專利名稱：一種利用真菌誘導(dǎo)子提高桑黃黃酮產(chǎn)量的桑黃菌絲體液體發(fā)酵方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物工程技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種利用真菌誘導(dǎo)子提高桑黃黃酮產(chǎn)量
的液體發(fā)酵方法。
背景技術(shù)：
桑黃(Phelli墜igniarius)為擔子菌亞門(Basidiomycotina)，層菌纟岡 (Hymenomycetes)，多孑L菌目(Polyporales) ， f秀革孑L菌禾斗(Hymenochaetacae)，針層孑L菌屬 (Phellinus)真菌，是一種珍貴的大型藥用真菌。傳統(tǒng)中醫(yī)認為桑黃性甘、味苦，用于治療血 崩、脫肛、帶下、閉經(jīng)、脾虛泄瀉等?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，桑黃具有抗腫瘤、增強免疫力、抗 肝纖維化等功效。桑黃主要活性成分為多糖、三萜類物質(zhì)和黃酮類物質(zhì)。其中黃酮類化合 物具有抗氧化、擴張血管、降血脂和抗癌等作用， 一般是從天然植物中提取獲得，桑黃是少 有的含有黃酮類化合物的藥用真菌。在桑黃藥用價值被廣泛揭示的同時，桑黃的產(chǎn)量成為 抑制桑黃應(yīng)用的限制因素。由于受生理狀態(tài)的特殊性和復(fù)雜性以及外部環(huán)境的制約，造成 桑黃在自然界中形成子實體稀少，特別是形成可用子實體需要多年。而且人工栽培極其困 難，培養(yǎng)條件苛刻，且生長周期長達3 4年，難以滿足日益膨脹的市場需要。因此，需要尋 找出一種有效的生產(chǎn)桑黃黃酮的方法，以克服現(xiàn)有技術(shù)和生產(chǎn)需要的矛盾。液體發(fā)酵法生 產(chǎn)桑黃有效成分由于生產(chǎn)周期短、勞動力省以及受外部環(huán)境影響小等優(yōu)點被認為是一種有 效的方法。利用真菌誘導(dǎo)子用于桑黃發(fā)酵培養(yǎng)，以提高桑黃黃酮產(chǎn)量等次生代謝產(chǎn)物的研 究目前尚未見報道。因此，通過生物技術(shù)途徑建立桑黃液體發(fā)酵誘導(dǎo)體系，進一步提高細胞 黃酮類物質(zhì)的含量，具有重要的理論意義和應(yīng)用價值。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于克服上述已有技術(shù)的不足而提供一種工藝簡單、成本低、效果 顯著，大幅度提高桑黃黃酮產(chǎn)量的利用真菌誘導(dǎo)子提高桑黃黃酮產(chǎn)量的桑黃菌絲體液體發(fā) 酵方法，本方法可用于桑黃黃酮的工業(yè)化生產(chǎn)。
本發(fā)明的目的可以通過如下措施來達到一種利用真菌誘導(dǎo)子提高桑黃黃酮產(chǎn)量 的桑黃菌絲體液體發(fā)酵方法，其特征在于包括如下步驟
(1)真菌誘導(dǎo)子的制備 ①真菌誘導(dǎo)子菌株的培養(yǎng)將真菌誘導(dǎo)子菌種接種于PDA斜面培養(yǎng)基上活化后， 轉(zhuǎn)接到PDA平板培養(yǎng)基上，25 3(TC培養(yǎng)3 5天，取菌塊接種于裝有PD液體培養(yǎng)基的三 角瓶中，于25 30°C、100 180r/min搖床中培養(yǎng)5 7天后，過濾得到真菌誘導(dǎo)子菌絲 體備用； ②制備真菌誘導(dǎo)子將真菌誘導(dǎo)子菌絲體于60 7(TC下烘干，研磨破碎，按重量 體積比(g : ml)l : 2 1 : 5的比例加入濃度為65 85%乙醇，在室溫下浸泡10
