專利名稱：：青杄轉(zhuǎn)錄因子PwHAP5及其編碼基因與應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及青桿轉(zhuǎn)錄因子PwHAP5及其編碼基因與應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：農(nóng)作物的生產(chǎn)受到鹽堿、干旱等非生物脅迫的影響非常嚴(yán)重。全世界約有20%的耕地和50%的灌溉田受到不同程度的鹽害威脅，并有逐年增加的趨勢(shì)。我國(guó)鹽漬土地面積約為1.4億畝，占耕地總面積的近7%，此外還有鹽漬荒地2億多畝。全世界干旱和半干旱地區(qū)總面積占陸地總面積的34.9%；我國(guó)干旱、半干旱耕地面積占總面積的51%。通過(guò)轉(zhuǎn)基因提高作物的耐鹽抗旱能力是一條行之有效的辦法。因此，尋找與鹽、干旱脅迫有關(guān)的基因并研究其具體功能，以及調(diào)控途徑具有重要的理論和實(shí)踐意義。早期的耐鹽基因工程主要集中在清除自由基和增加滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)兩個(gè)方面，并且主要通過(guò)轉(zhuǎn)化單個(gè)或多個(gè)功能基因來(lái)提高轉(zhuǎn)基因植株的耐鹽能力，雖然轉(zhuǎn)基因植株的耐鹽能力有所提高，但效果不太明顯。最近，定位在細(xì)胞核內(nèi)的許多調(diào)節(jié)鹽脅迫下功能基因表達(dá)的轉(zhuǎn)錄因子從許多植物中分離出來(lái)。研究結(jié)果表明通過(guò)這些轉(zhuǎn)錄因子調(diào)節(jié)后期的許多功能基因的表達(dá)，可以大大提高轉(zhuǎn)基因植株的耐鹽性，從而很大程度上促進(jìn)了耐鹽基因工程方面的研究工作并取得突破性進(jìn)展。HAP作為轉(zhuǎn)錄因子以其DNA結(jié)合域與一些基因啟動(dòng)子區(qū)的CCAAT序列結(jié)合來(lái)調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄活性。目前對(duì)HAP的轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)制的研究主要是在哺乳動(dòng)物中進(jìn)行的，在植物中知之甚少。研究表明HAP類轉(zhuǎn)錄因子可參與植物的多種生長(zhǎng)發(fā)育及生理生化過(guò)程，目前還未見(jiàn)對(duì)于其在種子萌發(fā)過(guò)程中抗鹽耐旱方面的報(bào)道。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于提供一種與植物種子萌發(fā)的蛋白。本發(fā)明提供的蛋白，與植物種子萌發(fā)相關(guān)，名稱為PwHAP5，來(lái)源于青桿(PiceawilsoniiMast·)，是如下1)或2)的蛋白質(zhì)1)由序列表中序列2所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)；2)將序列表中序列2的氨基酸殘基序列經(jīng)過(guò)一個(gè)或幾個(gè)氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且與植物種子萌發(fā)相關(guān)的由1)衍生的蛋白質(zhì)。為了使1)中的PwHAP5便于純化，可在由序列表中序列2所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)的氨基末端或羧基末端連接上如表1所示的標(biāo)簽。表1.標(biāo)簽的序列<table>tableseeoriginaldocumentpage3</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage4</column></row><table>上述2)中的PwHAP5可人工合成，也可先合成其編碼基因，再進(jìn)行生物表達(dá)得到。上述2)中的PwHAP5的編碼基因可通過(guò)將序列表中序列1所示的DNA序列中缺失一個(gè)或幾個(gè)氨基酸殘基的密碼子，和/或進(jìn)行一個(gè)或幾個(gè)堿基對(duì)的錯(cuò)義突變，和/或在其5'端和/或3'端連上表1所示的標(biāo)簽的編碼序列得到。