專利名稱：無毛小白鼠的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及無毛小白鼠，更詳細(xì)地說，是涉及幼毛生長但缺少一般毛生長功能的新的無毛小白鼠。
背景技術(shù)：
以往，作為用于研究皮炎治療藥等的動物，可舉出例如小白鼠、大白鼠、兔子等，但為了將這些動物用于研究，就必須預(yù)先實(shí)施各種處理。例如對于抗過敏性藥物的篩選，已知可使用引起PCA(passive cutaneousanaphylaxis)反應(yīng)的動物，但為了引起動物的PCA反應(yīng)，必須對于剪毛的皮膚給予含同種或異種的組織感染抗體的抗血清，為了測定該反應(yīng)，在一定時(shí)間后(用同種PCA的IgE抗體是48～168小時(shí))，必須從靜脈注射用抗原和色素或放射性同位素標(biāo)記了的白蛋白(永井博式2-1皮炎(1)PCA反應(yīng)、生物藥科學(xué)實(shí)驗(yàn)講座12卷炎癥和過敏性(Ⅰ-1)(大內(nèi)和雄編)，廣川書店，東京，1993,p.96-109)。這不僅是必要的處理操作，但也意味著這些抗血清等對于實(shí)驗(yàn)者具有危險(xiǎn)性，所以希望開發(fā)出不進(jìn)行這樣的處理，且能用于研究皮炎治療藥等的病態(tài)模型動物。
因此，本發(fā)明的目的在于提供符合上述希望的病態(tài)模型動物。
本發(fā)明者們在對于上述目的反復(fù)銳意研究的過程中，通過將突然變異得到的貧毛小白鼠進(jìn)行兄妹交配，成功地培育出符合上述目的的，皮膚病變的自然發(fā)病率非常高的無毛小白鼠，從而完成了本發(fā)明。
發(fā)明的公開本發(fā)明涉及無毛小白鼠，其特征是幼毛生長但缺少一般毛的生長功能，更詳細(xì)地說，是涉及濕潤性及干燥性皮膚病變的自然發(fā)病率，在24周齡以后，是70％以上的無毛小白鼠，皮膚的肥大細(xì)胞數(shù)在24周齡時(shí)約是50個/mm以上的無毛小白鼠，及血中IgE抗體值，在24周齡時(shí)，是約3500ng/ml以上的無毛小白鼠。
本發(fā)明的無毛小白鼠，如上所述，其特征是幼毛生長，但缺少一般毛的生長功能，從來還沒有研究出這種缺少一般毛的生長功能的小白鼠，另外，也沒有被披露的先例。
而且，本發(fā)明無毛小白鼠具有如下特征，即濕潤性及干燥性皮膚病變的自然發(fā)病率，在24周齡后，是70％以上；皮膚的肥大細(xì)胞數(shù)，在24周齡時(shí)為約50個/mm以上；及血中IgE抗體值在24周齡時(shí)，是約3500ng/ml以上。
然而，一般的有毛小白鼠不會自然發(fā)生濕潤性及干燥性皮膚病變，通過本發(fā)明者們的計(jì)算，其肥大細(xì)胞數(shù)通常是10個/mm左右，對于血中IgE抗體值，其定量的測定報(bào)告很少，且正常值也尚未確認(rèn)，但通常是非常微量的。因此，根據(jù)本發(fā)明者們的測定(使用下述測定試劑盒)，如下述表3及4所示，ICR小白鼠16周齡時(shí)是0.0-137.5ng/ml,ddY小自鼠16周齡時(shí)是0.0-5.0ng/ml。另外，文獻(xiàn)中報(bào)道，對于正常動物，BALB/c小白鼠時(shí)＜20-608ng/ml,C3H小白鼠時(shí)，全例＜20ng/ml，對于實(shí)驗(yàn)的寄生蟲(Nippostrongylus brasiliensis)感染動物，BALB/c小白鼠時(shí)，是2240-7168ng/ml,C3H小白鼠時(shí)，是1365-3068ng/ml(平野隆雄、宮島宏明，產(chǎn)生抗小白鼠IE單克隆雜交瘤抗體的概率及其應(yīng)用，Medical Immunology,15(2),211-216(1988))。
