一種天然的無色生物防霉防腐菌劑的制備方法【專利摘要】本發(fā)明涉及一種天然無色生物防霉防腐菌劑的制備方法。首先將產(chǎn)酶溶桿菌C3接一環(huán)種子于錐形瓶中，置于搖床培養(yǎng)得產(chǎn)酶溶桿菌C3種子液；液體培養(yǎng)基裝入發(fā)酵罐內(nèi)，再接入產(chǎn)酶溶桿菌C3種子液進(jìn)行培養(yǎng)得高活性產(chǎn)酶溶桿菌C3防霉防腐菌劑；將高活性產(chǎn)酶溶桿菌C3防霉防腐菌劑于60～100℃之間加熱2～10min進(jìn)行熱處理；最后將改性活性炭加入菌劑中進(jìn)行脫色反應(yīng)，其加入量是淺棕色的高活性產(chǎn)酶溶桿菌C3防霉防腐菌劑重量的0.5～3.0%，即得到天然的無色生物防霉防腐菌劑。本發(fā)明通過醋酸改性后使活性炭表面酸性含氧官能團(tuán)具有極性的性質(zhì)，加強(qiáng)吸附極性較強(qiáng)的化合物，增加其吸附力和對色素等特定雜質(zhì)的選擇性吸附能力?！緦＠f明】一種天然的無色生物防霉防腐菌劑的制備方法【
技術(shù)領(lǐng)域：
】[0001]本發(fā)明涉及防霉防腐菌劑的制備方法，屬于輕工領(lǐng)域，具體涉及一種天然無色生物防霉防腐菌劑的制備方法?！?br>背景技術(shù)：
】[0002]細(xì)菌和霉菌廣泛分布于自然界中，其種類繁多，數(shù)量龐大，繁殖能力極強(qiáng)。它們對人類常造成不小的危害，引起竹、木、食品、衣物、花卉、紙質(zhì)文物及各種器材等霉腐，或?qū)е氯恕?dòng)物和農(nóng)作物病害。據(jù)聯(lián)合國糧食組織(FoodandAgricultureOrganizat1n,FAO)統(tǒng)計(jì)，全球每年農(nóng)產(chǎn)品受霉菌污染高達(dá)25%，其繁殖產(chǎn)生威脅人和動(dòng)植物安全的真菌毒素。迫切需要尋找防止和控制霉腐菌污染的方法，生物防霉防腐菌劑以其高效、環(huán)保優(yōu)勢前景廣闊。[0003]溶桿菌屬存在于土壤和水體中，有較高的滑動(dòng)性和G+C含量，能產(chǎn)生多種微生物活性物質(zhì)，對細(xì)菌、真菌、單細(xì)胞藻類和線蟲都有拮抗活性，主要為:胞外酶等一系列大分子活性物質(zhì)，如α-蛋白水解酶、幾丁質(zhì)酶、β_1，3-葡聚糖酶、核酶、磷酸酶、脂解酶、β-內(nèi)酰胺酶、肽鏈內(nèi)切酶等；小分子活性物質(zhì)如WAP-8294A,HSAF(heatstableantifungalfactor),Lysobactin,Cephabacins和Tripropeptins等。國內(nèi)外研究表明，產(chǎn)酶溶桿菌C3(美國典型培養(yǎng)物保藏中心，菌株編號:ATCC29487，下同)采用貧瘠培養(yǎng)基發(fā)酵，可合成對多種細(xì)菌和真菌都具有抑制活性產(chǎn)物，主要活性物質(zhì)為耐熱性的熱穩(wěn)定抗真菌因子(HSAF)。然而，所有文獻(xiàn)報(bào)道均表明，它只在寡營養(yǎng)條件下有活性而在豐富培養(yǎng)基上不能合成活性物質(zhì)，但實(shí)際生產(chǎn)又必須采用豐富培養(yǎng)基以合成高濃度產(chǎn)物，從而降低生產(chǎn)成本，這一矛盾是其開發(fā)應(yīng)用的主要障礙。為此，本實(shí)驗(yàn)室前期曾通過發(fā)酵工藝優(yōu)化，發(fā)現(xiàn)飴糖或蔗糖可促其在豐富培養(yǎng)基發(fā)酵合成大量活性物質(zhì)，稀釋50倍仍具有較強(qiáng)抑菌活性，并制備成可用于竹材防霉的菌劑ZL201210302047.4(一種竹材和竹制品專用防霉菌劑的制備及應(yīng)用)。