本申請屬于植物育種，具體地，本申請?zhí)峁┝艘环N披堿草屬植物組織培養(yǎng)方法。

背景技術(shù)：

1、披堿草(elymus?dahuricus)和老芒麥(elymus?sibiricus)是禾本科披堿草屬多年生草本植物,具有抗寒性、抗干旱性、耐堿性、抗風(fēng)沙等特性，有良好的適應(yīng)性和生態(tài)可塑性。目前廣泛種植于我國西北和青藏高原地區(qū)，是草原和草甸的重要組成部分，也是該地區(qū)栽培利用的當(dāng)家牧草草種，具有較高的生態(tài)和飼用價值，是重要的牧草種質(zhì)資源。

2、近年來，隨著生物技術(shù)的發(fā)展，已經(jīng)初步建立了披堿草和老芒麥的再生體系，但現(xiàn)有的仍存在一些問題，如現(xiàn)有再生體系均以幼穗為外植體，獲取受季節(jié)和時間限制，且幼穗內(nèi)激素含量差別較大，影響再生率和遺傳穩(wěn)定性[趙智燕,潘俊松,何亞麗,等.兩個高羊茅無性系的營養(yǎng)器官組織培養(yǎng)及再生體系的建立[j].草業(yè)學(xué)報,2009,18(05):168-175.；李俊琴,云錦鳳,云嵐,等.新麥草幼胚愈傷組織誘導(dǎo)[j].中國草地學(xué)報,2008,(02):39-42+67.]，嚴重限制了披堿草和老芒麥的優(yōu)異耐逆基因挖掘及種質(zhì)改良。因此，建立以成熟胚為外植體的披堿草和老芒麥的穩(wěn)定再生體系，打破披堿草屬植物組培再生的時空限制，對于推動牧草產(chǎn)業(yè)的發(fā)展具有重要意義。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、本申請?zhí)峁┝艘环N以披堿草和老芒麥成熟種子為外植體的植株再生方法。通過調(diào)控種子處理方式、基本培養(yǎng)基、外源植物激素配比、優(yōu)良愈傷組織形態(tài)分析，來克服成熟種子作為外植體時披堿草和老芒麥愈傷組織獲取困難、分化率低的問題，同時獲得高比例的顆粒狀胚性愈傷組織，建立穩(wěn)定的再生技術(shù)體系，為進行遺傳轉(zhuǎn)化和性狀改良提供研究平臺。

2、一方面，本申請?zhí)峁┝艘环N披堿草屬植物組織培養(yǎng)方法，所述方法包括：

3、(1)種子處理；

4、(2)愈傷組織誘導(dǎo)；

5、(3)愈傷組織繼代；

6、(4)愈傷組織分化。

7、進一步地，所述披堿草屬植物為披堿草或老芒麥。

8、進一步地，所述(1)種子處理包括：選取飽滿種子，置于3％-5％的次氯酸鈉中消毒20min，用無菌去離子水洗滌10次；將種子外的稃片剝?nèi)?；將剝?nèi)ワ蟮姆N子立刻再次用3％-5％的次氯酸鈉消毒20min，無菌水洗滌10次；消毒處理過的種子切傷種胚后放置于愈傷誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，進行避光培養(yǎng)。

9、進一步地，(2)愈傷組織誘導(dǎo)中使用ms基礎(chǔ)培養(yǎng)基，所述ms基礎(chǔ)培養(yǎng)基中添加有3mg?l-1或4mg?l-1的2,4-d和0.1mg?l-1的6-ba。

10、進一步地，(2)愈傷組織誘導(dǎo)中選擇呈黃色，質(zhì)地堅硬，結(jié)構(gòu)致密的愈傷組織進行后續(xù)愈傷組織繼代。

11、進一步地，(2)愈傷組織誘導(dǎo)中選擇呈白色，結(jié)構(gòu)疏松，含水量大呈棉花狀，含1-3個硬核的愈傷組織進行后續(xù)愈傷組織繼代。

12、進一步地，(3)愈傷組織繼代中使用ms基礎(chǔ)培養(yǎng)基，所述ms基礎(chǔ)培養(yǎng)基中添加有5mg?l-1的2,4-d和0.1mg?l-1的6-ba。

