專利名稱：一株在高鹽環(huán)境中除去黃曲霉毒素B₁的假絲酵母菌的使用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一株在高鹽環(huán)境中除去AFB1的假絲酵母菌，已經(jīng)于2010年4月29 日在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(CGMCC)保藏，保藏編號為CGMCC No. 3790，屬于微生物領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
黃曲霉毒素(AFT)是一類化學(xué)機構(gòu)類似的化合物，均為二氫呋喃香豆素的衍生物。 黃曲霉毒素是由黃曲霉(Aspergillus /Yara1S)和寄生曲霉(Aspergillus parasiticus)^ 產(chǎn)生的次級代謝產(chǎn)物，主要存在于土壤，動植物，各種堅果，特別是花生和核桃中。在大豆， 稻谷，玉米，通心粉，調(diào)味品，牛奶，奶制品，食用油等制品中也經(jīng)常發(fā)現(xiàn)黃曲霉毒素。黃曲霉毒素尤其是黃曲霉毒素B1 (以下簡稱AFB1)具有較強的致癌作用，因此，各國對其在食品、飼料中的含量有嚴(yán)格的限制標(biāo)準(zhǔn)。目前去除黃曲霉毒素的措施有很多種，主要包括物理方法、化學(xué)方法、生物學(xué)方法和酶解法。物理方法主要有(1)挑選霉粒，碾磨加工，反復(fù)搓洗；(2)吸附法常用的吸附劑有沸石、活性白陶土、活性炭等，選擇毒素吸附劑時，一方面應(yīng)注意吸附能力必須具備實驗室及動物實驗雙重資料方能證明有效，另一方面考慮吸附劑的高度吸附能力。(3)輻射處理黃曲霉毒素在紫外光下照射不穩(wěn)定，可用紫外光照射下去毒?；瘜W(xué)方法有(1)堿處理法黃曲霉毒素的內(nèi)酯環(huán)可被堿破壞，形成香豆素鈉鹽；(2)有機溶劑萃取法黃曲霉毒素易溶于有機溶劑，可用有機溶劑進行提取分離、去毒；(3)氧化去除法漂白粉、氯氣、雙氧水、臭氧等氧化劑可以迅速將黃曲霉毒素氧化去除；(4)中草藥去毒1976年我國首次發(fā)現(xiàn)山蒼子中的揮發(fā)油可以徹底除去食品中的黃曲霉毒素。揮發(fā)油中的某些成分與黃曲霉毒素發(fā)生反應(yīng)，改變毒素的結(jié)構(gòu)，從而達(dá)到去毒的目的。生物學(xué)方法是通過微生物的作用達(dá)到去除黃曲霉毒素的目的。酶解法是利用酶的專一性達(dá)到去除黃曲霉毒素的目的。本發(fā)明的目的是通過一種微生物學(xué)的方法，分離篩選得到一株具有較高耐鹽性(其在6% 12%的含鹽量下具有較高的生長速度)的假絲酵母菌(保藏編號為CGMCC No. 3790)應(yīng)用于AFB1的去除和生物修復(fù)，該菌株屬于益生菌類，不僅可以去除樣品中污染的AFB1，而且能夠提高產(chǎn)品的芳香成分；同時，本發(fā)明從實際生產(chǎn)中論證了該菌株的去除效^ ο

發(fā)明內(nèi)容
為了減少AFB1對人和動物的危害，減少真菌毒素對傳統(tǒng)釀造調(diào)味品的污染，保證食品安全，本文將該菌株應(yīng)用于實際生產(chǎn)中的AFB1的生物修復(fù)，AFB1的去除率達(dá)到20. 15%。本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一株去除黃曲霉毒素B1效果較好的假絲酵母菌及其在AFB1污染樣品上的應(yīng)用。本發(fā)明要求假絲酵母菌(C versatilis)的菌齡處于為對數(shù)初期，菌體濃度在使用對象中的濃度為1.0X106 3. OX IO6 cfu/g(ml)，以濕基計。
本發(fā)明去除AFB1的具體方法為待處理的醬油醪、豆醬醅或豆瓣醬醅中接種菌齡是對數(shù)初期的假絲酵母菌(C ^rmiiB1S)懸液，初始菌體濃度為1.0X106 3.0X106 cfu/g(ml)，以濕基計，混勻后置于25°C 35°C，發(fā)酵10 30天。本發(fā)明具有如下優(yōu)點
1、本發(fā)明方法能夠在高鹽環(huán)境中有效除去AFB1，去除率達(dá)到20. 15%。本發(fā)明使用假絲酵母菌系源于醬油醪，是東方傳統(tǒng)釀造調(diào)味品常用的微生物菌種，并經(jīng)Ames實驗等方法驗證是安全的。2、本發(fā)明方法是采用適合高鹽發(fā)酵調(diào)味品生產(chǎn)的耐鹽微生物菌株，去除生產(chǎn)過程中AFB1的污染，為其安全生產(chǎn)提供了一種可行、合理的方法。
