一株淡紫擬青霉菌及其應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種具有促進(jìn)番茄等作物生長功能的淡紫擬青霉菌及其菌劑的制備方法和應(yīng)用。本發(fā)明的菌株淡紫擬青霉菌Paecilomyces?lilacinus(Thom)Samson?CGMCC?No.7994。對番茄等的促生長作用：麥麩與水按1：1比例混合均勻，取適量菌株淡紫擬青霉菌Paecilomyces?lilacinus?CGMCC?No.7994擴(kuò)大培養(yǎng)后，制備麩皮菌劑。取長勢一致的番茄苗，對其根部周圍撒播菌劑處理。本發(fā)明的菌株為淡紫擬青霉菌，能夠顯著促進(jìn)番茄，煙草等的生長，且效果穩(wěn)定，具有很好的推廣應(yīng)用前景。
【專利說明】一株淡紫擬青霉菌及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于生物技術(shù)防治領(lǐng)域，具體涉及一株淡紫擬青霉菌(Paecilomyceslilacinus (Thom) Samson CGMCC N0.7994)及其菌劑的制備方法及其在防治植物蟲害中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]多年實踐證明:淡紫擬青霉對多種線蟲都有防治效能，其寄主有根結(jié)線蟲、胞囊線蟲、金色線蟲、異皮線蟲，是防治根結(jié)線蟲最有前途的生防制劑。由于該菌可適應(yīng)不同的氣候條件，對線蟲卵具有較高的寄生率，可以有效控制土壤線蟲數(shù)量，明顯減少危害，已被廣泛用于生產(chǎn)實踐中。
[0003]在擬青霉的培養(yǎng)過程中，特別是在特殊培養(yǎng)基與深層發(fā)酵培養(yǎng)過程中，該菌能產(chǎn)生豐富的衍生物，其一是類似吲哚乙酸產(chǎn)物，它最顯著的生理功效是低濃度時促進(jìn)植物根系與植株的生長，因此在植物根系施菌不僅能明顯抑制線蟲侵染，而且能促進(jìn)植株營養(yǎng)器官的生長，同時對種子的萌發(fā)與生長也有促進(jìn)作用。但此類研究還很有限，有必要加強(qiáng)淡紫擬青霉對植物尤其是經(jīng)濟(jì)作物促生長作用的研究

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的在于提供了一株淡紫擬青霉的制備方法。
[0005]更進(jìn)一步的，本發(fā)明的目的在于提供了一株淡紫擬青霉的應(yīng)用。
[0006]為實現(xiàn)上述目的`，本發(fā)明的技術(shù)方案采用了一株淡紫擬青霉，Paecilomyceslilacinus，其保藏號為CGMCC N0.7994。菌株鑒別特征如下:
[0007]分子系統(tǒng)學(xué)鑒定:
[0008]DNA提取方法:采用石英砂研磨CTAB提取法(Scott et al.，2000)。
[0009]遺傳標(biāo)記:rDNAITS1-5.8S-1TS2，擴(kuò)增引物:ITS5, ITS4(White et al.，1990)。
[0010]PCR擴(kuò)增反應(yīng)條件:先94攝氏度加熱3分鐘使模板DNA變性，然后進(jìn)入下列溫度循環(huán):94攝氏度變性30秒，50攝氏度退火30秒，72攝氏度延伸45秒，共進(jìn)行35個循環(huán)，最后在72攝氏度延伸5分鐘(Wang，2012)。
[0011]PCR產(chǎn)物檢測和測序:PCR產(chǎn)物與 IOObp DNA ladder (MBI Fermentas)用 2.0%的瓊脂糖凝膠(agarose gel)在0.5 X TBE電泳緩沖液中于80V電壓下電泳20分鐘，然后置于
0.5 μ g/ml的溴乙淀(EB, ehidium bromide)溶液中染色15分鐘，在波長365和254nm的紫外光下檢測為明顯單一條帶的產(chǎn)物由擎科生物技術(shù)有限公司純化后用ABI3700 (AppliedBiosystems)進(jìn)行雙向直通測序。
[0012]數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計學(xué)分析:原始序列用生物軟件Bioedit7.0.9(Hall，1999)編輯后得到準(zhǔn)確無誤的序列，與GenBank下載的模式和權(quán)威菌株序列組成序列數(shù)據(jù)矩陣。對于序列矩陣，在Bioedit7.0.9下做必要的人工編輯和調(diào)整得到的新矩陣。將該矩陣用MEGA5.0 (Tamura et al., 2011)進(jìn)行鄰居連接法(neighbor-joining, NJ)分析，推斷出系統(tǒng)發(fā)育樹，并用自展法(bootstrap)進(jìn)行1000次重復(fù)評估各分支的可靠性。
[0013]菌株TRCC2300IrDNA ITS1-5.8S-1TS2 序列如下(見附圖1):
【權(quán)利要求】
1.一株淡紫擬青霉菌，Paecilomyces lilacinus (Thom) Samson,其保藏號為 CGMCCN0.7994。
2.淡紫擬青霉菌劑的制備方法，其特征在于:麥麩與水按質(zhì)量比1:1比例混合均勻，取適量置于500毫升三角瓶中，加蓋后在121攝氏度濕熱滅菌20分鐘，待麩皮培養(yǎng)基冷至室溫后，接入淡紫擬青霉菌孢子懸浮液，置于霉菌恒溫培養(yǎng)箱中，28攝氏度培養(yǎng)3天后菌絲布滿培養(yǎng)基，至第6天孢子基本長好后取出待用。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的淡紫擬青霉菌劑的制備方法，其特征在于:所述的培養(yǎng)基具體成分的組成為硝酸銨1.5克，磷酸氫二鈉I克，硫酸鎂(MgSO4.7H20)0.5克，氯化鉀0.5克，硫酸亞鐵0.01克，蔗糖30克，蒸餾水1000毫升。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3所述淡紫擬青霉菌在促進(jìn)番茄生長中的應(yīng)用。
【文檔編號】A01P21/00GK103773697SQ201310644028
【公開日】2014年5月7日 申請日期:2013年12月5日 優(yōu)先權(quán)日:2013年12月5日
【發(fā)明者】馬忠?guī)r, 梁小文, 王根豪, 陳曉燕, 周立峰, 李肖宇, 曾繁富 申請人:江西天人生態(tài)股份有限公司