上述與植物種子萌發(fā)相關(guān)的蛋白的編碼基因(命名為PwHAP5)也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。上述PwHAP5基因具體可為如下1)_4)中任一所述的基因1)其編碼序列是序列表中序列1；2)其核苷酸序列是序列表中的序列3；3)在嚴(yán)格條件下與1)或2)的基因雜交且編碼所述蛋白的基因；4)與1)或2)的基因具有90%以上的同源性且編碼所述蛋白的基因。序列1中有606個(gè)核苷酸，可編碼序列表中序列2所述的蛋白。上述嚴(yán)格條件可為用0.IXSSPE(或0.1XSSC)，0.SDS的溶液，在DNA或者RNA雜交實(shí)驗(yàn)中65°C下雜交并洗膜。擴(kuò)增上述PwHAP5基因全長(zhǎng)或其任一片段的引物對(duì)也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。含有上述PwHAP5基因的表達(dá)盒、轉(zhuǎn)基因細(xì)胞系或重組菌也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。含有上述PwHAP5基因的重組載體也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍?？捎矛F(xiàn)有的植物表達(dá)載體構(gòu)建含有PwHAP5基因的重組表達(dá)載體。所述植物表達(dá)載體包括雙元農(nóng)桿菌載體和可用于植物微彈轟擊的載體等，如pCAMBIA3301、pCAMBIA1300、pBI121、pBinl9、pCAMBIA2301、pCAMBIA1301-UbiN或其它衍生植物表達(dá)載體。使用PwHAP5基因構(gòu)建重組表達(dá)載體時(shí)，可在其轉(zhuǎn)錄起始核苷酸前加上任何一種增強(qiáng)型、組成型、組織特異型或誘導(dǎo)型啟動(dòng)子，如花椰菜花葉病毒(CAMV)35S啟動(dòng)子、泛素(Ubiquitin)基因啟動(dòng)子(pUbi)等，它們可單獨(dú)使用或與其它的植物啟動(dòng)子結(jié)合使用；此夕卜，使用本發(fā)明的基因構(gòu)建植物表達(dá)載體時(shí)，還可使用增強(qiáng)子，包括翻譯增強(qiáng)子或轉(zhuǎn)錄增強(qiáng)子，這些增強(qiáng)子區(qū)域可以是ATG起始密碼子或鄰接區(qū)域起始密碼子等，但必需與編碼序列的閱讀框相同，以保證整個(gè)序列的正確翻譯。所述翻譯控制信號(hào)和起始密碼子的來(lái)源是廣泛的，可以是天然的，也可以是合成的。翻譯起始區(qū)域可以來(lái)自轉(zhuǎn)錄起始區(qū)域或結(jié)構(gòu)基因。為了便于對(duì)轉(zhuǎn)基因植物細(xì)胞或植物進(jìn)行鑒定及篩選，可對(duì)所用植物表達(dá)載體進(jìn)行加工，如加入在植物中表達(dá)可產(chǎn)生顏色變化的酶或發(fā)光化合物的基因(GUS基因、GFP基因、螢光素酶基因等)、具有抗性的抗生素標(biāo)記物(慶大霉素標(biāo)記物、卡那霉素標(biāo)記物等)或是抗化學(xué)試劑標(biāo)記基因(如抗除莠劑基因)等。從轉(zhuǎn)基因植物的安全性考慮，可不加任何選擇性標(biāo)記基因，直接以逆境篩選轉(zhuǎn)化植株。所述重組載體具體可為在pBI121的多克隆位點(diǎn)間插入上述PwHAP5基因得到的重組表達(dá)載體。本發(fā)明的另一目的在于提供一種培育轉(zhuǎn)基因植物的方法。本發(fā)明提供的培育轉(zhuǎn)基因植物的方法是將PwHAP5基因轉(zhuǎn)入目的植物中，得到轉(zhuǎn)基因植物，所述轉(zhuǎn)基因植物的種子在逆境下的萌發(fā)率高于所述目的植物。上述的PwHAP5基因可通過(guò)上述的重組表達(dá)載體導(dǎo)入目的植物中的。攜帶有本發(fā)明的PwHAP5基因的植物表達(dá)載體可通過(guò)Ti質(zhì)粒、Ri質(zhì)粒、植物病毒載體、直接DNA轉(zhuǎn)化、顯微注射、電導(dǎo)、農(nóng)桿菌介導(dǎo)等常規(guī)生物學(xué)方法轉(zhuǎn)化到植物細(xì)胞或組織中。