專利名稱：氨基脫氧甘露糖醇的制法的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及具有以下敘述的且有特異作用的2-氨基-2-脫氧-D-甘露糖醇的制造方法。
更為詳盡地?cái)⑹?，本發(fā)明涉及2-氨基-2-脫氧-D-甘露糖醇的制造方法，其特征為，將屬于鏈霉菌屬的具有產(chǎn)生2-氨基-2-脫氧-D-甘露糖醇能力的微生物于培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，并從由此獲得的培養(yǎng)液中取得2-氨基-2-脫氧-D-甘露糖醇。
本發(fā)明相關(guān)的2-氨基-2-脫氧-D-甘露糖醇，除其自身可作為配合化妝料(特開昭59-212421號公報(bào))、X射線造影劑制造原料(特開昭52-128346號公報(bào))有用之外，它還因具有一種特殊的作用而有用，即當(dāng)用鏈霉菌屬微生物制造因有抑制食后血糖上升作用而被期望作為糖尿病治療藥的莫拉諾靈(モラノリン)(特公昭56-009919號公報(bào))時(shí)，可以提高莫拉諾靈的產(chǎn)量。
在本發(fā)明之前，2-氨基-2-脫氧-D-甘露糖醇是將N-乙酰氨基-2-脫氧-D-甘露糖用氫化硼鈉等還原，形成N-乙酰氨基-2-脫氧-D-甘露糖醇后，用堿或酸加水分離，而制得的已知的化合物。
可是，上述制造法中，存在作為原料的N-乙酰氨基-2-脫氧-D-甘露糖價(jià)值昂貴，且資源性憒乏，此外，還需合成分離等煩雜的步驟等缺點(diǎn)。
本發(fā)明的發(fā)明者們，對用發(fā)酵法制造2-氨基-2-脫氧-D-甘露糖醇的方法進(jìn)行了廣泛而又持久地研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)屬于鏈霉菌的微生物可以游離體的形式并且大量地產(chǎn)生2-氨基-2-脫氧-D-甘露糖醇這一事實(shí)，從而完成了本發(fā)明。
作為本發(fā)明相關(guān)微生物的代表，可以例舉本發(fā)明的發(fā)明者們從札幌市內(nèi)土壤中分離的鏈霉菌LavendulaeSEN-158(以下稱為[SEN-158株]。
SEN-158株，以微工研菌寄第4301號(FERMP-4301)保藏于工業(yè)技術(shù)院微生物工業(yè)技術(shù)研究所，有關(guān)其菌學(xué)性質(zhì)已為特開昭54-084094號公報(bào)所記載。此外，還以ATCC31434保藏號保藏于美國典型培養(yǎng)物保藏中心。
在本發(fā)明中，即使是SEN-158株以外的屬于鏈霉菌屬的菌株只要能產(chǎn)生2-氨基-2-脫氧-D-甘露糖醇的菌株均可應(yīng)用。此外，這些菌株經(jīng)利用紫外線或Co60等的照射處理、亞硝基胍、偶氮絲氨酸、亞硝酸、亞硝基胍或用2-腺嘌呤等變異誘發(fā)劑進(jìn)行的變異處理、形質(zhì)轉(zhuǎn)入、形質(zhì)轉(zhuǎn)換，或細(xì)胞融合等通常采用的變異手段而得到的人工突變株，以及自然發(fā)生的變異株也符合本發(fā)明的目的。
本發(fā)明可以通過2-氨基-2-脫氧-D-甘露糖醇的產(chǎn)生菌通常采用的放線菌培養(yǎng)的方法進(jìn)行培養(yǎng)，加以實(shí)施。
培養(yǎng)基既可為液體也可為固體，通?？刹捎靡后w培養(yǎng)基的振蕩培養(yǎng)或通氣攪拌培養(yǎng)。
培養(yǎng)基只要是適合放線菌生長，又能產(chǎn)生2-氨基-2-脫氧-D-甘露糖醇的，無論何種培養(yǎng)基均可。
作為碳源，可以葡萄糖、半乳糖、甘露糖醇、蔗糖、麥芽糖、甘油、糊精、淀粉等在單獨(dú)或混合狀態(tài)使用。
作為氮源，可以采用大豆粉、蛋白胨、酵母抽提物、肉類抽提物、(コ-ソ·スティ-ブ·リカ-)、氯化銨、硫酸銨、硝酸銨、尿素等。
此外，如果適量地加入氯化鈉、氯化鉀、碳酸鈣、各種磷酸鹽，則可得到良好的結(jié)果。另外，也可再加入適量的鐵、鎂等。
在必要時(shí)，可以加入促進(jìn)使用菌的生長或2-氨基-2-脫氧-D-甘露糖醇的有機(jī)物或無機(jī)物、維生素類等。
另外，如果發(fā)酵中發(fā)泡顯著，可以適當(dāng)?shù)丶尤胂輨?br> 培養(yǎng)基的pH、培養(yǎng)溫度等培養(yǎng)條件，在產(chǎn)生2-氨基-2-脫氧-D-甘露糖醇的范圍內(nèi)勺魘實(shí)鋇乇涓?，但例燃偓液体振荡幌uㄆ漣枧嘌某『希趐H6～9、培養(yǎng)溫度為20-35℃左右進(jìn)行為宜，25-30℃下進(jìn)行為佳。
培養(yǎng)時(shí)間隨培養(yǎng)規(guī)模及其它條件而變化，但通常2-20天已足夠。
培養(yǎng)后，使菌體分離、從得到的培養(yǎng)液中精制、提純目的物。
要從培養(yǎng)液中提純并精制本發(fā)明物質(zhì)，一般可用，從其培養(yǎng)液中，提純精制微生物代謝產(chǎn)物時(shí)所采用的方法。