具體實施例方式下面結(jié)合具體實施范例，進一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。實施例1在高鹽液態(tài)物料體系中除去AFB1
在含12%NaCl的麥芽汁液體培養(yǎng)基中添加AFB1，使其濃度到達(dá)lOng/ml，接入假絲酵母菌(C versatilis) H，初始菌體濃度1.0X106cfu/ml，未接種的樣品作對照，置于 30士2°C的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)72hr，取樣分析，本發(fā)明假絲酵母菌除去了樣品中52. 97%的AFB115實施例2在高鹽半固態(tài)物料體系中除去AFB1
以產(chǎn)黃曲霉毒素的菌株4408 (中國科學(xué)院普通微生物研究所訂購)為出發(fā)菌株， 以蠶豆瓣為原料生產(chǎn)瓣曲，采用豆瓣醬生產(chǎn)工藝加入鹽水使其鹽分為13.5%，水分含量為 55. 0%。將預(yù)先繁殖進入對數(shù)初期的假絲酵母菌(C versatilis)懸液接入瓣醅，初始菌體濃度為1.0X106cfU/g(ml)，置于30士2°C培養(yǎng)箱中保溫培養(yǎng)30d，瓣醅中黃曲霉毒素&的除去率達(dá)55. 65%。實施例3采用本方法除去被污染樣品中的AFB1
以一定量的已污染了 AFB1的豆瓣醬為研究對象。將預(yù)先繁殖至對數(shù)初期的假絲酵母菌(C versatilis)懸液接入污染的豆瓣醬，初始菌體濃度為1. OX 106cfu/g(ml)，模擬工廠生產(chǎn)環(huán)境，25°C 35°C下培養(yǎng)30d，AFB1的除去率達(dá)到20. 15%。
權(quán)利要求
1.一株耐鹽性假絲酵母菌應(yīng)用于傳統(tǒng)釀造調(diào)味品中黃曲霉毒素B1 (AFB1)的去除，其內(nèi)容包括首先將活化的本發(fā)明菌株培養(yǎng)至菌齡為對數(shù)初期，然后分別應(yīng)用于高鹽液態(tài)物料體系與半固體物料體系中AFB1的去除，初始菌體濃度為1.0X IO6 3. OX IO6 cfu/g (ml), 最后將本發(fā)明菌株應(yīng)用于實際生產(chǎn)中，論證該菌株實際應(yīng)用的可行性。
2.根據(jù)權(quán)利1要求本發(fā)明的液體培養(yǎng)基配方為假絲酵母菌液體培養(yǎng)基(麥芽汁液體培養(yǎng)基)麥芽汁液體 6 IOBe0，12%NaCl, ρΗ5· 0 5· 5。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述方法篩選獲得的假絲酵母菌(C^rmiihi),保藏編號為 CGMCC No. 3790。
4.根據(jù)權(quán)利要求1的假絲酵母菌(Cversatilis)的應(yīng)用，本發(fā)明可適用于各類傳統(tǒng)釀造產(chǎn)品中，如豆瓣、腐乳、豆豉等。
5.根據(jù)權(quán)利1要求，本發(fā)明所述的除去AFB1的方法，其特征在于用于除去AFB1的本發(fā)明菌株的菌齡為對數(shù)初期，接種到被AFB1污染的醬油醪、豆醬醅或豆瓣醬醅中的假絲酵母菌(C ^r1SaiiBl5)，其初始菌體濃度分別為1.0X106 3. OX IO6 cfu/g (ml)，以濕基計，發(fā)酵培養(yǎng)溫度為25°C 35°C，培養(yǎng)時間為IOd 30d。
全文摘要
本發(fā)明涉及一株假絲酵母菌(Candidaversitilis)，能夠在高鹽環(huán)境中有效除去黃曲霉毒素B1(AFB1)。首先將活化的本發(fā)明菌株于麥芽汁液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)至菌齡為對數(shù)初期，然后分別應(yīng)用于已添加AFB1毒素純品的高鹽液態(tài)物料體系和已污染AFB1的高鹽半固體物料體系中，達(dá)到去除AFB1的目的；最后將本發(fā)明菌株應(yīng)用到已污染AFB1的某豆瓣醬中，模擬工廠生產(chǎn)環(huán)境，本發(fā)明菌株對AFB1的除去率達(dá)到20.15%。該發(fā)明可應(yīng)用于傳統(tǒng)釀造行業(yè)，尤其是應(yīng)用到具有高鹽環(huán)境的調(diào)味品行業(yè)，具有良好的經(jīng)濟效益和實際應(yīng)用價值。
文檔編號C12R1/72GK102197861SQ20111000400
公開日2011年9月28日 申請日期2011年1月11日 優(yōu)先權(quán)日2011年1月11日
發(fā)明者周榮清, 李從虎, 黃著, 黃鈞 申請人:四川大學(xué)