進(jìn)而，對于現(xiàn)有的無毛小白鼠也不自然發(fā)生濕潤性及干燥性皮膚病變，通過本發(fā)明者們計(jì)算其肥大細(xì)胞數(shù)通常是20個/mm左右，對于血中IgE抗體值，根據(jù)本發(fā)明者們的測定(使用下述測定試劑盒)，如下述表2所示，HRS/J小白鼠20周齡時(shí)，是102.0-253.0ng/ml。
與此相反，本發(fā)明的無毛小白鼠如上所述，其特征是在24周齡(或以后)，顯示非常高的皮膚病變自然發(fā)病率，皮膚的肥大細(xì)胞數(shù)及血中IgE抗體值，與一般有毛的小白鼠及現(xiàn)有的無毛小白鼠具有充分明顯區(qū)別的新穎性。
基于本發(fā)明無毛小白鼠具有上述特征，作為皮炎的預(yù)防及治療的篩選及藥效試驗(yàn)等的病態(tài)模型動物是非常有用的。
另外，本發(fā)明無毛小白鼠即使在24周齡以前，與現(xiàn)存的無毛小白鼠或進(jìn)行除毛等小白鼠比較，顯示了顯著穩(wěn)定的無毛狀態(tài)，因此，將非發(fā)生皮膚病變動物(特別是低周齡)，作為醫(yī)藥品、化妝品等經(jīng)皮給藥的藥劑的皮膚刺激性試驗(yàn)等試驗(yàn)動物時(shí)，具有不需除毛等的麻煩工序就可利用的優(yōu)點(diǎn)。
因此，本發(fā)明也提供使用這樣的本發(fā)明無毛小白鼠，進(jìn)行醫(yī)藥品、化妝品等經(jīng)皮使用的藥劑、代表性的皮炎的預(yù)防及治療劑的藥效和/或皮膚刺激性的試驗(yàn)方法。
本發(fā)明的上述試驗(yàn)，是利用本發(fā)明無毛小白鼠作為必要條件，除此之外與其他通常進(jìn)行的該種試驗(yàn)相同地進(jìn)行。例如代表性的，是將適量的被檢物質(zhì)賦形在軟膏劑、貼附劑等經(jīng)皮給藥形態(tài)物質(zhì)上按照常法涂敷、貼附在本發(fā)明無毛小白鼠的皮膚上，用一般的方法觀察、評價(jià)其經(jīng)時(shí)作用及效果。
本發(fā)明的無毛小白鼠是本發(fā)明者們在將雌性的C3H/He小白鼠和雄性的ddY小白鼠雜交成兄妹交配小白鼠的過程中，偶然確認(rèn)其發(fā)生的突然變異而培育的貧毛個體(雄性)作為起源的。上述雄性貧毛個體與同腹生的雌性進(jìn)行兄妹交配后，在其第2代時(shí)只得到雄性貧毛個體，但到第3代時(shí)可得到雌、雄貧毛個體，將該雌、雄貧毛個體進(jìn)行兄妹交配，可得到雌性的本發(fā)明無毛個體，將該雌性無毛個體與同腹生的雄性貧毛個體進(jìn)行兄妹交配，可成功地得到雌、雄無毛個體。將該雌雄無毛個體作為無毛0代，將它們進(jìn)行兄妹交配，其所有的子孫都是無毛個體，這樣就成功地培育了本發(fā)明無毛小白鼠。以下，將本發(fā)明無毛小白鼠稱為“NOA小白鼠”。
上述各代小白鼠的飼養(yǎng)方法，與通常的小白鼠飼養(yǎng)沒有特別的不同，例如在適當(dāng)?shù)幕\中，給予適當(dāng)?shù)娘暳?，可在隔離系統(tǒng)環(huán)境下，溫度為23±2℃、濕度為55±5％、從上午7點(diǎn)到下午7點(diǎn)，進(jìn)行12小時(shí)照明(例如，參照新實(shí)驗(yàn)動物學(xué)，朝倉書店，104頁，1986年)。作為上述飼料，可使用固形飼料(代表性的，CRF-1、Oriental Yeast IndustryCo.,Ltd.)，及可自由喝到自來水即可。
在上述飼養(yǎng)期間，可目視觀察毛的發(fā)育狀況及皮膚病變發(fā)生癥，皮膚的肥大細(xì)胞數(shù)及血中IgE抗體值，可按照常法，例如組織標(biāo)本的甲苯胺蘭染色法及使用市售的小白鼠IgE測定試劑盒的夾層ELISA法進(jìn)行測定。
