專利名稱：清除人體羥自由基的活性肽水解液的制法及活性肽口服液的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種活性肽水解液的制備方法；特別是一種清除人體羥自由基的活性肽水解液的制備方法；本發(fā)明還涉及用前述活性肽水解液制成的活性肽口服液。
背景技術(shù)：
近年來，隨著養(yǎng)殖規(guī)模的日益擴(kuò)大和養(yǎng)殖技術(shù)的不斷完善，養(yǎng)殖魚類的產(chǎn)量提高很快。中國(guó)的水產(chǎn)品產(chǎn)量一直保持著高速增長(zhǎng)勢(shì)頭，水產(chǎn)品產(chǎn)量2005年已經(jīng)達(dá)到約4900 萬t，占世界水產(chǎn)品產(chǎn)量35%，位居世界第一位。隨著我國(guó)水產(chǎn)業(yè)的發(fā)展，水產(chǎn)加工也越來越受到人們的重視，加工的同時(shí)產(chǎn)生出大量下腳料，占魚體總重的30% 50%，其中約5%是魚鱗。然而，這些魚鱗沒有被充分利用，大部分作為廢棄物丟棄了。據(jù)統(tǒng)計(jì)，我國(guó)每年廢棄的魚鱗達(dá)到30萬t以上。魚鱗含有豐富的蛋白質(zhì)和多種礦物質(zhì)，主要由膠原蛋白和羥基磷灰石組成。其中有機(jī)物占41% 55%，魚鱗的有機(jī)組成中除生膠質(zhì)外，大部分為魚類特有的魚鱗硬蛋白及少量角質(zhì)蛋白、脂肪、色素和粘液質(zhì)等。魚鱗灰分含量較高，約占30%，主要成分是羥基磷灰石，絕大部分集中在骨質(zhì)層，脂質(zhì)含量少，相對(duì)于目前生產(chǎn)膠原蛋白的主要原料皮和骨而言，這更有利于膠原的提取和純化。經(jīng)常食用含膠原蛋白豐富的食品，能有效地增加皮膚組織細(xì)胞的儲(chǔ)水能力，增強(qiáng)和維持肌膚良好的彈性，強(qiáng)化肌膚的韌性，延緩肌體的衰老。同時(shí)，膠原蛋白可以作為補(bǔ)鈣成分用于保健食品，因?yàn)檠獫{中來自膠原蛋白的羥基脯氨酸是將血漿中的鈣運(yùn)輸?shù)焦羌?xì)胞的運(yùn)載工具，骨細(xì)胞中的骨膠原則是羥基磷灰石的黏合劑，它與羥基磷灰石共同構(gòu)成了骨骼的主體。此外，膠原蛋白還能降低血甘油三酯和膽固醇，用于制作減肥降血脂食品。蛋白肽由二個(gè)或二個(gè)以上氨基酸組成。人體的吸收是以肽的方式進(jìn)行，食用蛋白肽的吸收利用率可達(dá)100%。肽的分子量、氨基酸排列順序不同所表現(xiàn)的功能就不同。膠原蛋白肽是膠原或明膠經(jīng)蛋白酶降解處理后制成的，具有較高的消化吸收性， 分子量大約在3000道爾頓，膠原蛋白肽可促進(jìn)骨的形成，增強(qiáng)低鈣水平下的骨膠原結(jié)構(gòu)， 從而提高了骨強(qiáng)度，即達(dá)到了預(yù)防骨質(zhì)疏松癥的作用；另外膠原蛋白肽還具有其它許多特殊的生理功能如保護(hù)胃粘膜和抗?jié)冏饔?，抗過敏作用等，特別需要提出的是，膠原蛋白在美容方面的功效，因?yàn)?，皮膚中膠原蛋白占72%，真皮中80%是膠原蛋白，膠原蛋白在皮膚中構(gòu)成了一張細(xì)密的彈力網(wǎng)，鎖住水分，支撐著皮膚。膠原蛋白的流失，導(dǎo)致支撐皮膚的彈力網(wǎng)斷裂，皮膚組織萎縮、塌陷，肌膚就會(huì)顯現(xiàn)干燥、粗糙、松弛、皺紋、毛孔粗大、暗淡、色斑等衰老現(xiàn)象”。因此，及時(shí)補(bǔ)充膠原蛋白，對(duì)于改善肌膚問題，延緩衰老，有非常好的功效。