例如，可將采用各種吸附劑(例如硅膠、氧化鋁、活性炭、離子交換樹脂等)進(jìn)行的脫吸附層析法、分配層析法、分別結(jié)晶法、再結(jié)晶法等，單獨(dú)或適當(dāng)?shù)亟M合起來使用。
實(shí)施例以下例舉本發(fā)明的實(shí)施例及試驗(yàn)例，以更為詳盡地對本發(fā)明進(jìn)行說明。
實(shí)施例在500ml容量的三角燒瓶中盛入100ml培養(yǎng)基(可溶性淀粉8%、大豆粉1%、酵母提抽物1%、氯化鉀0.05%、硫酸鎂0.05%、氯化鈉0.5%、硝酸鈉0.2%、pH7.2)，進(jìn)行滅菌。
將SEN-158株(數(shù)白金耳)由斯浪托(スラソト)向其中接種，27℃下振蕩培養(yǎng)3天，得到前培養(yǎng)液。將此前培養(yǎng)液300ml接種到盛有151培養(yǎng)基(成份與前培養(yǎng)液相同)的301容量的發(fā)酵罐中，并于27℃培養(yǎng)11天。
消泡劑采用日產(chǎn)(
)CB-442，在通氣量為20升/分鐘，攪拌速度為300rpm下進(jìn)行。
將得到的培養(yǎng)液12.9升在9000rpm下離心分離20分鐘，使所得上清液在強(qiáng)酸性離子交換樹脂(ダウエックス)50W×2(H+)(11)柱通過，充分水洗后，用1N氨水洗脫。
將洗脫液減壓濃縮，使之通過強(qiáng)堿性離子交換樹脂(ダィァィオン)SA-11A(OH-)(500ml)，并用水洗。合并流過液與洗液，減壓下使之濃縮，5℃下放置數(shù)日。收集生成的結(jié)晶，用20%含水乙醇再結(jié)晶，得到1g2-氨基-2-脫氧-D-甘露糖醇結(jié)晶。本品的物理性質(zhì)數(shù)據(jù)值羅列如下。
融點(diǎn)161～163℃。
元素分析值(C6H15NO5)計(jì)算值(%)C39.77H8.34N7.73實(shí)測值(%)C39.62H8.17N7.81比旋光度[α]24D＝+4.0°(C＝1%，水)13C-NMRppm;(D2O，內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn);甲醇49.8ppm)53.84，64.05，64.31，70.73，71.29，71.851H-NMRppm;(D2O，內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn);DSS)2.98～3.12(1H，m)，3.56～3.90(7H，m)，此外，由于本品與將N-乙酰氨基-2-脫氧-D-甘露糖用硼氫化鈉還原后，用鹽酸加水分解而合成的合成品物理性質(zhì)數(shù)值完全一致，從而本品的結(jié)構(gòu)已被確認(rèn)。
試驗(yàn)例本發(fā)明相關(guān)的2-氨基-2-脫氧-D-甘露糖醇對糖尿病治療藥莫拉諾靈(モラノリン)產(chǎn)生的效果。
將屬于鏈霉菌屬的最新被分離的莫拉諾靈產(chǎn)生菌MB-733株的變異株GC-148株用斯浪托向以下所示的培養(yǎng)基接種，在27℃下振蕩培養(yǎng)7天后，離心分離培養(yǎng)液10ml，將其上清液通過強(qiáng)酸性離子交換樹脂(ダウエックス)50W×2(H+)(11)柱，充分水洗后，用0.5N氨水洗脫，減壓下濃縮干固后，溶解于1ml水中，用高速液相色譜對莫拉諾靈進(jìn)行定量。
高速液相色譜的條件為柱;Nucleosil 5NH2、展開溶劑;乙腈-水＝7∶3、檢出;示差折射計(jì)。
培養(yǎng)基A可溶性淀粉2%、大豆粉1%、酵母抽提液1%、氯化鉀0.05%、硫酸鎂水和物0.05%、氯化鈉0.5%、硝酸鈉0.2%、碳酸鈣0.35%、pH7.0。
培養(yǎng)基B在培養(yǎng)基A中添加1%的2-氨基-2-脫氧-D-甘露糖醇。
結(jié)果示于下表
由此可見，與本發(fā)明相關(guān)的2-氨基-2-脫氧-D-甘露糖醇對莫拉諾靈產(chǎn)生的效果很明顯。
權(quán)利要求
1.一種2-氨基-2-脫氧-D-甘露糖醇的制法，其特征為，所述的制法包括在培養(yǎng)基中培養(yǎng)屬于鏈霉菌屬(Streptomyces)的，具有產(chǎn)生2-氨基-2-脫氧-D-甘露糖醇的能力的微生物；并從得到的培養(yǎng)液中取得2-氨基-2-脫氧-D-甘露糖醇。
全文摘要
本發(fā)明涉及2-氨基-2-脫氧-D-甘露糖醇的制法，其特征為，將屬于鏈霉菌屬的具有產(chǎn)生2-氨基-2-脫氧-D-甘露糖醇能力的微生物于培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，并從由此獲得的培養(yǎng)液中取得2-氨基-2-脫氧-D-甘露糖醇。
文檔編號C12P13/00GK1033394SQ8810823
公開日1989年6月14日 申請日期1988年11月28日 優(yōu)先權(quán)日1987年11月28日
發(fā)明者杉山信, 江連洋治, 小島信敏, 瀨戶隆志, 中村輝也, 井東學(xué) 申請人:日本新藥株式會社