專利名稱：一種超氧化物歧化酶的生產(chǎn)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種超氧化物歧化酶(SOD)的工業(yè)生產(chǎn)方法。
超氧化物歧化酶(SOD)制劑是近年來(lái)我國(guó)廣泛研究開(kāi)發(fā)的一種氧自由基清除劑，在醫(yī)學(xué)上有抗缺氧、增強(qiáng)機(jī)體免疫，并有治療糖尿病的作用。在食品及化妝品領(lǐng)域也有廣泛應(yīng)用。SOD制劑的制備方法很多，與本發(fā)明相關(guān)的方法主要由(1)熱變性處理，(2)中孔纖維超濾，(3)層析柱吸附處理等步驟組成，此類方法存在如下缺陷其一、是在熱變性處理過(guò)程中，由于溶液中大量雜蛋白被凝固，同時(shí)也有相當(dāng)數(shù)量的SOD分子被卷入凝固團(tuán)中沉淀，造成SOD分子損失；其二，是用中孔纖維超濾截流SOD6000-20000道爾頓的分子量，與人體有生理活性的SOD31200道爾頓分子量不相適應(yīng)，它不能作為臨床用藥；其三、在層析步驟所配用的鋰鹽、硫酸銅、氯化銅、磷酸銅和醋酸銅都能與SOD超化學(xué)反應(yīng)，增加了SOD的毒性；其四、生產(chǎn)周期長(zhǎng)，一般需24小時(shí)以上才能得到產(chǎn)品，生產(chǎn)規(guī)模小，不能直接放大生產(chǎn)。
本發(fā)明的目的是要提供一種純物理方法生產(chǎn)，不添加化學(xué)反應(yīng)劑，產(chǎn)品無(wú)毒性，品質(zhì)高適合人體使用，并且工藝簡(jiǎn)單、科學(xué)，加工處理能力大，成本低，得率高的超氧化物歧化酶的生產(chǎn)方法。
本發(fā)明的技術(shù)方案是其特點(diǎn)在于該方法的工藝過(guò)程是將動(dòng)物血液加抗凝劑抗凝，以大容量連續(xù)流分離機(jī)分離血漿和血球，然后等滲鹽清洗血球，在血球中加入血球的3-7倍量重蒸水，勻漿；以分子膜超濾截流32000道爾頓，二次截流30000以上道爾頓，由此收集到30000-32000道爾頓分子量，同時(shí)濃縮，通過(guò)徑向蛋白層析柱純化SOD精品，再經(jīng)分子膜除菌和脫鹽，然后分裝、冷凍干燥而成。上述超濾工藝是在超濾柱內(nèi)，用高速循環(huán)流動(dòng)方式來(lái)完成。
本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)及效果是首先由于本方法為物理生產(chǎn)方法，實(shí)現(xiàn)了無(wú)化學(xué)反應(yīng)劑生產(chǎn)，因而所得產(chǎn)品無(wú)毒性，完全適合人體使用，達(dá)到了醫(yī)用標(biāo)準(zhǔn)；同時(shí)，由于本方法收集的分子量為30000-32000道爾頓的SOD與人體有生理活性的SOD31200道爾頓分子量相適應(yīng)，所以可以作為臨床用藥；其次，該方法工藝簡(jiǎn)單、處理能力大，能在幾小時(shí)內(nèi)完成1000Kg以上的原血加工，而且還可以線性放大生產(chǎn)規(guī)模；再次，該方法在生產(chǎn)過(guò)程中基本無(wú)浪費(fèi)，所以生產(chǎn)成本亦低。最后，該方法生產(chǎn)出的產(chǎn)品純，可達(dá)到電泳純級(jí)產(chǎn)品。