但在應(yīng)用過程中發(fā)現(xiàn)飴糖來源不穩(wěn)定且生產(chǎn)成本較高，并且產(chǎn)酶溶桿菌發(fā)酵時(shí)會產(chǎn)生淺黃色色素，這種有色防霉菌劑應(yīng)用時(shí)色素沉積附著在物品表面，影響美觀度和品質(zhì)。[0004]有鑒于此，本發(fā)明采用單因子實(shí)驗(yàn)、均勻設(shè)計(jì)和響應(yīng)面分析法優(yōu)化發(fā)酵培養(yǎng)基，獲得更為廉價(jià)且來源廣泛的工業(yè)化豐富培養(yǎng)基配方。并且，產(chǎn)酶溶桿菌C3發(fā)酵后，通過優(yōu)化的高效脫色劑和脫色工藝處理，制備高活性高品質(zhì)的無色天然防霉腐菌劑，不僅可以防霉，還能防腐(控制細(xì)菌污染)，而且無色透明，完全保持物品原有色澤和品質(zhì)。所制備的菌劑無色高效、安全環(huán)保、成本低廉、原料簡便且來源廣泛，既可有效應(yīng)用于木材、竹材、紙張、花卉、衣物和果蔬等防霉，又能保持物品本身特性。研究還發(fā)現(xiàn)脫色吸附劑存在灰分含量、孔容性、微孔分布、比表面積和吸附選擇性能不足等缺陷，影響脫色效果，并且因選擇性差造成活性組分損失嚴(yán)重而降低收率。通過對其結(jié)構(gòu)和性質(zhì)進(jìn)行改性，可以有效提高其吸附能力和選擇性。主要為物理和化學(xué)方法增加改性后吸附劑的比表面積、改變孔隙結(jié)構(gòu)與分布，以及吸附表面基團(tuán)結(jié)構(gòu)，從而改變吸附劑的物理吸附性能和表面化學(xué)性質(zhì)，提高對色素的選擇性吸附和吸附容量，以保證良好脫色效果和活性損失最低，獲得高活性的無色防霉防腐囷劑?！?br/>發(fā)明內(nèi)容】[0005]本發(fā)明通過單因子實(shí)驗(yàn)、均勻設(shè)計(jì)和響應(yīng)面分析法獲得產(chǎn)酶溶桿菌C3工業(yè)化發(fā)酵的廉價(jià)豐富培養(yǎng)基配方和不影響活性的無色防霉防腐菌劑的制備方法。[0006]為實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的目的采用的技術(shù)方案:1、產(chǎn)酶溶桿菌C3種子液的制備(1)LB液體培養(yǎng)基的配方為:以100份水的重量計(jì)，蛋白胨10份，酵母提取物5份，NaCl10份。[0007](2)制備將活化好的產(chǎn)酶溶桿菌C3接一環(huán)種子于裝有70mlLB液體培養(yǎng)基的500ml的錐形瓶，置于230r/min、26?30°C的搖床培養(yǎng)30?48h，制備成產(chǎn)酶溶桿菌C3種子液。[0008]2、高活性產(chǎn)酶溶桿菌C3防霉防腐菌劑的制備(1)以100份水的重量計(jì)，液體培養(yǎng)基的配方為:NaCl0.5?1份豆餅粉1.5?3.5份玉米粉1?5份CaCl20.05?0.1份；(2)制備將液體培養(yǎng)基裝入發(fā)酵罐內(nèi)，并接入產(chǎn)酶溶桿菌C3種子液；液體培養(yǎng)基裝料量為罐體積70%?80%，產(chǎn)酶溶桿菌C3種子液的接種量為液體培養(yǎng)基裝料量的5?10%;攪拌，轉(zhuǎn)速為200?350r/min,通氣量為1:0.3?0.5(V/V.min)，培養(yǎng)38?52h，獲得淺棕色的高活性產(chǎn)酶溶桿菌C3防霉防腐菌劑。[0009]3、高活性產(chǎn)酶溶桿菌C3無色生物防霉防腐菌劑的制備(1)改性活性炭的預(yù)制備為了提高活性炭對色素選擇性吸附能力，而不吸附菌劑中的活性組分，采用醋酸對粉狀或粒狀活性炭進(jìn)行改性處理。