本申請人將這樣的固定了的本發(fā)明無毛小白鼠(NOA小白鼠)經(jīng)常維持在可分讓的狀態(tài)，另外，其受精卵在1997年5月15日以寄存號第72022號寄存在美國型培養(yǎng)收集中心(ATCC),Park Lawn Drive 12301,Rockville,Maryland,USA 20852中。
附圖簡述


圖1是表示NOA小白鼠(5周齡、雄性)的外貌特征的代用圖紙的照片。
圖2是表示NOA小白鼠(10周齡、雄性)的外貌特征的代用圖紙的照片。
圖3是表示作為比較的HRS/J小白鼠(7周齡、雄性)的外貌特征的代用圖紙的照片。
圖4是表示作為比較的HRS/J小白鼠(28周齡、雄性)的外貌特征的代用圖紙的照片。
圖5是表示作為比較的BALB/cA-hr小白鼠(7周齡、雄性)的外貌特征的代用圖紙的照片。
圖6是表示作為比較的BALB/cA-hr小白鼠(28周齡、雄性)的外貌特征的代用圖紙的照片。
圖7是表示濕潤性皮膚病變發(fā)生癥NOA小白鼠(20周齡、雄性)的外貌特征的代用圖紙的照片。
圖8是表示圖7所示的NOA小白鼠4周后的外貌特征的代用圖紙照片。
圖9是表示圖7所示的NOA小白鼠12周后的外貌特征的代用圖紙照片。
圖10是表示圖7所示的NOA小白鼠16周后的外貌特征的代用圖照片。
圖11是表示研究在各周齡下，調(diào)查NOA小白鼠(雄性及雌性)，包括干燥性和濕潤性的全皮膚病變發(fā)病癥，求出其發(fā)病率的圖。
圖12是表示與
圖11相同地只求出濕潤性皮膚病變發(fā)病率的圖。
圖13是研究NOA小白鼠以及比較動物和對照動物，隨著年令增加，皮膚的肥大細(xì)胞數(shù)變化的圖。
圖14是研究NOA小白鼠(雄性及雌性)隨著年令增加，皮膚的肥大細(xì)胞數(shù)變化的圖。
圖15是研究NOA小白鼠(雄性)的背部皮膚的濕潤性及干燥性皮膚病變部位以及正常部位隨著年令增加，肥大細(xì)胞數(shù)變化的圖。
圖16是表示NOA小白鼠(48周齡、雄性)的皮膚(背部干燥性皮膚病變部位)的IgE抗體染色試驗(yàn)圖的代用照片。
圖17是表示NOA小白鼠(48周齡、雄性)體食淋巴節(jié)(顎下淋巴節(jié))的IgE抗體染色試驗(yàn)圖的代用照片。
圖18是表示NOA小白鼠體表淋巴節(jié)(顎下淋巴節(jié))臚胞部(32周齡、雄性)的IgE抗體染色試驗(yàn)圖的代用照片。
圖19是表示作為比較動物的BALB/cA-hr小白鼠(20周齡、雄性)的皮膚(背部)的IgE抗體染色試驗(yàn)圖的代用照片。
圖20是作為比較動物的BALB/cA-hr小白鼠(28周齡、雄性)的體表淋巴節(jié)(顎下淋巴節(jié))的IgE抗體染色試驗(yàn)圖的代用照片。
實(shí)施本發(fā)明的最佳方案以下，用實(shí)施例進(jìn)一步詳細(xì)地說明本發(fā)明。實(shí)施例1將C3H/He雌性小白鼠和ddY雄性小白鼠交配得到的由于突然變異培育的雄性貧毛個體作為祖先，將該雄性貧毛個體和同腹生的雌性貧毛個體交配得到的第3代雌雄貧毛個體，作為兄妹交配，得到雌性無毛個體。將該雌性無毛個體在同腹生的雄性貪毛個體進(jìn)行兄妹交配，得到雌雄無毛個體，將該雌雄無毛個體作為無毛0代，將其進(jìn)行兄妹交配，固定了本發(fā)明無毛小白鼠(NOA小白鼠)系列。