生物活性肽生產(chǎn)制備方法和途徑有三條一是從自然界生物體中提取其本身固有各種天然活性肽類。二是通過蛋白質(zhì)降解途徑可獲得具有各種生理功能活性肽。三是合成方法制備生物活性肽，包括化學(xué)合成法、酶合成法和重組技術(shù)合成法。從天然生物體提取生物活性肽，生物體含量很低，加工成本卻很高，且大量提取會(huì)造成物種資源萎縮。另外，提取生物活性肽殘存有機(jī)溶劑又會(huì)帶來毒性問題?；瘜W(xué)合成法常用于合成高營(yíng)養(yǎng)價(jià)值、中等長(zhǎng)度的醫(yī)藥用肽，但采用這種方法制取活性肽反應(yīng)底物和反應(yīng)劑價(jià)格高，反應(yīng)過程中能產(chǎn)生有害物質(zhì)。酶合成法相對(duì)有很多優(yōu)點(diǎn)，如反應(yīng)溫和，酶催化位置有方向性等， 但反應(yīng)副產(chǎn)物多，最適酶缺乏及產(chǎn)率過低等因素都制約著其發(fā)展。目前最基本方法是使用蛋白酶進(jìn)行簡(jiǎn)單水解，此種方法不僅可制取具有功能性食品蛋白且不會(huì)損壞其營(yíng)養(yǎng)價(jià)值。除可釋放出各種為人類所需要生物活性肽之外，將食物降解為不同鏈長(zhǎng)的肽還可使其更易消化。但這種酶解法不利方面是產(chǎn)品其它功能如粘性、 乳化力和吸水性會(huì)受到影響，需要通過調(diào)整水解參數(shù)改善產(chǎn)品特殊性能和去除不良味覺成分。在實(shí)際生產(chǎn)中，對(duì)一些特殊肽類生產(chǎn)需要對(duì)反應(yīng)底物、酶、反應(yīng)條件作特殊要求。目前，它成為全世界研究的熱點(diǎn)、大量的國(guó)內(nèi)外研究結(jié)果表明生物活性肽是涉及生物體內(nèi)多種細(xì)胞功能的生物活性物質(zhì)，在生物體內(nèi)已發(fā)現(xiàn)幾百種，不同的生物肽具有不同的結(jié)構(gòu)和生理功能，如抗病毒、抗癌、抗血栓、抗高血壓、免疫調(diào)節(jié)、激素調(diào)節(jié)、抑菌、降膽固醇等作用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種新的、水解過程簡(jiǎn)單、可以酶解魚鱗膠原蛋白來生產(chǎn)活性肽水解液的方法，所制備的活性肽水解液具有較高的清除羥自由基的的能力。本發(fā)明所要解決的另一個(gè)技術(shù)問題是提供了一種以上述方法制得的活性肽水解液制成的活性肽口服液。本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是通過以下的技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)的。本發(fā)明是一種清除人體羥自由基的活性肽的制備方法，其特點(diǎn)是，其步驟如下
(1)清洗烘干取海洋魚鱗，清洗到無雜物和血污，將清洗后的魚鱗在55_65°C烘干至含水量為10%以下；
(2)酸堿脫鹽處理分別用2N的鹽酸和質(zhì)量百分比濃度為10%的NaOH溶液進(jìn)行脫鹽處理后，水洗至PH為5. 5-6. 5，得水與魚鱗的混合物，且魚鱗占混合物的重量百分比為5-7% (底物濃度)；
(3)酶水解向水與魚鱗的混合物中加入木瓜蛋白酶與胃蛋白酶的混合酶，混合酶中木瓜蛋白酶占其總重量的60-70%，所加入的混合酶占水與魚鱗的混合物重量的4. 5-5. 5% (加酶量)；然后在45-50pH5. 5-6. 5水解1. 8-2. 2小時(shí)，得酶解液；