[0010]改性反應(yīng)體系:lmol/L醋酸5?20重量份粉狀或粒狀活性炭95?80重量份；改性反應(yīng)時(shí)間10?30min，反應(yīng)溫度50?70°C，改性后活性炭用水洗除去多余的醋酸直至出洗出水為中性為止得到改性活性炭。[0011](2)將步驟2制備得到的淺棕色的高活性產(chǎn)酶溶桿菌C3防霉防腐菌劑于60?100°C之間加熱2?lOmin進(jìn)行熱處理，經(jīng)熱處理后沉淀了部分色素和雜蛋白，而保留防霉防腐生物活性不損失。[0012](3)無色生物防霉防腐菌劑的制備將預(yù)制備的改性活性炭加入熱處理后的淺棕色的高活性產(chǎn)酶溶桿菌C3防霉防腐菌劑中進(jìn)行脫色反應(yīng)，改性活性炭的加入量是淺棕色的高活性產(chǎn)酶溶桿菌C3防霉防腐菌劑重量的0.5?3.0%;脫色反應(yīng)溫度15?30°C，攪拌，轉(zhuǎn)速90?150r/min，脫色反應(yīng)時(shí)間30min?3h。此過程菌劑逐漸由淺棕色的轉(zhuǎn)化到無色透明化，即得到本發(fā)明所述的天然的無色生物防霉防腐菌劑。經(jīng)測定，本發(fā)明制備得到的天然的無色生物防霉防腐菌劑活性得率達(dá)到95%以上。[0013]4.高活性脫色防霉防腐菌劑應(yīng)用將本發(fā)明所制備的脫色防霉防腐菌劑直接或稀釋1-50倍后，可采用噴灑、浸泡或涂抹等方法用于花卉、紙張、木材和竹材等物品防霉腐，效果顯著且保持物品原有色澤和品質(zhì)。[0014]本發(fā)明通過單因素試驗(yàn)確定最佳碳源、氮源。分別選取麥芽汁、玉米粉、飴糖、玉米淀粉、蔗糖、乳糖、可溶性淀粉、殼聚糖、葡萄糖、麥芽糖為產(chǎn)酶溶桿菌C3發(fā)酵培養(yǎng)基碳源，實(shí)驗(yàn)確定玉米粉較適；再選取蛋白胨、花生餅粉、玉米漿粉、豆柏粉、魚胨、麩皮、酵母浸膏、黃豆粉、燕麥粉、豆餅粉等為產(chǎn)酶溶桿菌C3發(fā)酵培養(yǎng)基氮源，實(shí)驗(yàn)確定豆餅粉較適。因玉米粉和豆餅粉均來源廣泛，成本低廉，適于工業(yè)化。進(jìn)一步采用響應(yīng)面分析法優(yōu)化培養(yǎng)基配方，確定最佳配方。然后，進(jìn)一步通過對脫色劑和脫色工藝優(yōu)化研究，在保持防霉防腐活性基礎(chǔ)上將棕黃色發(fā)酵液制備成無色的脫色防霉防腐菌劑。[0015]同時(shí)還通過大量單因素實(shí)驗(yàn)綜合比較硅藻土、活性炭、陰陽離子交換樹脂、高嶺土、聚酰胺等對產(chǎn)酶溶桿菌C3菌劑活性影響和脫色效果，再進(jìn)行均勻設(shè)計(jì)優(yōu)化脫色工藝，結(jié)果粉狀或粒狀活性炭經(jīng)醋酸活化改性處理10?30min，以0.5?3.0%添加量、脫色溫度15?30°C、脫色時(shí)間0.5?3.0h、pH5?8條件下脫色,可獲得活性損失極少的無色菌劑。[0016]對于活性炭，本發(fā)明通過醋酸改性后使活性炭表面酸性含氧官能團(tuán)具有極性的性質(zhì)，加強(qiáng)吸附極性較強(qiáng)的化合物，增加其吸附力和對色素等特定雜質(zhì)的選擇性吸附能力，故具有良好脫色效果又不影響產(chǎn)品活性。因此，通過脫色后的菌劑與未脫色的菌劑的抑菌活性對比，發(fā)現(xiàn)活性相當(dāng)甚至有些反而抑菌活性有增大的現(xiàn)象。