進(jìn)一步，上述逆境是高鹽環(huán)境或干旱環(huán)境。上述高鹽環(huán)境具體可以是75mM、100mM、150mM或200mM的Nacl水溶液引起的環(huán)境。上述干旱環(huán)境具體可以是100mM、200mM、300mM或400mM的甘露醇水溶液模擬得到的干旱環(huán)境。上述目的植物為雙子葉植物或單子葉植物，優(yōu)選是擬南芥。實(shí)驗(yàn)證明本發(fā)明獲得的轉(zhuǎn)基因擬南芥的種子在培養(yǎng)基中Nacl濃度為75mM、100mM、150mM和200mM時(shí)的萌發(fā)率顯著高于野生型對(duì)照和空載體對(duì)照的種子萌發(fā)率。并且本發(fā)明獲得的轉(zhuǎn)基因擬南芥的種子在培養(yǎng)基中甘露醇濃度為100mM、200mM、300mM和400mM時(shí)的的萌發(fā)率顯著高于野生型對(duì)照和空載體對(duì)照的種子萌發(fā)率。圖1為PwHAP5基因在青桿各組織中的表達(dá)情況。圖2為轉(zhuǎn)基因擬南芥分子檢測(cè)結(jié)果。圖3野生型擬南芥和轉(zhuǎn)入PwHAP5基因的擬南芥種子在IOOmM的NaCl處理下萌發(fā)7天的觀測(cè)結(jié)果。圖4為野生型擬南芥和轉(zhuǎn)入PwHAP5基因的擬南芥種子在不同濃度NaCl處理下萌發(fā)率測(cè)定結(jié)果。圖5為野生型擬南芥和轉(zhuǎn)入PwHAP5基因的擬南芥種子在不同濃度甘露醇處理下萌發(fā)率測(cè)定結(jié)果。具體實(shí)施例方式下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說(shuō)明，但本發(fā)明并不限于以下實(shí)施例。下述實(shí)施例中，如無(wú)特殊說(shuō)明，均為常規(guī)方法。實(shí)施例1、轉(zhuǎn)錄因子PwHAP5及其編碼基因的發(fā)現(xiàn)1、青桿花粉的處理于青桿(ZhangLY,LinJX,etal.PlantScience,2007，1721210-1217.)(PiceawilsoniiMast.，采自北京中科院植物所)花序開(kāi)放的晴天上午，用消毒過(guò)的鑷子，取下黃色的花粉塊，放在白色潔凈的紙上，然后放入消毒過(guò)的干燥玻璃瓶?jī)?nèi)，置于室內(nèi)陰干，再分裝于干燥的玻璃瓶?jī)?nèi)，密封，置于-20°C冰箱里貯藏備用。將貯存于_20°C冰箱的花粉轉(zhuǎn)移至4V復(fù)蘇12小時(shí)，之后再轉(zhuǎn)移到室溫繼續(xù)復(fù)蘇2小時(shí)。將復(fù)蘇后的花粉置于液體培養(yǎng)基中，在室溫(25士1°C)下萌發(fā)。培養(yǎng)基的成分包括12%蔗糖，0.03%硝酸鈣或0.1%硝酸鈣，0.01%硼酸，5mM檸檬酸-磷酸緩沖液，pH5.8。在青桿花粉培養(yǎng)24小時(shí)時(shí)取樣。2、總RNA的提取采用RNAeasyplantminikit(Qiagen公司產(chǎn)品)提取總RNA。3、使用SMARTcDNALibraryConstructionKit構(gòu)建青桿花粉對(duì)照cDNA文庫(kù)以及Ca2+誘導(dǎo)cDNA文庫(kù)。4.使用反相Northern差異篩選法篩選有表達(dá)差異的cDNA片斷。5.將攜帶有表達(dá)差異的cDNA片斷的pTriplEx2載體轉(zhuǎn)入大腸桿菌BM25.8。6.序列測(cè)定本工作在上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司進(jìn)行。獲得一606bp的cDNA片斷(命名為PwHAP5)，核苷酸序列如序列表中序列1所示，其編碼的氨基酸序列如序列表中序列2所示。7.同源檢索利用BLAST軟件將分離出的序列與基因銀行(Genbank)中的序列進(jìn)行比較，確定它屬于青桿HAP類轉(zhuǎn)錄因子基因。