15小時，過濾并收集濾渣，濾渣按重量體積比(g : mi)i : 2 i : 5的比例加入氯仿和正丁醇的混合液沖洗，氯仿與正丁醇的體積比為3 : i 5 : 1，如此反復(fù)沖洗濾渣3 5次，然后將濾渣按重量體積比(g : mi)i : 3 i : 5的比例用丙酮沖洗后，濾渣按重 量體積比(g : mi)i : 3 i : 5的比例再用水沖洗，自然風干，干物質(zhì)按重量體積比
(g : ml)l : 5 1 : 7的比例加入濃度為5 15%三氟乙酸，沸水浴0. 5 2小時，然后 過濾，濾液用NaOH中和至pH為4 7，在3t: 8"下靜置10 15小時，用0. 45 y m微孔 濾膜過濾除菌，制成真菌誘導(dǎo)子，_10°C -2(TC冷凍保存；
(2)桑黃的液體發(fā)酵培養(yǎng) 將斜面保藏的桑黃菌種接種到PDA平板培養(yǎng)基上，進行活化培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度25 30°C ，培養(yǎng)時間5 10天，然后取菌塊接種于裝有PD液體發(fā)酵培養(yǎng)基的三角瓶中進行發(fā)酵 培養(yǎng)，搖床轉(zhuǎn)速100 180r/min，溫度25 30°C，時間5 8天；
(3)真菌誘導(dǎo)子對桑黃細胞的誘導(dǎo)培養(yǎng) 在桑黃液體發(fā)酵培養(yǎng)第1 5天，加入真菌誘導(dǎo)子，使真菌誘導(dǎo)子的濃度達到 40 200 ii g/mL，然后繼續(xù)培養(yǎng)2 7天，得到桑黃菌絲體。 為了進一步實現(xiàn)本發(fā)明的目的，所述的真菌誘導(dǎo)子菌株的培養(yǎng)步驟中取直徑 0. 3 0. 6cm的菌塊3 5塊，接種于PD液體培養(yǎng)基中，每500mL三角瓶裝PD液體培養(yǎng)基 100 200mL。 為了進一步實現(xiàn)本發(fā)明的目的，所述的桑黃的液體發(fā)酵培養(yǎng)步驟中取直徑0.3 0. 6cm的菌塊3 5塊，接種于PD液體發(fā)酵培養(yǎng)基中，每500mL三角瓶裝PD液體培養(yǎng)基 100 200mL。 為了進一步實現(xiàn)本發(fā)明的目的，所述的真菌誘導(dǎo)子對桑黃誘導(dǎo)培養(yǎng)步驟中真菌誘 導(dǎo)子于桑黃發(fā)酵培養(yǎng)的第1天加入，然后繼續(xù)培養(yǎng)。 為了進一步實現(xiàn)本發(fā)明的目的，所述的真菌誘導(dǎo)子對桑黃誘導(dǎo)培養(yǎng)步驟中真菌誘 導(dǎo)子于桑黃發(fā)酵培養(yǎng)的第3天加入，然后繼續(xù)培養(yǎng)。 為了進一步實現(xiàn)本發(fā)明的目的，所述的真菌誘導(dǎo)子對桑黃誘導(dǎo)培養(yǎng)步驟中真菌誘 導(dǎo)子于桑黃發(fā)酵培養(yǎng)的第5天加入，然后繼續(xù)培養(yǎng)。