實(shí)施例 1取10升牦牛全血，加入10％的抗凝劑檸檬酸鈉，連續(xù)分離得紅血球，以1∶1加生理鹽水5.5升洗血球，再加33升重蒸水勻漿30分種，用分子膜超濾柱超濾截流32000的分子量，換膜再超濾，截流30000以上分子量，濃縮得濃縮液約3.3升，酶活(連苯三酚自氧化法)7000單位/毫升，再經(jīng)徑向蛋白層析柱純化后，酶的比活可達(dá)10500單位/毫克蛋白，再經(jīng)分子膜除菌脫鹽、分裝、冷凍干燥。
實(shí)施例2 取1噸牦牛全血，加入10％的抗凝劑枸錄酸鈉，連續(xù)分離得紅血球，以1∶1加生理鹽水550公斤洗血球，再加3300升重蒸水勻漿30分鐘，用分子膜超濾柱超濾截流32000的分子量，換膜再超濾截流30000道爾頓以上分子量，濃縮，得濃縮液約330升，酶活(連苯二酚自氧化法)7000單位/毫升，再經(jīng)徑向蛋白層析柱純化后，酶的比活可達(dá)10500單位/毫克蛋白；經(jīng)分子膜除菌、脫鹽、分裝、冷凍干燥而成。產(chǎn)品達(dá)電泳級(jí)純。
實(shí)施例3 取豬全血10公斤，加入10％抗凝劑檸檬酸鈉，連續(xù)分離得紅血球，以1∶1加生理鹽水4.5公斤洗血球，再加27公斤重蒸水勻漿，用分子膜超濾柱超濾截流32000的分子量，換膜再超濾截流30000道爾頓以上分子量，濃縮，得濃縮液約3.3公斤，酶活(連苯三酚自氧化法)15000單位/毫升，再經(jīng)徑向蛋白層析柱純化后，酶的比活可達(dá)17000單位/毫克蛋白，經(jīng)分子膜除菌脫鹽、分裝、冷凍干燥而成。
權(quán)利要求
1．一種超氧化物歧化酶的生產(chǎn)方法，其特征在于其工藝過(guò)程是將動(dòng)物血液加抗凝劑抗凝，以大容量連續(xù)流分離機(jī)分離血漿和血球，然后等滲鹽清洗血球，在血球中加入血球的3-7倍量重蒸水，勻漿；以分子膜超濾截流32000道爾頓，二次截流30000以上道爾頓，由此收集到30000-32000道爾頓分子量，同時(shí)濃縮；通過(guò)徑向蛋白層析柱純化SOD精品，再經(jīng)分子膜除菌和脫鹽，然后分裝、冷凍干燥而成。
2．如權(quán)利要求1所述的一種超氧化物歧化酶的生產(chǎn)方法，其特征在于所述的超濾工藝是在超濾柱內(nèi)，用高速循環(huán)流動(dòng)方式來(lái)完成。
全文摘要
一種超氧化物歧化酶的生產(chǎn)方法,其工藝過(guò)程為將動(dòng)物血抗凝劑抗凝,以大容量連續(xù)流分離機(jī)分離血漿和血球,以等滲鹽清洗血球,在血球中加入血球的3－7倍量重蒸水,勻漿,以分子膜超濾截流32000道爾頓,二次截流30000以上道爾頓,由此收集到30000－32000道爾頓分子量,同時(shí)濃縮;通過(guò)徑向蛋白層析柱純化SOD精品,再經(jīng)分子膜除菌、脫鹽、分裝,冷凍干燥而成。該方法為物理生產(chǎn)方法,實(shí)現(xiàn)了無(wú)化學(xué)反應(yīng)劑生產(chǎn),產(chǎn)品無(wú)毒、適合人用。且該方法工藝簡(jiǎn)單、加工能力大、成本低、產(chǎn)品純、達(dá)到電泳純級(jí)。
文檔編號(hào)C12N9/08GK1307116SQ0010125
公開(kāi)日2001年8月8日 申請(qǐng)日期2000年1月24日 優(yōu)先權(quán)日2000年1月24日
發(fā)明者余滿堂 申請(qǐng)人:青海省高原醫(yī)學(xué)科學(xué)研究所