攻擊之后的雄激素水平與攻擊前水平進(jìn)行比較。例如，如果LH注射前的雄激素水平是A1，注射后的雄激素水平是A2，那么可計(jì)算該兩個(gè)數(shù)值之差ΔA(即ΔA＝A2-A1)。數(shù)值ΔA是用來表示血清雄激素水平的變化的通用參數(shù)。它不限于2個(gè)數(shù)值簡(jiǎn)單相減，也可以是許多點(diǎn)所得到的綜合結(jié)果。
如果只測(cè)1次雄激素水平，就不應(yīng)在約6小時(shí)之前進(jìn)行測(cè)量，因?yàn)樾奂に厮綗o足夠時(shí)間來應(yīng)答LH攻擊。如果只測(cè)1次雄激素水平，宜在12小時(shí)之后進(jìn)行，更好是在18小時(shí)或約18小時(shí)或者24小時(shí)或約24小時(shí)之后進(jìn)行。
LH攻擊方法最好應(yīng)用于進(jìn)行垂體下調(diào)方案的患者中，該下調(diào)方案包括在給予LH之前用GnRH激動(dòng)劑治療至少約3天，優(yōu)選約7天。
具有良好雄激素應(yīng)答的患者可繼續(xù)僅以FSH刺激的COH方案。不良或次優(yōu)應(yīng)答者可接受LH注射(例如上述關(guān)于LH的劑量，如50-300IU，優(yōu)選75-225IU，更好是約150IU/天)，注射時(shí)間最多約3天，例如患者可接受注射1、2或3天，例如直至看到有良好雄激素應(yīng)答。然后，每日給予FSH，劑量約75-600或75-450IU/天，優(yōu)選約150-375IU/天，更好是約300IU/天。
優(yōu)選監(jiān)測(cè)的雄激素是雄烯二酮和睪丸素，更好是雄烯二酮。此外，也可測(cè)量它們的前體，例如17-α-羥基孕酮(17αOHP)。
良好應(yīng)答者是那些血清雄烯二酮濃度(ΔA)在24小時(shí)后以2nmol/L或約2nmol/L或以上遞增的患者。不良或次優(yōu)應(yīng)答者的遞增幅度少于2nmol/L或約2nmol/L。如果測(cè)量的是睪丸素，良好應(yīng)答者的血清睪丸素水平在24小時(shí)后以0.25至0.75nmol/L或約0.25至0.75nmol/L或以上遞增，而不良或次優(yōu)應(yīng)答者的遞增幅度少于0.25nmol/L或約0.25nmol/L。
對(duì)于分別有良好、不良或次優(yōu)雄激素應(yīng)答的患者，據(jù)此可確定他們可能在COH中分別對(duì)FSH有良好、不良或次優(yōu)應(yīng)答。這樣，如有良好雄激素應(yīng)答的患者，可將他確定為在本文所述的本發(fā)明方法的COH中可能是對(duì)FSH有良好應(yīng)答。
為了提高本方法的靈敏度，在給予LH攻擊之前，把腎上腺雄激素分泌的抑制劑如地塞米松給予患者，基本上消除雄激素的基底水平。
在上述LH攻擊的一個(gè)變換中，監(jiān)測(cè)血清雌激素水平而非監(jiān)測(cè)雄激素水平。LH刺激膜細(xì)胞產(chǎn)生雄激素，然后通過芳香酶將雄激素轉(zhuǎn)為雌激素。
因?yàn)镕SH能增強(qiáng)雄激素向雌激素的轉(zhuǎn)化，所以在LH攻擊方法的另一個(gè)變換中，在作LH攻擊之后可注射FSH，然后測(cè)定雌激素水平。此外，在COH方案刺激階段的第1天給予單次注射LH(例如上述關(guān)于LH的劑量，如約50-300IU，優(yōu)選75-225IU，更好是約150IU)，作為“攻擊”以刺激膜細(xì)胞合成雄激素。注射LH后，給予FSH注射(如約50-300IU，優(yōu)選約150IU)。