本發(fā)明同已有技術(shù)相比可產(chǎn)生如下積極效果 1、本發(fā)明將真菌誘導(dǎo)子用于桑黃黃酮的液體發(fā)酵生產(chǎn)，大幅度提高桑黃黃酮產(chǎn) 量，使產(chǎn)量達到340mg/L以上，是對照的4. 5倍。本方法工藝簡單、成本低、效果顯著，桑黃 黃酮含量高，是一種極具工業(yè)化前景的生產(chǎn)方法。所生產(chǎn)的桑黃黃酮可用于制備抗氧化、抗 衰老制劑，預(yù)防或治療腫瘤的藥物、添加劑。 2、本發(fā)明所述真菌誘導(dǎo)子菌株來源廣泛，大多食用菌病原真菌制備的誘導(dǎo)子，均 具有很好的誘導(dǎo)效果，誘導(dǎo)子制備方法簡便，重復(fù)性好。 3、本發(fā)明所采用的桑黃液體發(fā)酵工藝簡單，原材料成本低廉，更為重要的是整個 發(fā)酵過程可控，不受外部環(huán)境條件限制，非常適合工業(yè)化生產(chǎn)。

具體實施例方式下面對本發(fā)明的具體實施方式
作詳細說明
實施例1 : 菌種真菌誘導(dǎo)子菌種為枝頂孢屬真菌頂頭孢(Acremoni咖strict咖)，由中國普 通微生物菌種保藏管理中心購買，菌種編號為CGMCC No. 3. 2058。 桑黃菌種為普通栽培品種(Phelli皿s igniarius)，購自中國普通微生物菌種保藏管理中心，編號為CGMCC No. 51328。 —種利用真菌誘導(dǎo)子提高桑黃黃酮產(chǎn)量的桑黃菌絲體液體發(fā)酵方法，其特征在于 包括如下步驟 (1)真菌誘導(dǎo)子的制備 ①真菌誘導(dǎo)子菌株的培養(yǎng)將真菌誘導(dǎo)子菌種接種于PDA斜面培養(yǎng)基上活化后， 轉(zhuǎn)接到PDA平板培養(yǎng)基上，25t:培養(yǎng)5天，用打孔器在菌落邊緣打取直徑0. 3cm的菌塊3塊， 接種于PD液體培養(yǎng)基中，每500mL三角瓶裝PD液體培養(yǎng)基(為PDA培養(yǎng)基的組分中去除 瓊脂組分而成)lOOmL，于25°C 、 100r/min搖床中培養(yǎng)7天后，過濾得到真菌誘導(dǎo)子菌絲體備 用； ②真菌誘導(dǎo)子制備將真菌誘導(dǎo)子菌絲體于6(TC下烘干，研磨破碎，按重量體積
比(g : mi)i : 2(真菌誘導(dǎo)子乙醇)的比例加入濃度為65%乙醇，在室溫下浸泡io小 時，過濾并收集濾渣，濾渣按重量體積比(g : mi)i : 2(濾渣氯仿和正丁醇的混合液) 的比例加入氯仿和正丁醇的混合液沖洗，氯仿與正丁醇的體積比為3 : i，如此反復(fù)沖洗濾 渣3次，然后濾渣按重量體積比(g : mi)i : 3(濾渣丙酮)的比例用丙酮沖洗后，濾渣 按重量體積比(g : mi)i : 3(濾渣水)的比例再用水沖洗，自然風干，干物質(zhì)按重量體 積比(g : mi)i : 5(干物質(zhì)三氟乙酸)的比例加入濃度為5%三氟乙酸，沸水浴0.5小
時，然后過濾，濾液用NaOH中和至pH為5. 8，在3t:下靜置10小時，用0. 45 y m微孔濾膜過 濾除菌，制成真菌誘導(dǎo)子，-l(TC冷凍保存；
(2)桑黃的液體發(fā)酵培養(yǎng) 將斜面保藏的桑黃菌種接種到PDA平板培養(yǎng)基上，進行活化培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度25°C ， 培養(yǎng)時間10天，然后用打孔器在菌落邊緣打取直徑0. 3cm的菌塊3塊，接種于PD液體培養(yǎng) 基(為PDA培養(yǎng)基去除瓊脂組分而成)中進行發(fā)酵培養(yǎng)，每500mL三角瓶裝培養(yǎng)基100mL，， 搖床轉(zhuǎn)速100r/min，溫度25°C，時間8天;