實(shí)施例2、通過(guò)半定量RT-PCR分析PwHAP5基因的組織表達(dá)情況分別提取青桿花粉、針葉、樹(shù)皮和根組織的RNA，反轉(zhuǎn)錄合成cDNA；然后分別以上述各組織的cDNA為模板，以5，-ATCAGCAGCAGCCCACAA-3’和5’-GGTAACCAGATGAGGGAG-3，為引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，檢測(cè)PwHAP5基因在青桿不同組織中的表達(dá)情況。同時(shí)以EFl-α基因作為內(nèi)參，擴(kuò)增EFl-α基因的5，引物為:5，-AACTGGAGAAGGAACCCAAG-3，，3，引物為5’-AACGACCCAATGGAGGATAC-3’。PCR反應(yīng)條件先94°C預(yù)變性5min；然后94°C10sec，56°C10sec，72°C20sec,共28個(gè)循環(huán)；再72°C延伸5min。PwHAP5基因在各組織中的表達(dá)情況如圖1所示。結(jié)果表明，PwHAP5在所有組織中均有表達(dá)，根中表達(dá)量較低，針葉中表達(dá)量最高。實(shí)施例3、轉(zhuǎn)基因擬南芥的獲得及其檢測(cè)一、重組表達(dá)載體的構(gòu)建1、PwHAP5基因的獲得制備下述引物對(duì)引物1:5‘-ATGGATCAGCAGCAGCCCA-3，；引物2:5‘-TCAACTGCTGCCATGAGGAGG-3，。(PiceawilsoniiMast.，)(ZhangLY,LinJX,etal.PlantScience,2007，172:1210-1217·)(記載過(guò)該材料的非專利文獻(xiàn)是ZhangLY，HaoHQ,LinJX.ThelocalizationofRacGTPaseinPiceawillsoniipollentubesimpliesrolesintubegrowthandthemovementofthetubenucleusandspermcells.PlantScience,2007,172:1210-1217，公眾可從北京林業(yè)大學(xué)獲得)的cDNA為模板，用上述引物1和2進(jìn)行PCR擴(kuò)增，測(cè)序表明擴(kuò)增產(chǎn)物的核苷酸序列如序列表中序列1所示，序列1中有606個(gè)核苷酸，可編碼序列表中序列2所述的蛋白。將序列2所示的蛋白命名為PwHAP5，將編碼序列2所示蛋白的基因命名為PwHAP5。2、重組表達(dá)載體的獲得將PwHAP5基因與pMD18_T載體相連接，操作步驟按照Takara公司產(chǎn)品pMD18-TVectorsystem的說(shuō)明書(shū)進(jìn)行；將與pMD18_T載體相連后的連接產(chǎn)物用限制性內(nèi)切酶BamHI和SalI進(jìn)行雙酶切，得到含有上述PwHAP5基因的DNA片段(該DNA片段的核苷酸序列如序列表中序列3所示)，酶切產(chǎn)物與經(jīng)相同酶切的質(zhì)粒PBI121(購(gòu)自Clontech公司)相連接，連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α感受態(tài)細(xì)胞，并涂布在含有5-溴-4-氯_3_吲哚-β-D-半乳糖苷、X-gal和lOOug/ml氨芐青霉素的LB平板上培養(yǎng)過(guò)夜。挑取白色單菌落，在LB液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)過(guò)夜并進(jìn)行菌落PCR鑒定；同時(shí)堿法提取質(zhì)粒DNA進(jìn)行序列測(cè)定。測(cè)序結(jié)果表明，PwHAP5基因已正確連接到質(zhì)粒PBI121上，將得到的重組表達(dá)載體命名為PBI121-PwHAP5。二、轉(zhuǎn)基因擬南芥的獲得用上述步驟一構(gòu)建的重組表達(dá)載體PBI121_PwHAP5轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌GV3101(記載過(guò)該材料的非專利文獻(xiàn)程振東，衛(wèi)志明，許智宏。根癌農(nóng)桿菌對(duì)甘藍(lán)型油菜的轉(zhuǎn)化及轉(zhuǎn)基因植株的再生。植物學(xué)報(bào)，1994，36(9):657-663，公眾可從北京林業(yè)大學(xué)獲得)的感受態(tài)細(xì)胞，挑取轉(zhuǎn)入重組表達(dá)載體PBI121-PwHAP5的農(nóng)桿菌的單克隆接種于含50mg/L卡那霉素的LB液體培養(yǎng)基中，28°C振蕩培養(yǎng)兩天。