另外，各小白鼠的飼養(yǎng)是用飼養(yǎng)籠(底部170×280mm×H130mm、聚碳酸酯制、日本可樂麗社制，以最多5只/籠的組飼養(yǎng)進(jìn)行的。另外，飼養(yǎng)是在隔離系統(tǒng)環(huán)境下(溫度23±2℃、濕度55±5％、照明時(shí)間從上午7點(diǎn)到下午7點(diǎn)，12小時(shí))進(jìn)行的，在飼養(yǎng)期間，對于每個小白鼠都可自由吃到固形飼料(CRF-1、Oriental Yeast Industry Co.,Ltd.)，自由地喝到自來水。
對于由上述得到的NOA小白鼠，觀察如下各項(xiàng)目。
項(xiàng)目1脫毛方式……通過目視觀察。但是對于Rhino小白鼠，可通過文獻(xiàn)[A.Howard,“Rhino”,an allele of hairless in house mouse,J.Hered.,31,467-470(1940)；Stanley,J.Mann,Hair loss and cyst formationin Hairless and Rhino mutant mice.,ANAT.REC.,170,485-500(1971):Kawaji,H.,Tsukuda,R.and Nakaguchi,T.,Immunopathology of Rhinomouse,An autosomal recessive mutant with murine lupuslike disease.,ActaPathol.Jpn.,30(4),515-530(1980)]進(jìn)行確認(rèn)。
項(xiàng)目2皮膚病變的自然發(fā)病……通過目視觀察。
項(xiàng)目3皮膚的肥大細(xì)胞數(shù)……通過組織標(biāo)本的甲苯胺染色法測定。
項(xiàng)目4產(chǎn)生IgE抗體能1．用酶抗體法(ABC法)測定IgE抗體染色。
2．用夾層ELISA法測定血中IgE抗體值。
得到的結(jié)果如下所示。
項(xiàng)目1脫毛形式用目視觀察本發(fā)明的NOA小白鼠及比較用HRS/J及BALB/cA-hr的無毛小白鼠。但是，對于Rhino小白鼠；要通過上述文獻(xiàn)調(diào)查、確認(rèn)。
(1)NOA小白鼠幼毛生長，但缺少一般毛的生長功能、直到幼毛脫落的10周齡止，體毛消失。進(jìn)而，吻鼻部及眼瞼部的剛毛變短呈不規(guī)則狀(5周齡、參照
圖1)。然后，到12周齡時(shí)，吻鼻部及眼瞼部的剛毛也脫落，完全看不到體毛，成為非常光滑的無毛皮膚狀態(tài)(10周齡，參照圖2)。
(2)HRS/J小白鼠除了幼毛生長，還殘存一般毛的生長功能，雖然很少，但可看到一般毛(7周齡、參照圖3)。伴隨生長，該一般毛脫落，成為無毛皮膚(28周齡、參照圖4)，但對于滯后的，也有直到20周齡以后能看到體毛的個體，個體差異顯著。脫毛后的皮膚，與NOA小白鼠比較，看到深的皺紋?？烧５乜吹轿潜遣考把鄄€部的剛毛(28周齡、參照圖4)。
(3)BALB/cA-hr小白鼠與HRS/J小白鼠大致相同。即，除了幼毛生長，也殘存一般毛的生長功能、雖然很少可看到一般毛(7周齡、參照圖5)。伴隨成長，該一般毛脫落，成為無毛皮膚(28周齡、參照圖6)，但滯后的，到20周齡以后也有看到體毛的個體，個體差異顯著。脫毛后的皮膚，與NOA小白鼠比較皺紋多、且有粗糙感。
通?？烧５乜吹轿潜遣考把鄄€部的剛毛(28周齡、參照圖6)。
(4)Rhino小白鼠到13～14日令為止，外觀上屬于正常，但以后，從眼部開始脫毛，到3～4周齡繼續(xù)脫毛，只是腳、尾、耳有毛。到5周齡，在背部留有散在性的毛，對于后肢，到7周齡殘留有毛[參照A.Howard,“Rhino”,an allele of hairless in house mouse,J.Hered.,31,467-470(1940)]。