(3)真菌誘導(dǎo)子對桑黃細胞的誘導(dǎo)培養(yǎng) 在桑黃液體發(fā)酵培養(yǎng)第1天，加入真菌誘導(dǎo)子，使真菌誘導(dǎo)子終濃度達到40 i！ g/ mL，然后繼續(xù)培養(yǎng)7天，得到桑黃菌絲體。
(4)桑黃黃酮的提取和檢測 將所得桑黃菌絲體烘干，取桑黃菌絲體粉末100mg，加入2mL 60 %乙醇，于室溫下 封口超聲提取24h，過濾，濾液封口置4t:下冷藏，殘渣重復(fù)上述操作3次，合并三次浸提液， 用60%乙醇定容至50ml，作為待測液，比色法測定桑黃黃酮含量為10. 5mg/100mg菌絲(干 重)，產(chǎn)量270. 2mg/L。
實施例2 : 菌種真菌誘導(dǎo)子菌種為木霉屬真菌木素木霉(Trichodermaviride)，由中國普 通微生物菌種保藏管理中心購買，菌種編號為CGMCC No. 3. 2196。 桑黃菌種為普通栽培品種(Phelli皿s igniarius)，購自中國普通微生物菌種保 藏中心，編號為CGMCC No. 51328。 —種利用真菌誘導(dǎo)子提高桑黃黃酮產(chǎn)量的桑黃菌絲體液體發(fā)酵方法，其特征在于 包括如下步驟 (1)真菌誘導(dǎo)子的制備
①真菌誘導(dǎo)子菌株的培養(yǎng)將真菌誘導(dǎo)子菌種接種于PDA斜面培養(yǎng)基上活化后， 轉(zhuǎn)接到PDA平板培養(yǎng)基上，3(TC培養(yǎng)3天，用打孔器在菌落邊緣打取直徑0. 6cm的菌塊5塊， 接種于PD液體培養(yǎng)基中，每500mL三角瓶裝PD液體培養(yǎng)基(為PDA培養(yǎng)基去除瓊脂組分 而成)200mL，于30°C、180r/min搖床中培養(yǎng)5天后，過濾得到真菌誘導(dǎo)子菌絲體備用；
②真菌誘導(dǎo)子制備將真菌誘導(dǎo)子菌絲體于7(TC下烘干，研磨破碎，按重量體積 比(g : ml)l : 5(真菌誘導(dǎo)子乙醇)的比例加入濃度為85%乙醇，在室溫下浸泡15小
時，過濾并收集濾渣，濾渣按重量體積比(g : mi)i : 5(濾渣氯仿和正丁醇的混合液) 的比例加入氯仿和正丁醇的混合液沖洗，氯仿與正丁醇的體積比為5 : i，如此反復(fù)沖洗濾 渣5次，然后濾渣按重量體積比(g : mi)i : 5(濾渣丙酮)的比例用丙酮沖洗后，濾渣 按重量體積比(g : mi)i : 5(濾渣水)的比例再用水沖洗，自然風干，干物質(zhì)按重量體 積比(g : mi)i : 7(干物質(zhì)三氟乙酸)的比例加入濃度為15%三氟乙酸，沸水浴2小
時，然后過濾，濾液用NaOH中和至pH為4，在8t:下靜置15小時，用0. 45 y m微孔濾膜過濾 除菌，制成真菌誘導(dǎo)子，_201:冷凍保存；
(2)桑黃的液體發(fā)酵培養(yǎng) 將斜面保藏的桑黃菌種接種到PDA平板培養(yǎng)基上，進行活化培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度30°C ， 培養(yǎng)時間5天，然后用打孔器在菌落邊緣打取直徑0. 6cm的菌塊5塊，接種于PD液體培養(yǎng) 基(為PDA培養(yǎng)基去除瓊脂組分而成)中進行發(fā)酵培養(yǎng)，每500mL三角瓶裝培養(yǎng)基200mL， 搖床轉(zhuǎn)速180r/min，溫度30°C ，時間5天 ;