13、進一步地，(4)愈傷組織分化中使用ms基礎(chǔ)培養(yǎng)基，所述ms基礎(chǔ)培養(yǎng)基中添加有2mg?l-1的2,4-d和0.1mg?l-1的6-ba。

14、進一步地，所述方法還包括生根培養(yǎng)步驟。

15、另一方面，本申請?zhí)峁┝松鲜龇椒ㄔ谂麎A草屬植物遺傳操作，育種或種質(zhì)資源保護中的應(yīng)用。

技術(shù)特征：

1.一種披堿草屬植物組織培養(yǎng)方法，其特征在于，所述方法包括：

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述披堿草屬植物為披堿草或老芒麥。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，所述(1)種子處理包括：選取飽滿種子，置于3％-5％的次氯酸鈉中消毒20min，用無菌去離子水洗滌10次；將種子外的稃片剝?nèi)ィ粚內(nèi)ワ蟮姆N子立刻再次用3％-5％的次氯酸鈉消毒20min，無菌水洗滌10次；消毒處理過的種子切傷種胚后放置于愈傷誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，進行避光培養(yǎng)。

4.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項所述的方法，(2)愈傷組織誘導(dǎo)中使用ms基礎(chǔ)培養(yǎng)基，所述ms基礎(chǔ)培養(yǎng)基中添加有3mg?l-1或4mg?l-1的2,4-d和0.1mg?l-1的6-ba。

5.根據(jù)權(quán)利要求1-4任一項所述的方法，(2)愈傷組織誘導(dǎo)中選擇呈黃色，質(zhì)地堅硬，結(jié)構(gòu)致密的愈傷組織進行后續(xù)愈傷組織繼代。

6.根據(jù)權(quán)利要求1-5任一項所述的方法，(2)愈傷組織誘導(dǎo)中選擇呈白色，結(jié)構(gòu)疏松，含水量大呈棉花狀，含1-3個硬核的愈傷組織進行后續(xù)愈傷組織繼代。

7.根據(jù)權(quán)利要求1-6任一項所述的方法，(3)愈傷組織繼代中使用ms基礎(chǔ)培養(yǎng)基，所述ms基礎(chǔ)培養(yǎng)基中添加有5mg?l-1的2,4-d和0.1mg?l-1的6-ba。

8.根據(jù)權(quán)利要求1-7任一項所述的方法，，(4)愈傷組織分化中使用ms基礎(chǔ)培養(yǎng)基，所述ms基礎(chǔ)培養(yǎng)基中添加有2mg?l-1的2,4-d和0.1mg?l-1的6-ba。

9.根據(jù)權(quán)利要求1-8任一項所述的方法，所述方法還包括生根培養(yǎng)步驟。

10.根據(jù)權(quán)利要求1-9任一項所述的方法在披堿草屬植物遺傳操作，育種或種質(zhì)資源保護中的應(yīng)用。

技術(shù)總結(jié)
本申請?zhí)峁┝艘环N披堿草屬植物組織培養(yǎng)方法，包括：(1)種子處理；(2)愈傷組織誘導(dǎo)；(3)愈傷組織繼代；(4)愈傷組織分化。通過選擇適合的種子處理方法，愈傷組織挑選標(biāo)準以及各步驟中使用的培養(yǎng)基，本申請的方法有效提高了愈傷組織誘導(dǎo)率和分化率，解決了成熟種子作為外植體時披堿草和老芒麥愈傷組織獲取困難、分化率低的問題，獲得了披堿草和老芒麥的高頻植株再生體系。

技術(shù)研發(fā)人員：劉燕蓉,張萬軍,沈菲菲,高婭楠,苑峰,劉亞玲
受保護的技術(shù)使用者：中國農(nóng)業(yè)大學(xué)
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2025/1/9