給予LH攻擊后6小時(shí)或約6小時(shí)之前，優(yōu)選在12小時(shí)或約12小時(shí)之前，更好是在24小時(shí)或約24小時(shí)之前不注射FSH。FSH刺激芳香酶產(chǎn)生，因此芳香酶可將LH刺激膜細(xì)胞導(dǎo)致增加的雄激素轉(zhuǎn)化為雌激素。接著，最好在給予FSH之后12小時(shí)或約12小時(shí)之后至少測(cè)1次雌激素水平。12小時(shí)可允許芳香酶因應(yīng)答FSH而發(fā)生上調(diào)。更好的是，在一段時(shí)間內(nèi)，例如注射FSH后0、6、12和24小時(shí)監(jiān)測(cè)雌激素水平。將LH攻擊之后的雌激素水平與攻擊前水平進(jìn)行比較。例如，如果LH注射前的雌激素水平是E1，注射后的雌激素水平是E2，那么可計(jì)算該兩個(gè)數(shù)值之差ΔE(即ΔE＝E2-E1)。數(shù)值ΔE是用來表示血清雌激素水平的變化的通用參數(shù)。它不限于2個(gè)數(shù)值簡(jiǎn)單相減，也可以是許多點(diǎn)所得到的綜合結(jié)果。
如果只測(cè)1次雌激素水平，就不應(yīng)在注射FSH攻擊后約12小時(shí)之前進(jìn)行測(cè)量，因?yàn)榇萍に厮綗o足夠時(shí)間來應(yīng)答LH/FSH攻擊。如果只測(cè)1次雌激素水平，宜在18小時(shí)之后進(jìn)行，更好是在24或約24小時(shí)之后進(jìn)行。
LH+FSH攻擊方法最好應(yīng)用于進(jìn)行垂體下調(diào)方案的患者中，該下調(diào)方案包括在給予LH之前用GnRH激動(dòng)劑治療至少約3天，優(yōu)選約7天。
具有良好雌激素應(yīng)答的患者可繼續(xù)僅以FSH(約100-225IU FSH/天，優(yōu)選約150IU FSH/天)刺激的COH方案。不良或次優(yōu)應(yīng)答者可繼續(xù)LH注射(例如上述關(guān)于LH的劑量，如50-300IU，優(yōu)選75-225IU，更好是約150IU/天)，注射時(shí)間最多約3天，例如患者可接受注射1、2或3天，例如直至看到有良好雌激素應(yīng)答，再開始給予FSH劑量(例如上述關(guān)于FSH的劑量，或者如約75-450IU FSH/天，優(yōu)選約150-375IU，更好是約300IU/天)。
優(yōu)選監(jiān)測(cè)的雌激素是雌二醇(E2)。
良好應(yīng)答者是那些血清雌二醇水平在24小時(shí)后以5pmol/L或約5pmol/L或以上遞增的患者。不良或次優(yōu)應(yīng)答者的遞增幅度少于5pmol/L或約5pmol/L。
對(duì)于分別有良好、不良或次優(yōu)雌激素應(yīng)答的患者，據(jù)此可確定他們可能在COH中分別對(duì)FSH有良好、不良或次優(yōu)應(yīng)答。這樣，如有良好雌激素應(yīng)答的患者，可將他確定為在本文所述的本發(fā)明方法的COH中可能是對(duì)FSH有良好應(yīng)答。
為了提高本方法的靈敏度，在給予LH攻擊之前，把腎上腺雄激素分泌的抑制劑如地塞米松給予患者，基本上消除雄激素的基底水平。
上述任何一種攻擊方法可在刺激階段的過程中重復(fù)使用。
在上述任何一種攻擊方法中，最好同時(shí)監(jiān)測(cè)雄激素和雌激素。雄激素和雌激素的監(jiān)測(cè)方法已為人所知，在本技術(shù)領(lǐng)域已有記載，可采用其中任何一種方法。
例如，用固相涂層管放射性免疫測(cè)定法(Coat-A-CountTM，DiagnosticProducts Corporation，Los Angeles，USA)可測(cè)定睪丸素水平。