(4)滅酶和離心在90-100°C下對(duì)酶解液進(jìn)行滅活處理，然后進(jìn)行離心，去除沉淀物， 離心液即為活性肽水解液。以上所述的清除人體羥自由基的活性肽的制備方法的步驟( 酸堿脫鹽處理中， 優(yōu)選的技術(shù)方案是水洗至PH為6. 0，得水與魚鱗的混合物，且魚鱗占混合物的重量百分比為6%。以上所述的清除人體羥自由基的活性肽的制備方法的步驟(3)酶水解中，優(yōu)選的技術(shù)方案是混合酶中木瓜蛋白酶占其總重量的65%，所加入的混合酶占水與魚鱗的混合物重量的5. 0% ；然后在48°C、pH6. 0水解2. 0小時(shí)，得酶解液。以上所述的清除人體羥自由基的活性肽的制備方法的步驟(4)滅酶和離心中，優(yōu)選的技術(shù)方案是在95°C下對(duì)酶解液進(jìn)行滅活處理。
以上任何一項(xiàng)技術(shù)方案所述的清除人體羥自由基的活性肽的制備方法中，進(jìn)一步優(yōu)選的技術(shù)方案是向活性肽水解液中加入重量濃度為2、的活性炭進(jìn)行脫腥處理50min， 處理溫度為60°C，得脫腥活性肽水解液，濃縮至脫腥活性肽水解液中的活性肽重量含量為 3_5%，得濃縮活性肽水解液。本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題還可以通過以下的技術(shù)方案來進(jìn)一步實(shí)現(xiàn)。本發(fā)明還提供了一種清除人體羥自由基的活性肽保健口服液，其特點(diǎn)是，它是由以下重量配比的原料制成
如以上任何一項(xiàng)技術(shù)方案中所述的濃縮活性肽水解液 85-90 ； 蜂蜜 4-6 白砂糖 7-9 ； 檸檬酸 0.08-0. 12。其中，各原料的優(yōu)選重量配比為 濃縮活性肽水解液 86. 9 ；
蜂蜜5 白砂糖8;檸檬酸0.10 。本發(fā)明所述的活性肽保健口服液可以按現(xiàn)有技術(shù)中口服液的常規(guī)制備方法制成， 制備時(shí)可以將各原料進(jìn)行混合，裝瓶后再進(jìn)行殺菌處理即可。以下對(duì)本發(fā)明技術(shù)方案及相關(guān)技術(shù)參數(shù)進(jìn)行進(jìn)一步的闡述。以下各條件研究實(shí)驗(yàn)中所涉及的清除羥自由基試驗(yàn)的方法如下樣品對(duì)羥自由基的清除活性采用甲基紫褪色法，用分析天平分別稱取甲基紫0. 088g，七水硫酸亞鐵 0. 026g,均定容至IOOmL,用移液管吸取30%雙氧水1 mL，定容到100 mL,用HCl調(diào)水的pH 至3. 5。按一定的方法加上述離心液，使總體積為10mL。然后在580 nm波長(zhǎng)下比色，測(cè)得吸光度值，按下式計(jì)算清除率
清除率=(A-A0) / (A1-A0) X 100%。清除羥自由基實(shí)驗(yàn)加樣表見表1。表1清除羥自由基實(shí)驗(yàn)加樣表
權(quán)利要求