(3)真菌誘導(dǎo)子對桑黃細胞的誘導(dǎo)培養(yǎng) 在桑黃液體發(fā)酵培養(yǎng)第5天，加入真菌誘導(dǎo)子，使真菌誘導(dǎo)子終濃度達到200 i！ g/ mL，然后繼續(xù)培養(yǎng)2天，得到桑黃菌絲體。
(4)桑黃黃酮的提取和檢測 將所得桑黃菌絲體烘干，桑黃菌絲體粉末100mg，加入2mL 60%乙醇，于室溫下封 口超聲提取24h，過濾，濾液封口置4t:下冷藏，殘渣重復(fù)上述操作3次，合并三次浸提液， 用60%乙醇定容至50ml，作為待測液，比色法測定桑黃黃酮含量為8. Omg/100mg菌絲(干 重)，產(chǎn)量170mg/L。
實施例3 : 菌種真菌誘導(dǎo)子菌種為輪枝菌屬真菌蘑菇輪枝孢(Verticilliumpsalliotae)， 由中國普通微生物菌種保藏管理中心購買，菌種編號為CGMCC No. 3. 4423。
桑黃菌種為普通栽培品種(Phelli皿s igniarius)，購自中國普通微生物菌種保 藏管理中心，編號為CGMCC No. 51328。 —種利用真菌誘導(dǎo)子提高桑黃黃酮產(chǎn)量的桑黃菌絲體液體發(fā)酵方法，其特征在于 包括如下步驟 (1)真菌誘導(dǎo)子的制備 ①真菌誘導(dǎo)子菌株的培養(yǎng)將真菌誘導(dǎo)子菌種接種于PDA斜面培養(yǎng)基上活化后， 轉(zhuǎn)接到PDA平板培養(yǎng)基上，28t:培養(yǎng)4天，用打孔器在菌落邊緣打取直徑0. 4cm的菌塊4塊， 接種于PD液體培養(yǎng)基(為PDA培養(yǎng)基去除瓊脂組分而成)中，每500mL三角瓶裝PD液體 培養(yǎng)基150mL，于28t:、150r/min搖床中培養(yǎng)6天后，過濾得到真菌誘導(dǎo)子菌絲體備用；
②真菌誘導(dǎo)子制備將真菌誘導(dǎo)子菌絲體于65t:下烘干，研磨破碎，按重量體積
6比(g : mi)i : 4(真菌誘導(dǎo)子乙醇)的比例加入濃度為70%乙醇，在室溫下浸泡12小 時，過濾并收集濾渣，濾渣按重量體積比(g : mi)i : 4(濾渣氯仿和正丁醇的混合液) 的比例加入氯仿和正丁醇的混合液沖洗，氯仿與正丁醇的體積比為4 : i，如此反復(fù)沖洗濾 渣4次，然后濾渣按重量體積比(g : mi)i : 4(濾渣丙酮)的比例用丙酮沖洗后，濾渣 按重量體積比(g : mi)i : 4(濾渣水)的比例再用水沖洗，自然風干，干物質(zhì)按重量體 積比(g : mi)i : e(干物質(zhì)三氟乙酸)的比例加入濃度為10%三氟乙酸，沸水浴i小
時，然后過濾，濾液用NaOH中和至pH為7，在5t:下靜置12小時，用0. 45 y m微孔濾膜過濾
除菌，制成真菌誘導(dǎo)子，-151:冷凍保存； (2)桑黃的液體發(fā)酵培養(yǎng) 將斜面保藏的桑黃菌種接種到PDA平板培養(yǎng)基上，進行活化培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度28°C ， 培養(yǎng)時間8天，然后用打孔器在菌落邊緣打取直徑0. 4cm的菌塊4塊，接種于PD液體培養(yǎng) 基(為PDA培養(yǎng)基去除瓊脂組分而成)中進行發(fā)酵培養(yǎng)，每500mL三角瓶裝培養(yǎng)基150mL， 搖床轉(zhuǎn)速150r/min，溫度28°C，時間7天;