例如，用放射性免疫測(cè)定法(Diagnostic Laboratories Inc.，Webster，USA)可測(cè)定雄烯二酮水平。
例如，用放射性免疫測(cè)定法(Diagnostic Products Corporation，LosAngeles，USA)可測(cè)定17β-雌二醇水平。
本發(fā)明的方法和應(yīng)用中所用的促性腺激素最好是人促性腺激素，可以從任何資源中獲得，只要它們沒有受到任何會(huì)顯著影響其作用的物質(zhì)(尤其是其他促性腺激素)污染。雖然因?yàn)橹亟MFSH和LH(rhFSH和rhLH)的純度高而被優(yōu)選使用，但也可用尿促性腺激素。特別優(yōu)選用rhLH。
rhLH的藥物動(dòng)力學(xué)與垂體LH極為相似。以1小時(shí)初始半衰期(t1/2)經(jīng)快速分布期之后，以大約10小時(shí)終止半衰期(t1/2)消除rhLH。體內(nèi)消失的總速率是2升/小時(shí)，不到5％的劑量經(jīng)直腸排出。穩(wěn)態(tài)體積是8升。這些藥物動(dòng)力學(xué)特性與由尿產(chǎn)生的hCG藥物動(dòng)力學(xué)特性相反。后者的終止半衰期t1/2超過30小時(shí)。預(yù)計(jì)hCG在體內(nèi)循環(huán)的時(shí)間比LH長(zhǎng)2至3倍。
在本發(fā)明方法中用來例如誘導(dǎo)或增強(qiáng)卵泡生成的藥物組合物也在本發(fā)明的范圍之內(nèi)，所述藥物組合物含有LH或其類似物以及藥學(xué)上可接受的稀釋劑、載體或賦形劑。本領(lǐng)域技術(shù)人員知道適合配制藥物組合物的各種稀釋劑或賦形劑。所述藥物組合物最好含有日劑量LH(例如劑量為20-400IU LH，優(yōu)選50-300IU LH，更好是75-225IU LH或100-200IU LH，最好是150IULH)，供COH刺激階段第1天至約第4天，優(yōu)選第1天至第4天，更好是第1天至第3天，最好是第1天至第2天或僅第1天給藥。本文上下文也敘述了LH的其他適當(dāng)劑量。
LH通常以單位劑量配成固體形式，可以溶解形成無菌注射溶液以用于肌內(nèi)或皮下注射。固體一般用凍干法制成。常用的賦形劑和載體包括蔗糖、乳糖、氯化鈉，諸如磷酸二氫鈉和磷酸氫鈉等緩沖劑。使用前才用水稀釋可制成注射溶液。
LH還可配制成注射溶液，其含有任何一種上面列出的賦形劑和緩沖劑以及本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的其他賦形劑和緩沖劑。
小分子LH激動(dòng)劑，如WO 00/61586(Akzo Nobel)所報(bào)導(dǎo)的那些LH激動(dòng)劑與適當(dāng)賦形劑混合后制成糖漿、片劑或膠囊形式可口服給予。另外，它們也可制成適合噴霧的溶液或細(xì)粉末的形式經(jīng)鼻內(nèi)給予。
現(xiàn)在，將以下列非限制性的實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作較詳細(xì)的敘述。
實(shí)施例按以下標(biāo)準(zhǔn)選擇患者入選標(biāo)準(zhǔn)不孕癥類型輸卵管IVF和原因不明性不孕(總共120例)月經(jīng)期正常年齡＜37歲身體質(zhì)量指數(shù)(BMI)30最近無服用激素有兩個(gè)功能卵巢排除標(biāo)準(zhǔn)超聲波檢查確定為多囊性卵巢(PCO)身體質(zhì)量指數(shù)(BMI)＞30有一個(gè)功能卵巢其他正患有的疾病方案通過在開始前注射Lupron、Synarel或Zoladex共14-18天使患者向下調(diào)節(jié)(在月經(jīng)期第18-23天開始)。引發(fā)期的起點(diǎn)(第L1天)要求血清雌二醇(E2)水平＜150pmol/L(50pg/ml)以及只有1個(gè)卵巢囊腫的直徑＜30mm。