1.一種清除人體羥自由基的活性肽的制備方法，其特征在于，其步驟如下(1)清洗烘干取海洋魚鱗，清洗到無雜物和血污，將清洗后的魚鱗在55-65°C烘干至含水量為10%以下；(2)酸堿脫鹽處理分別用2N的鹽酸和質(zhì)量百分比濃度為10%的NaOH溶液進(jìn)行脫鹽處理后，水洗至PH為5. 5-6. 5，得水與魚鱗的混合物，且魚鱗占混合物的重量百分比為5-7% ；(3)酶水解向水與魚鱗的混合物中加入木瓜蛋白酶與胃蛋白酶的混合酶，混合酶中木瓜蛋白酶占其總重量的60-70%，所加入的混合酶占水與魚鱗的混合物重量的4. 5-5. 5% ； 然后在45-500C、ρΗ5· 5-6. 5水解1. 8-2. 2小時(shí)，得酶解液；(4)滅酶和離心在90-100°C下對(duì)酶解液進(jìn)行滅活處理，然后進(jìn)行離心，去除沉淀物， 離心液即為活性肽水解液。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的清除人體羥自由基的活性肽的制備方法，其特征在于，步驟(2)的酸堿脫鹽處理中水洗至pH為6.0，得水與魚鱗的混合物，且魚鱗占混合物的重量百分比為6%。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的清除人體羥自由基的活性肽的制備方法，其特征在于，步驟(3)的酶水解中混合酶中木瓜蛋白酶占其總重量的65%，所加入的混合酶占水與魚鱗的混合物重量的5. 0% ；然后在48°C、pH6. 0水解2. 0小時(shí)，得酶解液。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的清除人體羥自由基的活性肽的制備方法，其特征在于，步驟(4)滅酶和離心中在95°C下對(duì)酶解液進(jìn)行滅活處理。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-4任何一項(xiàng)所述的清除人體羥自由基的活性肽的制備方法，其特征在于向活性肽水解液中加入重量濃度為m的活性炭進(jìn)行脫腥處理50min，處理溫度為 600C，得脫腥活性肽水解液，濃縮至脫腥活性肽水解液中的活性肽重量含量為3-5%，得濃縮活性肽水解液。
6.一種清除人體羥自由基的活性肽保健口服液，其特征在于，它是由以下重量配比的原料制成如權(quán)利要求5所述的濃縮活性肽水解液 85-90 ； 蜂蜜 4-6 白砂糖 7-9 ； 檸檬酸 0.08-0. 12。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的一種清除人體羥自由基的活性肽口服液，其特征在于，各原料的重量配比為如權(quán)利要求5所述的濃縮活性肽水解液 86. 9 ； 蜂蜜5 白砂糖8;檸檬酸0.10 。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種清除人體羥自由基的活性肽的制備方法，其特征在于，它以海洋魚鱗為原料，經(jīng)烘干、酸堿脫鹽處理后，加入木瓜蛋白酶與胃蛋白酶，然后在45-50℃、pH5.5-6.5水解1.8-2.2小時(shí)，得酶解液；再對(duì)酶解液進(jìn)行滅活處理，然后進(jìn)行離心，去除沉淀物，得活性肽水解液。本發(fā)明還公開了一種清除人體羥自由基的活性肽保健口服液，它以濃縮活性肽水解液、蜂蜜、白砂糖和檸檬酸為原料。本發(fā)明水解過程簡(jiǎn)單，提取過程有效地利用了海產(chǎn)品加工下腳料魚鱗，制備過程節(jié)能環(huán)保。且其除腥和口服液的配方具有簡(jiǎn)單實(shí)用、成本低廉的優(yōu)點(diǎn)，容易在工業(yè)生產(chǎn)上推廣應(yīng)用。
文檔編號(hào)A23L1/325GK102283377SQ20111015720
公開日2011年12月21日 申請(qǐng)日期2011年6月13日 優(yōu)先權(quán)日2011年6月13日
發(fā)明者杜云建, 趙玉巧 申請(qǐng)人:淮海工學(xué)院