另外，如下表示即，到生后12日的被毛成長是正常的，但以后繼續(xù)脫毛，到25日令，被毛脫落。但有文獻(xiàn)記載到60日令之前可看到微小的散在性被毛的個體，該被毛往往是異常的毛(stanley,J.Mann,Hairloss and cyst formation in Hairless and Rhino mutant mice.,ANAT.REC.,170,485-500(1971))。從這些記載可推測也殘存一般毛的生長功能。
進(jìn)而，在A.Howard文獻(xiàn)上記載著剛毛雖然殘留一生，但老化時(shí)變短、彎曲、很多還可以脫落的現(xiàn)象，另一方面，在以下的文獻(xiàn)中還記載著吻鼻部及眼瞼部的剛毛是正常的(Kawaji,H.,Tsukoda,R.andNakaguchi,T.,Immunopathology of Rhino mouse,An autosomal recessivemutant with murine lupuslike disease.,Acta Pathol.Jpn.,30(4),515-530(1980))。
項(xiàng)目2皮膚病變的自然發(fā)病通過5周齡～48周齡前的目視，觀察本發(fā)明的NOA小白鼠及比較用的HRS/J及BALB/cA-hr的各無毛小白鼠。
(1)NOA小白鼠從10周齡左右可以看到皮膚病變的自然發(fā)病。可以確認(rèn)該皮膚病變是干燥性(干皮膚)的病變和濕潤性(潰瘍性)的病變，這些不是相異的病變，可認(rèn)為是表皮是否殘存的區(qū)別。
皮膚病變最初看到發(fā)紅時(shí)，這時(shí)向干燥性或者濕潤性轉(zhuǎn)移。向濕潤性的轉(zhuǎn)移，其表皮處于易于脫落的狀態(tài)，這可認(rèn)為是由于自然或物理的原因而引起的脫落。此時(shí)，表皮若不脫落而殘存著，可認(rèn)為是干燥性的，但是大多數(shù)為干燥性病變，可以推測以后向濕潤性轉(zhuǎn)移。
濕潤性皮膚病變，在低周齡下幾乎都是很微小的，大范圍地可確認(rèn)時(shí)是從16周齡左右開始，更大范圍地可以被確認(rèn)是24周齡以后。
濕潤性皮膚病變隨著加令而慢慢擴(kuò)張的樣子，如圖7～
圖10所示。圖7表示了20周齡的NOA小白鼠、圖8表示了其4周后(24周齡)、圖9表示其12周后(36周齡)、另外
圖10表示其16周后(40周齡)。
對各圖詳細(xì)地?cái)⑹?，圖7(20周齡)中，在上眼瞼至吻鼻部、肩部至背側(cè)部至腰部上看到濕潤性皮膚病變?？煽吹奖巢恐裂可巷@示了少量的脫鱗和粗糙感的干燥性皮膚病變。
圖8(24周齡)中，可看到濕潤性皮膚病變部的擴(kuò)張(上眼瞼部和吻鼻部的一部分有改善的傾向)。在干燥性皮膚病變部可以看到皮膚的薄層化。
圖9(36周齡)中，可看到在濕潤性皮膚病變進(jìn)而有病變的擴(kuò)張(上眼瞼部和吻鼻部的一部分改善)。在干燥性皮膚病變部可以看到皮膚的薄層化正在進(jìn)行。
圖10(40周齡)中，在干燥性皮膚病變部，進(jìn)一步看到皮膚的薄層化正在進(jìn)行。
上述的皮膚病變，對于嚴(yán)重的，可看到占體表面積20％以上的病例。濕潤性皮膚病變部分地被改善，但大范圍的病變消失的例子目前還沒有。
干燥性皮膚病變，在低周齡的小白鼠上大致地可以看出，而對于高周齡的可以看到高度地形成脫鱗、表皮顯著地薄層化。
調(diào)查上述皮膚病變的發(fā)病率，其結(jié)果如
圖11所示。
圖11中，是調(diào)查NOA小白鼠的各周齡雌雄各10只的包括干燥性和濕潤性的全皮膚病變發(fā)作情況，并求出其發(fā)病率的圖。
此外，皮膚病的發(fā)作有無判斷，一般是通過目視觀察，明顯地觀察到皮膚病變的，則作為發(fā)病動物。
圖中，平均的定義是表示雌雄的平均，n的數(shù)是各周齡雌雄分別是10只，檢查周齡是12階段，檢查動物的合計(jì)是雌雄各120只(合計(jì)240只)。
