一種蟹爪蘭的繁殖方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種蟹爪蘭的繁殖方法，包括如下步驟：（1）選取蟹爪蘭的莖節(jié)作為外植體并消毒；（2）將消毒后的外植體接種到芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，送入培養(yǎng)室進行芽誘導(dǎo)培養(yǎng)；（3）將分化后的外植體轉(zhuǎn)移到繼代培養(yǎng)基中進行繼代培養(yǎng)；（4）選取健壯的分化苗接種到生根培養(yǎng)基上進行生根培養(yǎng)；（5）煉苗并移栽，得到成品。本發(fā)明所述方法增殖系數(shù)始終保持在3.0以上，因此培育周期短，為實現(xiàn)通過雜交育種手段選育的蟹爪蘭新品種的快速擴繁，早日上市奠定了基礎(chǔ)。
【專利說明】一種蟹爪蘭的繁殖方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及組織培養(yǎng)【技術(shù)領(lǐng)域】，特別是涉及一種采用組織培養(yǎng)技術(shù)繁殖蟹爪蘭的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]蟹爪蘭(Zygocactus truncactus)又稱圣誕仙人掌、蟹爪蓮或仙指花,為仙人掌科蟹爪蘭屬多年生常綠小灌木肉質(zhì)植物，常生長在半陰、濕潤的環(huán)境中，具有扁平的變態(tài)莖，分枝極多，節(jié)間短、狀如蟹爪。蟹爪蘭花色艷麗，花期正值圣誕節(jié)至春節(jié)期間，深受人們喜愛。
[0003]蟹爪蘭的繁殖方式主要是扦插繁殖，嫁接繁殖，也可采用播種繁殖。扦插繁殖適用于規(guī)?；a(chǎn)中應(yīng)用；嫁接繁殖工序較多，適用于小批量生產(chǎn)，制作造型和大型盆栽以及引種繁殖和搶救品種；播種繁殖主要應(yīng)用于蟹爪蘭雜交育種中的新品種選育。以上方式可以滿足生產(chǎn)需求，但是對于蟹爪蘭雜交育種中選育出的優(yōu)良新品種，如果要進行大面積推廣，扦插繁殖的年繁殖系數(shù)4，如僅依靠傳統(tǒng)的繁殖使已選育出的新品種面市至少需要6-8年才可有一定規(guī)模，另外一個品種扦插繁殖多代還會出現(xiàn)退化的現(xiàn)象。因此研究蟹爪蘭快速繁殖的技術(shù)和方法，加速蟹爪蘭新品種的推廣，具有重要的理論和現(xiàn)實意義。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種簡便的快速大量繁殖蟹爪蘭的方法。
[0005]一種蟹爪蘭的繁殖方法，包括如下步驟:
[0006](I)選取蟹爪蘭的莖節(jié)作為外植體并消毒；
[0007](2)將消毒后的外植體接種到芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，送入培養(yǎng)室進行芽誘導(dǎo)培養(yǎng)；
[0008](3)將分化后的外植體轉(zhuǎn)移到繼代培養(yǎng)基中進行繼代培養(yǎng)；
[0009](4)選取健壯的分化苗接種到生根培養(yǎng)基上進行生根培養(yǎng)；
[0010](5)煉苗并移栽,得到成品。
[0011]本發(fā)明所述的蟹爪蘭的繁殖方法，其中所述外植體為蟹爪蘭的幼嫩莖節(jié)。
[0012]本發(fā)明所述的蟹爪蘭的繁殖方法，其中所述外植體的消毒方法為:將采集到的外植體先混合洗潔精在流水下沖洗30min，在超凈工作臺上用75%的酒精消毒10_30s，在用無菌水沖洗3-5遍,之后用0.1%升萊消毒IOmin。
[0013]本發(fā)明所述的蟹爪蘭的繁殖方法，其中所述芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+6-BA2.0mg.L_1+NAA0.1mg.L—1。
[0014]本發(fā)明所述的蟹爪蘭的繁殖方法，其中，接種時將整個消毒后的莖節(jié)直接接入芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，其基部先長出3-5條根，根與莖節(jié)連接處分化愈傷組織，從愈傷組織中分化出幼嫩莖節(jié)，當幼嫩莖節(jié)長至2-3個莖節(jié)時，進行繼代培養(yǎng)。
[0015]本發(fā)明所述的蟹爪蘭的繁殖方法，其中，接種時將整個消毒后的莖節(jié)直接接入芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，從所述莖節(jié)頂端長出幼嫩莖節(jié)，當長出2-3個所述幼嫩莖節(jié)時選用所述幼嫩莖節(jié)進行繼代培養(yǎng)。
