氯胺b溶液在雞球蟲卵囊培養(yǎng)及保存中的應用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了氯胺B水溶液在雞球蟲卵囊培養(yǎng)及保存中的應用。本發(fā)明研究發(fā)現(xiàn)，利用氯胺B水溶液作為雞球蟲卵囊的培養(yǎng)液可以有效提高雞球蟲卵囊的孢子化率。且雞柔嫩、堆型、巨型和毒害艾美耳球蟲卵囊保存至6個月內(nèi)，活力不受任何影響，8個月內(nèi)卵囊產(chǎn)量降低25%以內(nèi)，致病力均不受明顯影響。因此，氯胺B水溶液可以取代重鉻酸鉀作為雞球蟲卵囊的培養(yǎng)和保存液。
【專利說明】氯胺B溶液在雞球蟲卵囊培養(yǎng)及保存中的應用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及氯胺B溶液在雞球蟲卵囊培養(yǎng)及保存中的應用。
【背景技術(shù)】
[0002]對球蟲疫苗卵囊的培養(yǎng)及保存將直接關(guān)系疫苗的成本及免疫的成敗。目前在實驗室中可以使用的卵囊培養(yǎng)液有0.1 %甲醛、I %硫酸及2.5%重鉻酸鉀等，通常使用2.5%的重鉻酸鉀溶液，但是重鉻酸鉀是一種重金屬化合物，長期使用會殘留于動物機體和環(huán)境中，影響人類和動物健康。因而亟待研發(fā)一種對人體和動物無害的球蟲疫苗卵囊培養(yǎng)液和保存液。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本申請發(fā)明人在研究中發(fā)現(xiàn):雞球蟲卵囊可以在氯胺B溶液中進行培養(yǎng)并長期保存，氯胺B學名為苯磺酰胺氯鈉鹽,英文名稱為chloramine B,為白色或微黃的晶體或粉末，易溶于水、穩(wěn)定性好，是一種具有廣譜殺菌能力的消毒劑，廣泛用于醫(yī)療衛(wèi)生、飲水、餐具、器皿、游泳池等的消毒。本發(fā)明 將其作為雞球蟲卵囊培養(yǎng)液和保存液。
[0004]因而，本發(fā)明的目的在于提供氯胺B溶液在雞球蟲疫苗培養(yǎng)及保存中的應用。
[0005]所述氯胺B溶液可以為水溶液，濃度為0.6~10%，優(yōu)選為1.2 %，按質(zhì)量百分比計。
[0006]本發(fā)明的有益效果是:
[0007]利用氯胺B溶液作為雞球蟲卵囊的培養(yǎng)液可以有效提高雞球蟲卵囊的孢子化率。且雞柔嫩、堆型、巨型和毒害艾美耳球蟲卵囊在氯胺B水溶液中保存至6個月活力仍不受影響，保存至8個月卵囊產(chǎn)出減少量不超過25%，仍表現(xiàn)出良好活性。因此，氯胺B溶液可以取代重鉻酸鉀作為雞球蟲卵囊的培養(yǎng)和保存液。
【具體實施方式】
[0008]下面結(jié)合實施例對本發(fā)明作進一步的說明，但并不局限于此。如無特殊說明，以下 均指質(zhì)量百分比。
[0009]實施例
[0010]下面我們用實驗驗證氯胺B水溶液可以用作雞球蟲卵囊的培養(yǎng)液和保存液。
[0011]1.試驗材料
[0012]1.1試驗動物:嶺南黃雛雞，由廣東省農(nóng)業(yè)科學院動物科學研究所提供，飼養(yǎng)于已消毒的專用動物房內(nèi)；雞籠和所用器皿均嚴格消毒，自由采食和飲用純凈水；實驗前觀察雛雞有無臨床癥狀及連續(xù)2d檢查糞便有無球蟲卵囊，備用。
[0013]1.2 102型肉雞料由廣東省新南都飼料有限公司定制育雛料，不含任何抗球蟲藥物。
[0014]1.3柔嫩艾美耳球蟲GD株早熟系、堆型艾美耳球蟲GD株、巨型艾美耳球蟲GZ株、毒害艾美耳球蟲GD株早熟系廣東省農(nóng)業(yè)科學院動物衛(wèi)生研究所寄生生物研究室保存。