將發(fā)酵液3000rpm/min離心5分鐘，所得農(nóng)桿菌沉淀用含5%蔗糖和0.03%SilwetL-77的侵染液懸浮。采用沾花浸染法轉(zhuǎn)化哥倫比亞生態(tài)型野生型擬南芥(Col-O)(可以購(gòu)自美國(guó)擬南芥生物資源中心，ABRC)，收獲該當(dāng)代轉(zhuǎn)基因擬南芥植株所接的種子(T1代)，在含有50mg/LKan(卡那霉素)的MS培養(yǎng)基篩選萌發(fā)的種子。將在上述培養(yǎng)基上萌發(fā)的T1代幼苗移到培養(yǎng)土中，收獲種子(1~2代)，然后經(jīng)相同的篩選過(guò)程得到純合的T3代轉(zhuǎn)pBI121-PwHAP5的轉(zhuǎn)基因擬南芥種子。最后將T3代轉(zhuǎn)基因擬南芥種子直接播種到培養(yǎng)土中，長(zhǎng)出的T3代轉(zhuǎn)基因擬南芥植株在長(zhǎng)日照條件下生長(zhǎng)兩周左右開(kāi)花。T3代植物分子檢測(cè)的引物如下引物1:5‘-ATGGATCAGCAGCAGCCCA-3，；引物2:5‘-TCAACTGCTGCCATGAGGAGG-3，。結(jié)果如圖2(1-6表示不同轉(zhuǎn)基因株系；-表示陰性對(duì)照；+表示陽(yáng)性對(duì)照)所示，不同轉(zhuǎn)基因株系的目的基因的表達(dá)量顯著高于陰性對(duì)照(陰性對(duì)照是野生型對(duì)照及下述的空載體對(duì)照)。三、種子萌發(fā)試驗(yàn)本實(shí)驗(yàn)設(shè)置以下兩個(gè)對(duì)照野生型對(duì)照為轉(zhuǎn)入任何質(zhì)粒的野生型擬南芥(Col-O)；空載體對(duì)照按照獲得T3代轉(zhuǎn)入重組表達(dá)載體pBI121-PwHAP5的轉(zhuǎn)基因擬南芥的方法，將空載體PBI121轉(zhuǎn)入野生型擬南芥中，然后進(jìn)行繼代培養(yǎng)得到T3代轉(zhuǎn)pBI121的轉(zhuǎn)基因擬南芥。1、高鹽條件下的種子萌發(fā)實(shí)驗(yàn)取野生型擬南芥、空載體對(duì)照和上述T3代轉(zhuǎn)入重組表達(dá)載體PBI121_PwHAP5的轉(zhuǎn)基因擬南芥的種子，在MS培養(yǎng)基上進(jìn)行種子萌發(fā)實(shí)驗(yàn)，其中培養(yǎng)基中含不同Nacl濃度(分別是75mM、100mM、150mM和200mM)，實(shí)驗(yàn)條件是光周期為16小時(shí)光照，8小時(shí)黑暗；光強(qiáng)為300-400umol/M2/S；光照條件下的溫度為22_24°C，相對(duì)濕度為70-90%；黑暗條件下的溫度為18-20°C，相對(duì)濕度大于90%。在第7天統(tǒng)計(jì)種子萌發(fā)率，實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，測(cè)定結(jié)果如圖3和圖4所示(WT表示野生型擬南芥，T表示轉(zhuǎn)入重組表達(dá)載體PBI121-PwHAP5的轉(zhuǎn)基因擬南芥；空載體對(duì)照和野生型對(duì)照的表型一致，故圖中未顯示空載體對(duì)照)，T3代轉(zhuǎn)入重組表達(dá)載體PBI121-PwHAP5的轉(zhuǎn)基因擬南芥的種子在培養(yǎng)基中Nacl濃度為75mM、100mM、150mM和200mM時(shí)的萌發(fā)率顯著高于野生型對(duì)照和空載體對(duì)照的種子萌發(fā)率。2、甘露醇模擬干旱脅迫條件下的種子萌發(fā)實(shí)驗(yàn)取野生型擬南芥、空載體對(duì)照和上述T3代轉(zhuǎn)入重組表達(dá)載體PBI121_PwHAP5的轉(zhuǎn)基因擬南芥的種子，在MS培養(yǎng)基上進(jìn)行種子萌發(fā)實(shí)驗(yàn)，其中培養(yǎng)基中含不同甘露醇濃度(分別是0、100mM、200mM、300mM和400mM)，實(shí)驗(yàn)條件是光周期為16小時(shí)光照，8小時(shí)黑暗；光強(qiáng)為300-400umOl/M2/S；光照條件下的溫度為22_24°C，相對(duì)濕度為70-90%；黑暗條件下的溫度為18-20°C，相對(duì)濕度大于90%。