[0016]本發(fā)明所述的蟹爪蘭的繁殖方法，其中，接種時將整個消毒后的莖節(jié)直接接入芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，其基部先長出3-5條根，根與莖節(jié)連接處分化愈傷組織，將所述愈傷組織轉(zhuǎn)移到成分一致的新的芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，分化出幼嫩莖節(jié)，當長出2-3個所述幼嫩莖節(jié)時進行繼代培養(yǎng)。
[0017]本發(fā)明所述的蟹爪蘭的繁殖方法，其中所述繼代培養(yǎng)基為MS+6-BA1.0mg.L_1+NAA0.1mg.L—1。
[0018]本發(fā)明所述的蟹爪蘭的繁殖方法，其中所述生根培養(yǎng)基為1/2MS+NAA0.1mg.L'
[0019]本發(fā)明所述的蟹爪蘭的繁殖方法，其中所述步驟(5)具體為:把生根后的組培苗在煉苗室中開蓋鍛煉3-5d，然后移栽到泥炭:珍珠巖3:1的基質(zhì)中，得到成品。
[0020]本發(fā)明所述的蟹爪蘭的繁殖方法，其中所述培養(yǎng)室的培養(yǎng)溫度為25°C，光照時間為 12h.cf1，光照強度約 25-30 μ mo I.π2.s_1 ；
[0021]所述芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基、增殖培養(yǎng)基和生根培養(yǎng)基中均添加3%質(zhì)量百分比的蔗糖和
0.8%質(zhì)量百分比的瓊脂，PH為5.8。
[0022]本發(fā)明蟹爪蘭的繁殖方法與現(xiàn)有技術(shù)不同之處在于:
[0023]本發(fā)明采用組織培養(yǎng)的方法，通過消毒外植體，得到無菌系，繼而利用不同種類和不同濃度的外源激素的配比，對組培苗進行繼代增殖、生長及生根進行篩選、調(diào)控、最后確定最佳外植體與培養(yǎng)基的配比，使其能應(yīng)用于工廠化生產(chǎn)。創(chuàng)新點在于本發(fā)明的組培配方是將自主選育的蟹爪蘭新品種進行大量擴繁的最佳組合，可以快速大量的繁殖組培苗，以適應(yīng)花卉市場的需要，尚屬國內(nèi)首例。
[0024]本發(fā)明對多個自主選育的蟹爪蘭新品種的成熟莖節(jié)、幼嫩莖節(jié)等外植體進行了系列組培快繁研究，取得了較好的結(jié)果，但以幼嫩莖節(jié)進行組培快繁效果最佳，且取幼嫩莖節(jié)不影響植株正常生長。本發(fā)明在消毒時間和效果、操作方法和再生效率、生產(chǎn)成本等方面都明顯優(yōu)于其他植物組培快繁，所以建立的規(guī)?；唐飞a(chǎn)體系穩(wěn)定、能夠滿足規(guī)?；旆鄙a(chǎn)。本發(fā)明主要應(yīng)用于蟹爪蘭新品種的快速擴繁，使其快速走向市場的一種有效途徑，改變國內(nèi)新品種推出較慢的現(xiàn)狀。
[0025]本發(fā)明所述蟹爪蘭莖節(jié)的繁殖方法，幼嫩莖節(jié)依次通過洗潔精、75%酒精和
0.1ffigCl2溶液浸泡獲得無菌莖節(jié)，滅菌效果較好，后續(xù)培養(yǎng)污染較少，而莖節(jié)死亡率較低，用芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基誘導(dǎo)培養(yǎng)形成愈傷組織，再分化形成小莖節(jié)，得到蟹爪蘭組培苗，將小莖節(jié)轉(zhuǎn)接到增殖培養(yǎng)基中，莖節(jié)頂端分生出幼嫩莖節(jié)，一個月可增殖一次；本發(fā)明所述方法消毒時可以單個莖節(jié)也可以是連著的兩個莖節(jié)，消毒后再切開，接種時是整個莖節(jié)接入，而不是傳統(tǒng)的將所述莖節(jié)切成較小的組織塊后接入，比傳統(tǒng)方法簡便且增殖效果更好，采用傳統(tǒng)方法達不到本發(fā)明所述的增殖效果；本發(fā)明所述方法增殖系數(shù)始終保持在3.0以上，因此培育周期短，為實現(xiàn)通過雜交育種手段選育的蟹爪蘭新品種的快速擴繁，早日上市奠定了基礎(chǔ)。
【專利附圖】

【附圖說明】[0026]圖1A為接入芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基的莖段形成的愈傷組織；
[0027]圖1B為愈傷組織中分化出的幼嫩莖節(jié)；[0028]圖1C為芽增殖培養(yǎng)后的外植體；
[0029]圖1D為完成增殖的外植體。
【具體實施方式】
[0030]實施例1
[0031]如圖1所示，一種蟹爪蘭的繁殖方法，采用組織培養(yǎng)技術(shù)，具體包括如下步驟:
[0032](I)切取蟹爪蘭幼嫩莖節(jié)作為組織培養(yǎng)外植體，將采集到的外植體先混合洗潔精在流水下沖洗30min，在超凈工作臺上用75%的酒精消毒10_30s，在用無菌水沖洗3_5遍，之后用0.1%升萊消毒lOmin。