[0017]本發(fā)明與已有技術(shù)相比的顯著優(yōu)點(diǎn)是:本發(fā)明制備產(chǎn)酶溶桿菌C3防霉防腐菌劑的培養(yǎng)基配方為玉米粉和豆餅粉，其來源廣泛，價(jià)格低廉，營養(yǎng)極其豐富，可大量合成高濃度活性產(chǎn)物，適用于大規(guī)模工業(yè)生產(chǎn)，克服了此前所有文獻(xiàn)報(bào)道產(chǎn)酶溶桿菌C3需要貧乏營養(yǎng)條件才能合成活性產(chǎn)物的難題；本發(fā)明充分利用菌劑活性產(chǎn)物耐熱和其他理化特性，采用加熱處理發(fā)酵液和化學(xué)活性劑醋酸改性活性炭再脫色，既保留活性組分又選擇性高效去除菌劑中的發(fā)色成分，脫色效果顯著且保持了產(chǎn)酶溶桿菌C3菌劑的高活性，使脫色菌劑可應(yīng)用于高品質(zhì)木材、紙張、花卉、竹材和衣物等的防霉防腐?！緦＠綀D】【附圖說明】[0018]圖1是不同防霉防腐菌劑色度效果對比圖。[0019]圖2是不同防霉防腐菌劑活性效果比較圖。[0020]圖3是采用未經(jīng)脫色的1號防霉防腐菌劑處理白色紙張霉斑效果圖。[0021]圖4是采用活性炭直接脫色制備的2號防霉防腐菌劑處理白色紙張霉斑效果圖。[0022]圖5是采用本發(fā)明方法制備的3號防霉防腐菌劑處理白色紙張霉斑效果圖。[0023]圖6是不同防霉防腐劑對松木的防霉防腐效果比較圖。具體實(shí)施例[0024]為了對本發(fā)明有更好的理解，現(xiàn)結(jié)合附圖以實(shí)施例的方式做進(jìn)一步的說明。[0025]圖1中，1是未經(jīng)脫色的1號防霉防腐菌劑色度效果；2是采用活性炭直接脫色制備的2號防霉防腐菌劑色度效果；3是采用本發(fā)明方法制備的3號防霉防腐菌劑色度效果。從圖中可以看出，1號防霉防腐樣品未采用脫色工藝，菌劑偏黃色且渾濁；2號防霉防腐菌劑樣品采用的是活性炭直接脫色，雖然色度不如1號樣品深，但仍然較深；3號防霉防腐菌劑是采用本發(fā)明所述的方法制備的，呈無色透明狀。[0026]1號防霉防腐菌劑是采用本發(fā)明方法的步驟1和步驟2制備方法得到的。2號防霉防腐菌劑是在1號防霉防腐菌劑的基礎(chǔ)上采用未經(jīng)改性的活性炭脫色得到的。下同。[0027]圖2中，1是采用未脫色1號防霉防腐菌劑對霉菌的防霉抑菌圈；2是采用活性炭直接脫色制備的2號防霉防腐菌劑對霉菌的防霉抑菌圈；3是采用本發(fā)明方法制備的3號防霉防腐囷劑對霉囷的防霉抑囷圈。從對比圖可以看出，本發(fā)明制備的3號防霉防腐囷劑的抑菌效果與未脫色處理的1號防霉防腐菌劑基本相當(dāng)，說明脫色過程對活性基本無影響；而活性炭直接脫法制備的2號防霉防腐菌劑，不僅脫色不完全，而且抑菌效果顯著下降，表明脫色過程中的活性損失較大。[0028]圖3、圖4、圖5中，菌劑處理白色紙張的處理方式和環(huán)境條件是:白色紙張浸泡10分鐘，環(huán)境濕度為80%rh，放置20天。圖3中的白色紙張明顯長霉；圖4中的白色紙張未見明顯長霉但已開始發(fā)黑變暗；圖5未見異常，所以在紙張上沒有色斑出現(xiàn)，也完全沒有霉菌污染，效果極佳。[0029]圖6中，左邊圖是在環(huán)境濕度為80%rh，放置30天后的未采用防霉防腐菌劑處理的松木，從圖中明顯看出，由于未采用菌劑保護(hù)，所以在松木上有大量明顯的黑色霉菌斑點(diǎn)；右邊圖是采用本發(fā)明方法制備的防霉防腐菌劑浸泡3小時(shí)處理后，在環(huán)境濕度為80%rh，放置30天后的松木，由于防霉防腐菌劑的作用，完全防止霉菌生長，所以在松木上沒有色斑出現(xiàn)。[0030]實(shí)施例1(1)產(chǎn)酶溶桿菌C3種子液的制備1)LB液體培養(yǎng)基的配方為:以100克水的重量計(jì)，蛋白胨10克，酵母提取物5克，NaCl10克。