患者在第L1-L4天(引發(fā)期)每日接受安慰劑或225IU rhLH。
從引發(fā)期最后一天開始，患者每日接受150IU FSH(第L4天后停止給予LH)，持續(xù)7天(S1至S7)。如果有可能造成過度刺激，可在第S7天或以后將劑量減少。如果E2的循環(huán)濃度少于450pmol/L和/或不到6個(gè)卵泡的直徑＞8mm，可在第S7天將劑量增大到300IU FSH/天。
連續(xù)給予FSH，直至最大卵泡的平均直徑至少達(dá)到17mm，以及另外2個(gè)卵泡的平均直徑16mm，此時(shí)，給予排卵引發(fā)劑量的hCG(5,000-10,000IUhCG)。注射hCG后大約36小時(shí)定為回收卵母細(xì)胞的時(shí)間。使卵母細(xì)胞在體外受精。一般認(rèn)為，早期分裂(受精后25小時(shí))的胚胎有極大機(jī)會(huì)著床和妊娠。受精后25小時(shí)進(jìn)行早期分裂檢查，記錄分裂胚胎、配子配合(精子與卵子結(jié)合)和無分裂的胚胎的數(shù)量。
需要記錄的還有給予hCG當(dāng)天卵泡的數(shù)量和直徑，特別是直徑大于15mm的卵泡數(shù)量；卵母細(xì)胞產(chǎn)率；所用rFSH的安瓿數(shù)；每個(gè)卵母細(xì)胞所用rFSH的安瓿數(shù)；第S7天雌二醇的循環(huán)濃度；臨床人群對(duì)標(biāo)準(zhǔn)劑量治療(150IU FSH/天)產(chǎn)生“不良應(yīng)答”的減少人數(shù)；給予hCG時(shí)大卵泡與小卵泡之比率；在第S7天平均直徑＞10mm的卵泡數(shù)量；在第S7天循環(huán)inhibin-B的濃度。
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權(quán)利要求
1.黃體生成激素(LH)或其類似物在制備誘導(dǎo)人患者多卵泡生成的藥物中的應(yīng)用，所述的藥物在COH刺激階段第1天至約第4天的引發(fā)期內(nèi)給予。
2.如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于所述的藥物在引發(fā)期內(nèi)在不給予外源性FSH的情況下給予。
3.如權(quán)利要求1或2所述的應(yīng)用，其特征在于所述的藥物以約20-400IULH/天、約100-200IULH/天或約150IULH/天給予。
4.如權(quán)利要求1至3中任何一項(xiàng)所述的應(yīng)用，其特征在于引發(fā)期從刺激階段第1天持續(xù)至第3天。
5.如權(quán)利要求1至3中任何一項(xiàng)所述的應(yīng)用，其特征在于引發(fā)期從刺激階段第1天持續(xù)至第2天。
6.如權(quán)利要求1至3中任何一項(xiàng)所述的應(yīng)用，其特征在于所述的藥物在刺激階段第1天以單劑量給予。
7.如權(quán)利要求1至6中任何一項(xiàng)所述的應(yīng)用，其特征在于所述的LH用等效劑量的hCG來代替。
8.如權(quán)利要求1至6中任何一項(xiàng)所述的應(yīng)用，其特征在于所述的LH是rhLH。
9.黃體生成激素(LH)或其類似物在誘導(dǎo)人患者多卵泡生成中的應(yīng)用，所述的LH在COH刺激階段第1天至約第4天的引發(fā)期內(nèi)給予。