從
圖11可明顯看出包括干燥性和濕潤性皮膚病變發(fā)作率，對于16周齡的雌雄平均，可以達(dá)到90％。
從
圖12同樣地只求出濕潤性皮膚病的發(fā)作率。
從該圖可明顯地看出濕潤性皮膚病變的雌雄平均下的發(fā)病率對于16周齡是30％、24周齡是80％。
(2)HRS/J小鼠及BALB/cA-hr小鼠通過飼養(yǎng)期間(5周齡～48周齡)，可以看到數(shù)倒由于小白鼠爭斗引起的微小的濕潤性病變(外傷)，但對于這些動物也都未看到病變的擴(kuò)張，2周左右就得到改善、消失。
項(xiàng)目3皮膚的肥大細(xì)胞數(shù)在NOA小白鼠的病理組織學(xué)的檢索中，在皮膚病變部上可以看到多數(shù)的肥大細(xì)胞聚集。從這可以推論，對于NOA小白鼠的皮膚，肥大細(xì)胞在增殖著，為進(jìn)一步確認(rèn)，可用下述方法算出皮膚的肥大細(xì)胞數(shù)。
即，從背部、腰部、胸部及腹部的各皮膚采取約1cm長的皮膚，施以甲苯胺蘭染色，分別對三個地方(左右兩端及中央部)，用顯微鏡計(jì)數(shù)每1mm長的肥大細(xì)胞數(shù)，將這些值平均后，作為背部、腰部、胸部及腹部的肥大細(xì)胞數(shù)。
作為比較，對于HRS/J及BALB/cA-hr的各無毛小白鼠及對照用的ICR及ddY的一般有毛小白鼠進(jìn)行同樣的試驗(yàn)。
其結(jié)果，表示在
圖13中(縱軸肥大細(xì)胞數(shù)、個/mm及橫軸小白鼠周齡)。
此外，各小白鼠的個數(shù)(n、全是雄性)，對于NOA小白鼠各周齡10個(檢查周齡12階段、檢查動物合計(jì)120只)、對于比較動物及對照動物組各周齡5個(檢查階段8階段，檢查動物合計(jì)，各系統(tǒng)30頭)。另外，對于NOA小白鼠，不管有無皮膚病變發(fā)作，是隨機(jī)地選擇。進(jìn)而，HRS/J小鼠的結(jié)果以HRS/J表示、BALB/cA-hr小白鼠的結(jié)果以BALB/c-h表示、ICR小白鼠的結(jié)果以ICR表示，而對于ddY小白鼠的結(jié)果以ddY表示。
從
圖13可看出，本發(fā)明的NOA小鼠皮膚的肥大細(xì)胞數(shù)，12周齡是28個/mm、40周齡是57個/mm，此值與比較動物及對照動物對比后，是明顯的高值。事實(shí)上，HRS/J小白鼠，對于12周齡是15個/mm、40周齡是13個/mm、BALB/cA-hr小鼠，對于12周齡是21個/mm、40周齡是24個/mm、ICR小白鼠，對于12周齡是10個/mm、40周齡是10個/mm，另外，ddY小鼠，對于12周齡是11個/mm,40周齡是11個/mm。
進(jìn)而，對于NOA小白鼠，由于其雌雄的差別上述的肥大細(xì)胞數(shù)有若干的差別。這些也表示在用同樣方法求出的
圖14中(與
圖11相同的個體數(shù)，同樣地進(jìn)行了表示)。
另外，對于NOA小白鼠，從皮膚的狀態(tài)可以看出肥大細(xì)胞數(shù)上的差，與正常部位比較，在皮膚病變發(fā)病部位顯示高值(參照
圖15、平均的定義是不管有無皮膚病發(fā)作而放出的平均值、濕潤性表示濕潤性皮膚病變部、干燥性表示干燥性皮膚病變部、正常是表示正常皮膚部)。在皮膚病變發(fā)病部位及其周邊部也可看到顯著的高值，局部地也可看到表示300個/mm以上的值。
上述
圖15中，被檢查的個數(shù)(n)各周齡是10只、檢查周齡12階段、檢查動物合計(jì)120只，各項(xiàng)目(狀態(tài))的n數(shù)如下。