[0031]2)制備將活化好的產(chǎn)酶溶桿菌C3接一環(huán)種子于裝有70mlLB液體培養(yǎng)基的500ml的錐形瓶，置于230r/min、28°C的搖床培養(yǎng)40h，制備成產(chǎn)酶溶桿菌C3種子液。[0032](2)高活性產(chǎn)酶溶桿菌C3防霉防腐菌劑的制備1)以10000克水的重量計(jì)，液體培養(yǎng)基的配方為:NaCl50克豆餅粉350克玉米粉200克CaCl210克2)制備將液體培養(yǎng)基裝入5L發(fā)酵罐內(nèi)，并接入產(chǎn)酶溶桿菌C3種子液。液體培養(yǎng)基裝料量為罐體積80%，產(chǎn)酶溶桿菌C3種子液的接種量為8%;攪拌，轉(zhuǎn)速為250r/min,通氣量為1:0.5(V/ν.π?η)，培養(yǎng)48h，獲得淺棕色的高活性產(chǎn)酶溶桿菌C3防霉防腐菌劑，如圖1中1所示。[0033](3)高活性產(chǎn)酶溶桿菌C3菌劑脫色菌劑的制備1)改性活性炭的預(yù)制備為了提高活性炭對色素選擇性吸附能力，而不吸附菌劑中的活性組分，采用醋酸對粉狀或粒狀活性炭進(jìn)行改性處理。[0034]改性反應(yīng)體系:lmol/L醋酸5克粉狀或粒狀活性炭80克；改性反應(yīng)時(shí)間15min，反應(yīng)溫度70°C，改性后活性炭用水洗除去多余的醋酸直至出洗出水為中性為止得到改性活性炭。[0035]2)將步驟(2)制備得到的淺棕色的高活性產(chǎn)酶溶桿菌C3防霉防腐菌劑于80°C加熱6min進(jìn)行熱處理，經(jīng)熱處理后沉淀了部分色素和雜蛋白，而保留防霉防腐生物活性不損失。[0036](3)無色生物防霉防腐菌劑的制備取24克預(yù)制備的改性活性炭加入熱處理后的800ml淺棕色的高活性產(chǎn)酶溶桿菌C3防霉防腐菌劑中進(jìn)行脫色反應(yīng)；脫色反應(yīng)溫度25°C，攪拌，轉(zhuǎn)速120r/min，脫色反應(yīng)時(shí)間3h。此過程菌劑逐漸由淺棕色的轉(zhuǎn)化到無色透明化，即得到本發(fā)明所述的天然的無色生物防霉防腐菌劑。經(jīng)測定，本發(fā)明制備得到的天然的無色生物防霉防腐菌劑活性得率達(dá)到94.7%以上。[0037](4)脫色防霉防腐菌劑應(yīng)用分別將采用活性炭直接脫色的菌劑和本發(fā)明制備的無色菌劑稀釋20倍，浸泡處理普通紙張，均具有良好的防止霉變效果，但直接脫色菌劑防霉同時(shí)在紙張上殘留下黃色污潰，如附圖4所示。而本發(fā)明制備的脫色菌劑在防霉腐基礎(chǔ)上，仍保持紙張?jiān)衅焚|(zhì)，效果極佳，如附圖5所示。[0038]實(shí)施例2(1)產(chǎn)酶溶桿菌C3種子液的制備1)LB液體培養(yǎng)基的配方為:以100克水的重量計(jì)，蛋白胨10克，酵母提取物5克，NaCl10克。[0039]2)制備將活化好的產(chǎn)酶溶桿菌C3接一環(huán)種子于裝有70mlLB液體培養(yǎng)基的500ml的錐形瓶，置于230r/min、30°C的搖床培養(yǎng)30h，制備成產(chǎn)酶溶桿菌C3種子液。[0040](2)高活性產(chǎn)酶溶桿菌C3防霉防腐菌劑的制備1)以10000克水的重量計(jì)，液體培養(yǎng)基的配方為:NaCl50克豆餅粉150克玉米粉500克CaCl210克2)制備將液體培養(yǎng)基裝入5L發(fā)酵罐內(nèi)，并接入產(chǎn)酶溶桿菌C3種子液。液體培養(yǎng)基裝料量為罐體積70%，產(chǎn)酶溶桿菌C3種子液的接種量為5%;攪拌，轉(zhuǎn)速為350r/min，通氣量為1:0.3(V/V.min)，培養(yǎng)32h，獲得淺棕色的高活性產(chǎn)酶溶桿菌C3防霉防腐菌劑。