[0015]1.4氯胺B、重鉻酸鉀:購自百靈威科技有限公司。
[0016]2.試驗方法
[0017]2.1雞球蟲新鮮卵囊的制備
[0018]14日齡雛雞經(jīng)口接種柔嫩艾美耳球蟲GD株早熟系、堆型艾美耳球蟲GD株、巨型艾美耳球蟲GZ株、毒害艾美耳球蟲GD株早熟系等混合卵囊5 X 1O4個(其中堆型艾美耳球蟲⑶株2X104，其他三種1X104)，收集攻蟲后7日所排糞便，按《雞球蟲病學》(索勛，李國清編，1998年)方法分離和純化新鮮的雞球蟲卵囊。
[0019]2.2雞球蟲卵囊在氯胺B水溶液中的孢子化
[0020]配制2.5%的重鉻酸鉀水溶液及5種濃度的氯胺B水溶液:0.6%、1.2%、2.4%、
4.8%,10% ;將新鮮收集的新鮮雞球蟲混合卵囊平均分成7組，每組2.0X 1O5個卵囊，分別用氯胺B水溶液、高純水和重鉻酸鉀重懸，置于28°C水浴搖床震蕩培養(yǎng)。分別于培養(yǎng)后15h，20h, 25h, 30h, 40,60h,血球計數(shù)板法記錄孢子化卵囊的數(shù)量,計算孢子化率。
[0021]2.3無菌檢驗
[0022]孢子化結(jié)束后，每組取重懸液100 μ L，涂LB平板，置37°C溫箱內(nèi)培養(yǎng)72h，觀察細菌生長情況。
[0023]2.4雞柔嫩、堆型、巨型和毒害艾美耳球蟲卵囊在氯胺B水溶液中保存時間的研究
[0024]2.4.1柔嫩艾美耳球蟲GD株早熟系卵囊保存期試驗
[0025]將E.tenella⑶株早熟系卵囊保存于氯胺B水溶液中，分別置于4°C冰箱O至12個月，如下表所示劑量經(jīng)口感染7日齡雞，觀察感染后I周內(nèi)試驗雞的死亡、臨床血便、盲腸卵囊計數(shù)、盲腸病變記分及相對增重情況，評價不同保存期的卵囊對7日齡雞致病力的影響。
[0026]表1E.tenella⑶株早熟系卵囊保存期試驗設(shè)計
[0027]
【權(quán)利要求】
1.氯胺B溶液在雞球蟲卵囊培養(yǎng)及保存中的應用。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應用，其特征在于所述氯胺B溶液為氯胺B水溶液。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的應用，其特征在于，所述氯胺B溶液的濃度為0.6~10%，按質(zhì)量百分比計。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的應用，其特征在于，所述氯胺B溶液的濃度為1.2%，按質(zhì)量百分比計。
5.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的應用，其特征在于，所述應用是指氯胺B溶液作為雞球蟲卵囊的培養(yǎng)液或保存液。
6.一種雞球蟲卵囊培養(yǎng)液，其含有0.6~10%的氯胺B，按質(zhì)量百分比計。
7.—種雞球蟲卵囊保 存液，其含有0.6~10%的氯胺B，按質(zhì)量百分比計。
【文檔編號】C12R1/90GK103710265SQ201310717171
【公開日】2014年4月9日 申請日期:2013年12月23日 優(yōu)先權(quán)日:2013年12月23日
【發(fā)明者】戚南山, 孫銘飛, 廖申權(quán), 吳彩艷, 呂敏娜, 李娟 , 謝明權(quán), 溫列娜 申請人:廣東省農(nóng)業(yè)科學院動物衛(wèi)生研究所