(3)真菌誘導(dǎo)子對桑黃細胞的誘導(dǎo)培養(yǎng) 在桑黃液體發(fā)酵培養(yǎng)第3天，加入真菌誘導(dǎo)子，使真菌誘導(dǎo)子終濃度達到120 i！ g/ mL，然后繼續(xù)培養(yǎng)5天，得到桑黃菌絲體。
(4)桑黃黃酮的提取和檢測 將桑黃菌絲體烘干，桑黃菌絲體粉末100mg，加入2mL 60%乙醇，于室溫下封口超 聲提取24h，過濾，濾液封口置4t:下冷藏，殘渣重復(fù)上述操作3次，合并三次浸提液，用60% 乙醇定容至50ml，作為待測液，比色法測定桑黃黃酮含量為15. 5mg/100mg菌絲(干重)，產(chǎn) 量340mg/L。 本發(fā)明真菌誘導(dǎo)子菌種還可采用其他同類菌種，桑黃菌種也可采用其他普通栽培 品種。
權(quán)利要求
一種利用真菌誘導(dǎo)子提高桑黃黃酮產(chǎn)量的桑黃菌絲體液體發(fā)酵方法，其特征在于包括如下步驟(1)真菌誘導(dǎo)子的制備①真菌誘導(dǎo)子菌株的培養(yǎng)將真菌誘導(dǎo)子菌種接種于PDA斜面培養(yǎng)基上活化后，轉(zhuǎn)接到PDA平板培養(yǎng)基上，25～30℃培養(yǎng)3～5天，取菌塊接種于裝有PD液體培養(yǎng)基的三角瓶中，于25～30℃、100～180r/min搖床中培養(yǎng)5～7天后，過濾得到真菌誘導(dǎo)子菌絲體備用；②制備真菌誘導(dǎo)子將真菌誘導(dǎo)子菌絲體于60～70℃下烘干，研磨破碎，按重量體積比(g∶ml)1∶2～1∶5的比例加入濃度為65～85％乙醇，在室溫下浸泡10～15小時，過濾并收集濾渣，濾渣按重量體積比(g∶ml)1∶2～1∶5的比例加入氯仿和正丁醇的混合液沖洗，氯仿與正丁醇的體積比為3∶1～5∶1，如此反復(fù)沖洗濾渣3～5次，然后將濾渣按重量體積比(g∶ml)1∶3～1∶5的比例用丙酮沖洗后，濾渣按重量體積比(g∶ml)1∶3～1∶5的比例再用水沖洗，自然風干，干物質(zhì)按重量體積比(g∶ml)1∶5～1∶7的比例加入濃度為5～15％三氟乙酸，沸水浴0.5～2小時，然后過濾，濾液用NaOH中和至pH為4～7，在3℃～8℃下靜置10～15小時，0.45μm微孔濾膜過濾除菌，制成真菌誘導(dǎo)子，-10℃～-20℃冷凍保存；(2)桑黃的液體發(fā)酵培養(yǎng)將斜面保藏的桑黃菌種接種到PDA平板培養(yǎng)基上，進行活化培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度25～30℃，培養(yǎng)時間5～10天，然后取菌塊接種于裝有PD液體發(fā)酵培養(yǎng)基的三角瓶中進行發(fā)酵培養(yǎng)，搖床轉(zhuǎn)速100～180r/min，溫度25～30℃，時間5～8天；(3)真菌誘導(dǎo)子對桑黃細胞的誘導(dǎo)培養(yǎng)在桑黃液體發(fā)酵培養(yǎng)第1～5天，加入真菌誘導(dǎo)子，使真菌誘導(dǎo)子濃度達到40～200μg/mL，然后繼續(xù)培養(yǎng)2～7天，得到桑黃菌絲體。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種利用真菌誘導(dǎo)子提高桑黃黃酮產(chǎn)量的桑黃菌絲體液體 發(fā)酵方法，其特征在于所述的真菌誘導(dǎo)子菌株的培養(yǎng)步驟中取直徑0. 