10.如權(quán)利要求9所述的應(yīng)用，其特征在于所述的LH或其類似物給予按權(quán)利要求2至8中任何一項(xiàng)所規(guī)定給予。
11.一種增強(qiáng)卵泡生成的藥物組合物，其特征在于所述的藥物組合物含有LH或其類似物，日劑量為20-400IULH，在COH刺激階段第1天至約第4天給予。
12.一種判斷患者在COH中對(duì)FSH的應(yīng)答的方法，其特征在于所述的方法包括以下步驟(A)測(cè)定患者的雄激素濃度，得到基礎(chǔ)值A(chǔ)1；(B)把約20至約400IULH給予該患者；(C)在給予LH之后至少測(cè)一次該患者的雄激素濃度，測(cè)定時(shí)間在給予LH后約6小時(shí)或以上，得到一數(shù)值A(chǔ)2；(D)根據(jù)雄激素水平的變化，將患者分為不良應(yīng)答者，次優(yōu)應(yīng)答者或良好應(yīng)答者。
13.如權(quán)利要求12所述的方法，其特征在于在步驟(B)中，LH的給予量約150IU。
14.如權(quán)利要求12或13所述的方法，其特征在于在步驟(C)中，在24小時(shí)內(nèi)測(cè)量多次雄激素濃度。
15.如權(quán)利要求12、13或14所述的方法，其特征在于所測(cè)量的雄激素是雄烯二酮。
16.如權(quán)利要求15所述的方法，其特征在于良好應(yīng)答者是24小時(shí)后血清雄烯二酮水平以約2nmol/L或以上遞增的患者。
17.一種判斷患者在COH中對(duì)FSH的應(yīng)答的方法，其特征在于所述的方法包括以下步驟(A)測(cè)定患者的雌激素濃度，得到基礎(chǔ)值E1；(B)把約20至約400IULH給予該患者；(C)給予LH后至少6小時(shí)，把約50至約300IUFSH給予該患者；(D)在給予FSH后至少12小時(shí)測(cè)定該患者的雌激素濃度，得到一數(shù)值E2；(E)根據(jù)雌激素水平的變化(E2-E1)，將患者分為不良應(yīng)答者，次優(yōu)應(yīng)答者或良好應(yīng)答者。
18.如權(quán)利要求17所述的方法，其特征在于在步驟(B)中，LH的給予量約150IU。
19.如權(quán)利要求17或18所述的方法，其特征在于在步驟(C)中，F(xiàn)SH的給予量約150IU。
20.如權(quán)利要求17、18或19所述的方法，其特征在于在24小時(shí)內(nèi)測(cè)量多次雌激素濃度。
21.如權(quán)利要求17至20中任何一項(xiàng)所述的方法，其特征在于所測(cè)量的雌激素是雌二醇。
22.如權(quán)利要求21所述的方法，其特征在于良好應(yīng)答者是24小時(shí)后血清雌二醇水平以約50pmol/L或以上遞增的患者。
23.一種誘導(dǎo)人患者卵泡生成的試劑盒，其特征在于所述的試劑盒含有每日1至5劑量LH，日劑量為20-400IULH，或者其類似物等效劑量，以及每日約6劑量或以上FSH或其類似物。
全文摘要
本發(fā)明提供一種黃體生成激素(LH)或具有LH活性的類似物在控制性超排卵(COH)中輔助卵泡生成的新應(yīng)用，其中在COH刺激階段第1天至約第4天的引發(fā)期內(nèi)給予LH或其類似物。
文檔編號(hào)A61K38/24GK1553809SQ02817574
公開日2004年12月8日 申請(qǐng)日期2002年9月12日 優(yōu)先權(quán)日2001年9月12日
發(fā)明者S·西利爾, C·M·豪爾斯, S 西利爾, 豪爾斯 申請(qǐng)人:應(yīng)用研究系統(tǒng)Ars股份公司