5周齡濕潤性皮膚病變部=0、干燥性皮膚病變部=0、正常部=107周齡濕潤性皮膚病變部=0、干燥性皮膚病變部=0、正常部=1010周齡濕潤性皮膚病變部=3、干燥性皮膚病變部=1、正常部=612周齡濕潤性皮膚病變部=2、干燥性皮膚病變部=2、正常部=616周齡濕潤性皮膚病變部=3、干燥性皮膚病變部=1、正常部=620周齡濕潤性皮膚病變部=4、干燥性皮膚病變部=5、正常部=124周齡濕潤性皮膚病變部=4、干燥性皮膚病變部=4、正常部=228周齡濕潤性皮膚病變部=5、干燥性皮膚病變部=5、正常部=032周齡濕潤性皮膚病變部=3、干燥性皮膚病變部=3、正常部=436周齡濕潤性皮膚病變部=5、干燥性皮膚病變部=3、正常部=240周齡濕潤性皮膚病變部=3、干燥性皮膚病變部=5、正常部=248周齡濕潤性皮膚病變部=6、干燥性皮膚病變部=4、正常部=0
從以上的結(jié)果可明顯地看出，對于NOA小白鼠皮膚的肥大細(xì)胞顯著地增殖著，這就暗示了是與皮膚病的發(fā)病率相關(guān)。
項(xiàng)目4IgE抗體產(chǎn)生能(1)IgE抗體染色觀察對于NOA小白鼠及為比較用的HRS/J及BALB/cA-hr的各無毛小白鼠及作為對照的ICR及ddY的一般有毛小鼠分別采取皮膚、體表淋巴節(jié)、胸腺及脾臟，用酶抗體法(ABC法)染色I(xiàn)gE抗體，顯微鏡下觀察。
對5周齡～48周齡的各供試小白鼠進(jìn)行上述觀察。
其結(jié)果，對于NOA小白鼠，從12周齡左右在皮膚的肥大細(xì)胞周圍可以看到很強(qiáng)的陽性反應(yīng)，可認(rèn)為體表的淋巴節(jié)上陽性細(xì)胞(認(rèn)為IgE抗體產(chǎn)生形質(zhì)細(xì)胞)增多。該反應(yīng)在皮膚病變的發(fā)病動物上更強(qiáng)，在該動物上可以看到更多的陽性細(xì)胞。進(jìn)而，對于皮膚病變發(fā)作動物，在淋巴節(jié)細(xì)胞部拗網(wǎng)樹枝狀細(xì)胞上出現(xiàn)陽性反應(yīng)(認(rèn)為是IgE抗體絡(luò)合物的沉淀)。這些如
圖16(NOA小白鼠48周齡、背部干燥性皮膚病變部)、
圖17(NOA小鼠24周齡、濕潤性皮膚病變發(fā)作動物的顎下淋巴節(jié))、
圖18(NOA小白鼠、32周齡、濕潤性皮膚病變發(fā)作動物的顎下淋巴節(jié)、細(xì)胞部)所示。再者，各圖中，表示了各部位的顯微鏡攝影照像(倍率×150倍)，以下的
圖19(背部皮膚)及圖20(顎下淋巴節(jié))也是同樣。
在
圖16中，被染色(黑色)成環(huán)狀或點(diǎn)狀，是IgE抗體陽性細(xì)胞，這里全部是肥大細(xì)胞。
按照
圖17，被染色(黑色)成點(diǎn)狀，是IgE抗體陽性細(xì)胞，可認(rèn)為這里全都是產(chǎn)生抗體的形質(zhì)細(xì)胞。
按照
圖18，被染色成中央部的網(wǎng)孔狀(黑色)，是陽性反應(yīng)，可認(rèn)為這是在臚胞部的細(xì)網(wǎng)樹肢狀細(xì)胞上沉積著IgE抗體絡(luò)合物。
與此相反，對于比較動物及對照動物，如
圖19及圖20所示，都是較弱的反應(yīng)可少數(shù)的陽性細(xì)胞。即，
圖19是BALB/cA-hr小白鼠的20周齡的背部皮膚顯微鏡照片、圖20是BALB/cA-hr小鼠、28周齡的顎下淋巴節(jié)的顯微鏡照片。
在
圖19中，被染色成環(huán)狀(黑色)的數(shù)個細(xì)胞是IgE抗體陽性細(xì)胞，這是肥大細(xì)胞。
在圖20中，被染色成點(diǎn)狀(黑色)的數(shù)個細(xì)胞是陽性細(xì)胞，可認(rèn)為這里是產(chǎn)生IgE抗體的形質(zhì)細(xì)胞。