在第7天統(tǒng)計(jì)種子萌發(fā)率，實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，測(cè)定結(jié)果如圖5所示(WT表示野生型擬南芥，T表示轉(zhuǎn)入重組表達(dá)載體PBI121-PwHAP5的轉(zhuǎn)基因擬南芥；空載體對(duì)照和野生型對(duì)照的表型一致，故圖中未顯示空載體對(duì)照)，T3代轉(zhuǎn)入重組表達(dá)載體PBI121-PwHAP5的轉(zhuǎn)基因擬南芥的種子在甘露醇濃度為100mM、200mM、300mM和400mM時(shí)的的萌發(fā)率顯著高于野生型對(duì)照和空載體對(duì)照的種子萌發(fā)率。權(quán)利要求一種蛋白，是如下1)或2)的蛋白質(zhì)1)由序列表中序列2所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)；2)將序列表中序列2的氨基酸殘基序列經(jīng)過(guò)一個(gè)或幾個(gè)氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且與植物種子萌發(fā)相關(guān)的由1)衍生的蛋白質(zhì)。2.權(quán)利要求1所述蛋白的編碼基因。3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的編碼基因，其特征在于所述蛋白的編碼基因?yàn)槿缦?)_4)中任一所述的基因1)其編碼序列是序列表中序列1；2)其核苷酸序列是序列表中的序列3；3)在嚴(yán)格條件下與1)或2)的基因雜交且編碼權(quán)利要求1所述蛋白的基因；4)與1)或2)的基因具有90%以上的同源性且編碼權(quán)利要求1所述蛋白的基因。4.含有權(quán)利要求2或3所述基因的表達(dá)盒、轉(zhuǎn)基因細(xì)胞系或重組菌。5.含有權(quán)利要求2或3所述基因的重組載體。6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的重組載體，其特征在于所述重組載體為在PBI121的多克隆位點(diǎn)間插入權(quán)利要求2或3所述基因得到的重組表達(dá)載體。7.一種培育轉(zhuǎn)基因植物的方法，是將權(quán)利要求2或3所述的編碼基因轉(zhuǎn)入目的植物中，得到轉(zhuǎn)基因植物，所述轉(zhuǎn)基因植物的種子在逆境下的萌發(fā)率高于所述目的植物。8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于權(quán)利要求2或3所述的編碼基因是通過(guò)權(quán)利要求4或5所述的重組表達(dá)載體導(dǎo)入目的植物中的。9.根據(jù)權(quán)利要求7或8所述的方法，其特征在于所述逆境是高鹽或干旱環(huán)境。10.根據(jù)權(quán)利要求7-9中任一所述的方法，其特征在于所述目的植物為雙子葉植物或單子葉植物，優(yōu)選是擬南芥。全文摘要本發(fā)明公開(kāi)了一種青杄轉(zhuǎn)錄因子PwHAP5及其編碼基因與應(yīng)用。所述PwHAP5是如下1)或2)的蛋白質(zhì)1)由序列表中序列2所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)；2)將序列表中序列2的氨基酸殘基序列經(jīng)過(guò)一個(gè)或幾個(gè)氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且與植物種子萌發(fā)相關(guān)的由1)衍生的蛋白質(zhì)。將PwHAP5蛋白的編碼基因?qū)霐M南芥中后，轉(zhuǎn)基因擬南芥的種子在高鹽或干旱環(huán)境下的萌發(fā)率顯著高于野生型擬南芥。文檔編號(hào)C12N1/19GK101824080SQ20101016858公開(kāi)日2010年9月8日申請(qǐng)日期2010年5月4日優(yōu)先權(quán)日2010年5月4日發(fā)明者于彥麗,張凌云,李彥澤,鄭成超申請(qǐng)人:北京林業(yè)大學(xué)