[0033](2)將消毒后的外植體接種到芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，送入培養(yǎng)室進行無菌培養(yǎng)，培養(yǎng)室的培養(yǎng)溫度為25°C，光照時間為12h.cf1，光照強度約25-30 μ mo I.m_2.s-1 ；
[0034]在這一過程中，根據(jù)不同培養(yǎng)基上各外植體分化的情況的不同篩選出芽誘導(dǎo)得較好的外植體種類和培養(yǎng)基類型，效果最好的外植體為幼嫩莖段，芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+6-BA2.0mg-L^+NAA0.1mg -T10接種時將整個消毒后的莖節(jié)直接接入芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，莖芐基部分化需要2-3個月的時間，其基部先長出3-5條根，根與莖節(jié)連接處分化愈傷組織(見圖1A)，從愈傷組織中分化出幼嫩莖節(jié)(見圖1B)，當幼嫩莖節(jié)長至2-3個莖節(jié)時，進行繼代培養(yǎng)。
[0035](3)將分化后的外植體繼代到繼代增值培養(yǎng)基上進行繼代培養(yǎng)(有3個以上分化較好的莖節(jié))，增值 系數(shù)可達3.0以上(見圖1C和圖1D)，所述繼代培養(yǎng)基為MS+6-BA1.0mg.L_1+NAA0.1mg.L—1。
[0036](4)將生長健壯的分化苗接種到生根培養(yǎng)基上進行生根培養(yǎng)基上，進行生根培養(yǎng)，生根培養(yǎng)基為1/2MS+NAA0.1mg.L'
[0037](5)在生根培養(yǎng)后的分化苗中選擇生根較好的，在煉苗室中打開蓋鍛煉3-5d，然后移栽到泥炭:珍珠巖=3:1的基質(zhì)中，移栽成活率在95%左右,獲得商品苗。
[0038]所述芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基、繼代培養(yǎng)基和生根培養(yǎng)基中均添加3% (質(zhì)量百分比)的蔗糖和0.8% (質(zhì)量百分比)的瓊脂，PH為5.8。
[0039]所述培養(yǎng)室的培養(yǎng)溫度為25 °C，光照時間為12h.cf1，光照強度約25-30 μ mo I ^m2-S10
[0040]其中:
[0041 ] 1、MS培養(yǎng)基配方單如下:
[0042]工作液濃度單位mg/L
[0043]大量元素:NH4NO31650、KN031900、CaCl2.2Η20 440、MgSO4.7Η20 370,KH2PO4 170 ；
[0044]微量元素:ΚΙ0.83、H3BO3 6.2、MnSO4.4Η20 22.3、ZnS047H20 8.6、Na2MnO4.2H200.25、CuSO4.5H20 0.025、CoCl2.6H20 0.025。
[0045]鐵鹽:FeS047H2027.8、Na2-EDTA 2H20 37.3。
[0046]有機物質(zhì):肌醇100、煙酸0.5、鹽酸毗多醇0.5、煙酸硫胺素0.1、甘氨酸2.0。
[0047]2、NAA為萘乙酸
[0048]3、6_BA為6_芐基嘌呤
[0049]采用本發(fā)明所述方法對4個蟹爪蘭品種進行了增殖，試驗結(jié)果表明，品種I的增殖系數(shù)為3.3，品種2的增殖系數(shù)為3.0，品種3的增殖系數(shù)為3.5，品種4 (‘早妝’)的增殖系數(shù)為3.1，其中品種3莖節(jié)較小而致密，豐花型品種，在組培過程中發(fā)現(xiàn)其增值系數(shù)相對其他品種而言相對較高。
[0050]實施例2
[0051]步驟(2)中接種時將整個消毒后的莖節(jié)直接接入芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，培養(yǎng)2-3個月后從所述莖節(jié)頂端長出幼嫩莖節(jié)，當長出2-3個所述幼嫩莖節(jié)時選用所述幼嫩莖節(jié)進行繼代培養(yǎng)。
[0052]其他同實施例1。
[0053]實施例3
[0054]步驟(2)中接種時將整個消毒后的莖節(jié)直接接入芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，其基部先長出3-5條根，根與莖節(jié)連接處分化愈傷組織，將所述愈傷組織轉(zhuǎn)移到成分一致的新的芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，分化出幼嫩莖節(jié)，當長出2-3個所述幼嫩莖節(jié)時進行繼代培養(yǎng)。
[0055]其他同實施例1。
[0056]以上所述的實施例僅僅是對本發(fā)明的優(yōu)選實施方式進行描述，并非對本發(fā)明的范圍進行限定，在不脫離本發(fā)明設(shè)計精神的前提下，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員對本發(fā)明的技術(shù)方案作出的各種變形和改進，均應(yīng)落入`本發(fā)明權(quán)利要求書確定的保護范圍內(nèi)。