3 0. 6cm的菌塊 3 5塊，接種于PD液體培養(yǎng)基中，每500mL三角瓶裝PD液體培養(yǎng)基100 200mL。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種利用真菌誘導(dǎo)子提高桑黃黃酮產(chǎn)量的桑黃菌絲體液體 發(fā)酵方法，其特征在于所述的桑黃的液體發(fā)酵培養(yǎng)步驟中取直徑0. 3 0. 6cm的菌塊3 5塊，接種于PD液體培養(yǎng)基基中，每500mL三角瓶裝PD液體培養(yǎng)基100 200mL。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種利用真菌誘導(dǎo)子提高桑黃黃酮產(chǎn)量的桑黃菌絲體液體 發(fā)酵方法，其特征在于所述的真菌誘導(dǎo)子對桑黃細胞誘導(dǎo)培養(yǎng)步驟中真菌誘導(dǎo)子于桑黃發(fā) 酵培養(yǎng)的第1天加入，然后繼續(xù)培養(yǎng)。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種利用真菌誘導(dǎo)子提高桑黃黃酮產(chǎn)量的桑黃菌絲體液體 發(fā)酵方法，其特征在于所述的真菌誘導(dǎo)子對桑黃細胞誘導(dǎo)培養(yǎng)步驟中真菌誘導(dǎo)子于桑黃發(fā) 酵培養(yǎng)的第3天加入，然后繼續(xù)培養(yǎng)。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種利用真菌誘導(dǎo)子提高桑黃黃酮產(chǎn)量的桑黃菌絲體液體 發(fā)酵方法，其特征在于所述的真菌誘導(dǎo)子對桑黃細胞誘導(dǎo)培養(yǎng)步驟中真菌誘導(dǎo)子于桑黃發(fā) 酵培養(yǎng)的第5天加入，然后繼續(xù)培養(yǎng)。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種利用真菌誘導(dǎo)子提高桑黃黃酮產(chǎn)量的桑黃菌絲體液體發(fā)酵方法，其將真菌誘導(dǎo)子菌種接種活化培養(yǎng)后，取菌塊接種培養(yǎng)過濾得到真菌誘導(dǎo)子菌絲體；然后烘干研磨破碎加入乙醇浸泡，過濾并收集濾渣，濾渣依次加入氯仿和正丁醇的混合液、丙酮、水沖洗，風干后干物質(zhì)加入三氟乙酸，沸水浴0.5-2小時，然后過濾，取濾液中和、靜置、0.45μm微孔濾膜過濾除菌，制成真菌誘導(dǎo)子，-10℃～-20℃冷凍保存；將桑黃菌種接種活化培養(yǎng)，后取菌塊接種發(fā)酵培養(yǎng)；在桑黃液體發(fā)酵培養(yǎng)第1～5天，加入真菌誘導(dǎo)子繼續(xù)培養(yǎng)得到桑黃菌絲體，本發(fā)明工藝簡單、成本低、效果顯著，可大幅度提高桑黃細胞黃酮含量，是一種極具工業(yè)化前景的生產(chǎn)方法。
文檔編號C12N1/14GK101702984SQ20091022984
公開日2010年5月12日 申請日期2009年11月11日 優(yōu)先權(quán)日2009年11月11日
發(fā)明者劉宇, 圖力古爾, 姚強, 李維煥, 楊樹德, 程顯好, 繆靜, 高興喜, 黃立紅 申請人:魯東大學(xué)