[0041](3)高活性產(chǎn)酶溶桿菌C3菌劑脫色菌劑的制備1)改性活性炭的預(yù)制備為了提高活性炭對色素選擇性吸附能力，而不吸附菌劑中的活性組分，采用醋酸對粉狀或粒狀活性炭進(jìn)行改性處理。[0042]改性反應(yīng)體系:lmol/L醋酸15克粉狀或粒狀活性炭85克；改性反應(yīng)時(shí)間30min，反應(yīng)溫度50°C，改性后活性炭用水洗除去多余的醋酸直至出洗出水為中性為止得到改性活性炭。[0043]2)將步驟(2)制備得到的淺棕色的高活性產(chǎn)酶溶桿菌C3防霉防腐菌劑于100°C加熱3min進(jìn)行熱處理，經(jīng)熱處理后沉淀了部分色素和雜蛋白，而保留防霉防腐生物活性不損失。[0044](3)無色生物防霉防腐菌劑的制備取20克預(yù)制備的改性活性炭加入熱處理后的800ml淺棕色的高活性產(chǎn)酶溶桿菌C3防霉防腐菌劑中進(jìn)行脫色反應(yīng)；脫色反應(yīng)溫度15°C，攪拌，轉(zhuǎn)速150r/min，脫色反應(yīng)時(shí)間3min。此過程菌劑逐漸由淺棕色的轉(zhuǎn)化到無色透明化，即得到本發(fā)明所述的天然的無色生物防霉防腐菌劑。經(jīng)測定，本發(fā)明制備得到的天然的無色生物防霉防腐菌劑活性得率達(dá)到96.3%。[0045]實(shí)施例3(1)產(chǎn)酶溶桿菌C3種子液的制備1)LB液體培養(yǎng)基的配方為:以100份水的重量計(jì)，蛋白胨10份，酵母提取物5份，NaCl10份。[0046]2)制備將活化好的產(chǎn)酶溶桿菌C3接一環(huán)種子于裝有70mlLB液體培養(yǎng)基的500ml的錐形瓶，置于200r/min、26°C的搖床培養(yǎng)38h，制備成產(chǎn)酶溶桿菌C3種子液。[0047](2)高活性產(chǎn)酶溶桿菌C3防霉防腐菌劑的制備1)以100份水的重量計(jì)，液體培養(yǎng)基的配方為:NaCl100克豆餅粉150克玉米粉300克CaCl25克；2)制備將液體培養(yǎng)基裝入發(fā)酵罐內(nèi)，并接入產(chǎn)酶溶桿菌C3種子液。液體培養(yǎng)基裝料量為罐體積75%，產(chǎn)酶溶桿菌C3種子液的接種量為10%;攪拌，轉(zhuǎn)速為200r/min,通氣量為1:0.4(V/V.min)，培養(yǎng)52h，獲得高活性產(chǎn)酶溶桿菌C3淺棕色防霉防腐菌劑。[0048](3)高活性產(chǎn)酶溶桿菌C3菌劑脫色菌劑的制備1)將發(fā)酵制備的高活性產(chǎn)酶溶桿菌C3防霉防腐菌劑于65°C加熱lOmin，沉淀部分色素和雜蛋白，而保留防霉防腐生物活性不損失。[0049]2)色素吸附劑活性炭改性為了提高活性炭對色素選擇性吸附能力，而不吸附菌劑中的活性組分，采用醋酸對粉狀或粒狀活性炭進(jìn)行改性處理。[0050]改性反應(yīng)體系:lmol/L醋酸10份粉狀或粒狀活性炭90份改性反應(yīng)時(shí)間lOmin，反應(yīng)溫度60°C。改性后活性炭用水洗除去多余的醋酸直至出水中性為止。[0051]3)吸附脫色和無色菌劑制備利用改性活性炭選擇性吸附色素，制備高活性無色防霉防腐產(chǎn)酶溶桿菌C3菌劑，脫色反應(yīng)過程為:將1.5%改性粒狀活性炭加入熱處理后的菌劑中，脫色溫度30°C，攪拌，轉(zhuǎn)速90r/min，脫色時(shí)間lh，脫色達(dá)到無色透明化，活性得率達(dá)到96.6%以上。[0052](4)脫色菌劑應(yīng)用將脫色菌劑稀釋10倍，加入含葡萄糖的普通百合插花液中，可延長百合花期100%，并且色澤更為艷麗，且完全防霉防腐?！