從以上的結(jié)果，可以看出對于NOA小白鼠產(chǎn)生IgE抗體是亢進(jìn)的，這說明了是與皮膚病的病變發(fā)作癥是有關(guān)系的。
(2)血中IgE抗體值的測定由上述(1)的染色觀察，對于NOA小白鼠，產(chǎn)生IgE抗體的亢進(jìn)是明顯的，所以用以下血中IgE抗體值的測定試驗(yàn)可確認(rèn)此事實(shí)。
即，按照使用市售的測定試劑盒(商品名小白鼠IgE測定試劑盒“YAMASA”、EIA、YAMASA醬油株式會社制)的夾層ELISA法，測定血中IgE抗體值。
對于NOA小白鼠(雄性，5周齡～32周齡)得到的結(jié)果如下述表1所述。此外，表中，病變重度的表示用以下的符號。即“-”表示皮膚病變非發(fā)作動物、“+”～“+++”分別表示發(fā)作濕潤性皮膚病變動物，“+”號越多，表示病變的廣度越大?！癢”表示干燥性皮膚病變發(fā)作動物。
另外，作為對照使用的HRS/J小鼠(雄性、5、20及28周齡)、ICR小鼠(雄性、5、16及32周齡)及ddY小白鼠(雄性、5、16及32周齡同樣地求出中IgE抗體值分別表示在下述表2、表3及表4中。)
表1(NOA小白鼠

表2(HRS/J小白鼠)<

表3(ICR小白鼠)<

>
表4(ddY小白鼠)

從上述表1至表4的對比明顯地看出，NOA小白鼠與HRS/J小白鼠、ICR小白鼠及ddY小白鼠比較，顯示了相當(dāng)高的血中IgE抗體值、從這些事中也暗示了對于NOA小白鼠，IgE抗體的產(chǎn)生其亢進(jìn)是明顯的，這是與皮膚病的發(fā)病率是有關(guān)系的。
權(quán)利要求
1．無毛小白鼠，其特征在于生長幼毛，但缺少生長一般毛的能力。
2．權(quán)利要求1所述的無毛小白鼠，其中濕潤性及干燥性的皮膚病變的自然發(fā)病率在24周齡以后是70％以上。
3．權(quán)利要求1所述的無毛小白鼠，其中皮膚的肥大細(xì)胞數(shù)在24周齡時(shí)約為50個/mm以上。
4．權(quán)利要求1所述的無毛小白鼠，其中血中IgE抗體值在24周齡時(shí)約為3500ng/ml以上。
5．權(quán)利要求1-4任何一項(xiàng)所述的無毛小白鼠，其中是通過C3H/He雌雄小白鼠和ddY雄性小白鼠交配得到的突然變異的貧毛個體作為起源。
6．權(quán)利要求5所述的無毛小白鼠，其中通過貧毛個體的兄妹交配得到的無毛個體至少是通過1代兄妹交配而得到的。
7．對于權(quán)利要求1-6的任何一項(xiàng)所述的無毛小白鼠的皮膚進(jìn)行適用藥劑、藥劑的藥效和/皮膚刺激性的試驗(yàn)方法。
8．權(quán)利要求7所述的方法，其中的藥劑是個防皮炎及治療劑。
9．權(quán)利要求7所述的方法，其中的藥劑是化妝品。
10．為了試驗(yàn)藥劑的藥效和/或皮膚刺激性的如權(quán)利要求1-6中任何一項(xiàng)所述的無毛小鼠的利用。
11．權(quán)利要求10所述的無毛小白鼠的利用，其中的藥劑是預(yù)防皮炎及治療劑。
全文摘要
本發(fā)明涉及幼毛生長、但一般毛生長功能缺少的無毛小白鼠，更詳細(xì)地說提供了濕潤性及干燥性皮膚病變的發(fā)病率，在24周齡以后是70%以上、皮膚的肥大細(xì)胞數(shù)在24周齡時(shí)約為50個/mm以上，血中IgE抗體在24周齡時(shí)約3500ng/ml以上的無毛小白鼠。本發(fā)明無毛小白鼠作為皮炎治療藥等的研究、開發(fā)用病態(tài)模型動物等是有用的。
文檔編號A01K67/027GK1227464SQ97197093
公開日1999年9月1日 申請日期1997年7月30日 優(yōu)先權(quán)日1996年8月5日
發(fā)明者近藤泰三, 近藤敏男, 鹽本泰久 申請人:株式會社大塚制藥工場