【權(quán)利要求】
1.一種蟹爪蘭的繁殖方法，其特征在于:包括如下步驟: (1)選取蟹爪蘭的莖節(jié)作為外植體并消毒； (2)將消毒后的外植體接種到芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，送入培養(yǎng)室進行芽誘導(dǎo)培養(yǎng)； (3)將分化后的外植體轉(zhuǎn)移到繼代培養(yǎng)基中進行繼代培養(yǎng)； (4)選取健壯的分化苗接種到生根培養(yǎng)基上進行生根培養(yǎng)； (5)煉苗并移栽，得到成品。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的蟹爪蘭的繁殖方法，其特征在于:所述外植體為蟹爪蘭的幼嫩莖節(jié)。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的蟹爪蘭的繁殖方法，其特征在于:所述外植體的消毒方法為:將采集到的外植體先混合洗潔精在流水下沖洗30min，在超凈工作臺上用75%的酒精消毒10-30s,在用無菌水沖洗3-5遍,之后用0.1%升萊消毒lOmin。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的蟹爪蘭的繁殖方法，其特征在于:所述芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+6-BA2.0mg.L_1+NAA0.1mg.L—1。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的蟹爪蘭的繁殖方法，其特征在于:接種時將整個消毒后的莖節(jié)直接接入芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，其基部先長出3-5條根，根與莖節(jié)連接處分化愈傷組織，從愈傷組織中分化出幼嫩莖節(jié)，當幼嫩莖節(jié)長至2-3個莖節(jié)時，進行繼代培養(yǎng)。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的蟹爪蘭的繁殖方法，其特征在于:接種時將整個消毒后的莖節(jié)直接接入芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，.從所述莖節(jié)頂端長出幼嫩莖節(jié)，當長出2-3個所述幼嫩莖節(jié)時選用所述幼嫩莖節(jié)進行繼代培養(yǎng)。
7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的蟹爪蘭的繁殖方法，其特征在于:接種時將整個消毒后的莖節(jié)直接接入芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，其基部先長出3-5條根，根與莖節(jié)連接處分化愈傷組織，將所述愈傷組織轉(zhuǎn)移到成分一致的新的芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，分化出幼嫩莖節(jié)，當長出2-3個所述幼嫩莖節(jié)時進行繼代培養(yǎng)。
8.根據(jù)權(quán)利要求5或6或7所述的蟹爪蘭的繁殖方法，其特征在于:所述繼代培養(yǎng)基為 MS+6-BA1.0mg.I^+NAA0.1mg.L'
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的蟹爪蘭的繁殖方法，其特征在于:所述生根培養(yǎng)基為1/2MS+NAA0.1mg.L—1。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的蟹爪蘭的繁殖方法，其特征在于: 所述步驟(5)具體為:把生根后的組培苗在煉苗室中開蓋鍛煉3-5d，然后移栽到泥炭:珍珠巖3:1的基質(zhì)中，得到成品； 所述培養(yǎng)室的培養(yǎng)溫度為25 V,光照時間為12h.cT1，光照強度約25-30 μ mo I.m 2.s 1 ； 所述芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基、增殖培養(yǎng)基和生根培養(yǎng)基中均添加3%質(zhì)量百分比的蔗糖和0.8%質(zhì)量百分比的瓊脂，PH為5.8。
【文檔編號】A01H4/00GK103461136SQ201310433660
【公開日】2013年12月25日 申請日期:2013年9月18日 優(yōu)先權(quán)日:2013年9月18日
【發(fā)明者】趙天榮, 蔡建崗 申請人:寧波市農(nóng)業(yè)科學研究院