緳?quán)利要求】1.一種天然的無色生物防霉防腐菌劑的制備方法，利用產(chǎn)酶溶桿菌C3制備出種子液，并接入液體培養(yǎng)基中發(fā)酵制備生物防霉防腐菌劑，其特征在于:(1)產(chǎn)酶溶桿菌C3種子液的制備將活化好的產(chǎn)酶溶桿菌C3接一環(huán)種子于裝有70mlLB液體培養(yǎng)基的500ml的錐形瓶，置于230r/min、26?30°C的搖床培養(yǎng)30?48h，制備成產(chǎn)酶溶桿菌C3種子液；(2)高活性產(chǎn)酶溶桿菌C3防霉防腐菌劑的制備將液體培養(yǎng)基裝入發(fā)酵罐內(nèi)，并接入產(chǎn)酶溶桿菌C3種子液；液體培養(yǎng)基裝料量為罐體積70%?80%，產(chǎn)酶溶桿菌C3種子液的接種量為液體培養(yǎng)基裝料量的5?10%;攪拌，轉(zhuǎn)速為200?350r/min,通氣量為1:0.3?0.5V/V.min,培養(yǎng)38?52h，獲得淺棕色的高活性產(chǎn)酶溶桿菌C3防霉防腐菌劑；(3)高活性產(chǎn)酶溶桿菌C3無色生物防霉防腐菌劑的制備①將步驟(2)制備得到的淺棕色的高活性產(chǎn)酶溶桿菌C3防霉防腐菌劑于60?100°C之間加熱2?lOmin進(jìn)行熱處理；②無色生物防霉防腐菌劑的制備將改性活性炭加入熱處理后的淺棕色的高活性產(chǎn)酶溶桿菌C3防霉防腐菌劑中進(jìn)行脫色反應(yīng)，改性活性炭的加入量是淺棕色的高活性產(chǎn)酶溶桿菌C3防霉防腐菌劑重量的0.5?3.0%，即得到天然的無色生物防霉防腐菌劑。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種天然的無色生物防霉防腐菌劑的制備方法，其特征在于所述的LB液體培養(yǎng)基的配方為:以100份水的重量計(jì)，蛋白胨10份，酵母提取物5份，NaCl10份。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種天然的無色生物防霉防腐菌劑的制備方法，其特征在于所述的液體培養(yǎng)基，以100份水的重量計(jì)，其配方為:NaCl0.5?1份豆餅粉1.5?3.5份玉米粉1?5份CaCl20.05?0.1份。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種天然的無色生物防霉防腐菌劑的制備方法，其特征在于所述的改性活性炭，是采用醋酸對粉狀或粒狀活性炭進(jìn)行改性處理，改性反應(yīng)體系:lmol/L的醋酸5?20重量份，粉狀或粒狀活性炭95?80重量份。5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種天然的無色生物防霉防腐菌劑的制備方法，其特征在于所述的改性活性炭，改性反應(yīng)時(shí)間10?30min，反應(yīng)溫度50?70°C，改性后活性炭用水洗除去多余的醋酸直至出洗出水為中性。6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種天然的無色生物防霉防腐菌劑的制備方法，其特征在于所述的脫色反應(yīng)，反應(yīng)溫度15?30°C，攪拌，轉(zhuǎn)速90?150r/min，脫色反應(yīng)時(shí)間30min?3h?！疚臋n編號】A01N63/02GK104388351SQ201410679544【公開日】2015年3月4日申請日期:2014年11月24日優(yōu)先權(quán)日:2014年11月24日【發(fā)明者】王明茲,鄒錦群,陳必鏈,吳欽緣,沈月毛,杜良成申請人:福建師范大學(xué)