具有生物防治作用的麻栗坡產(chǎn)氣霉的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了1株對多種植物病原微生物和人體病原微生物具有抑制作用的產(chǎn)氣霉屬真菌，它是麻粟坡產(chǎn)氣霉(Muscodor malipoensis)；它能用于植物病原微生物和人類生活環(huán)境病原微生物的生物防治，具有開發(fā)利用的價值。CGMCC No637120120717
【專利說明】具有生物防治作用的麻栗坡產(chǎn)氣霉

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于生物工程【技術(shù)領(lǐng)域】，具體地說是涉及1株產(chǎn)氣霉屬真菌：麻栗坡產(chǎn)氣 霉，它能夠抑制植物病原微生物和人體病原微生物，對于植物病原微生物和人類生活環(huán)境 病原微生物具有生物防治作用。
[0002] 發(fā)明背景
[0003] 內(nèi)生真菌（Endophytic fungi)是指那些在其生活史的部分或全部階段能在健康 植物組織內(nèi)部定植,且不會對宿主植物造成明顯傷害的一類真菌。宿主植物與內(nèi)生真菌在 長期的協(xié)同進化過程中形成了互惠互利的共生關(guān)系。植物可為內(nèi)生真菌提供生存空間、水 分和其他營養(yǎng)成分，保護其不受外界環(huán)境的影響而在植物體內(nèi)生存繁衍；另一方面，內(nèi)生 真菌也能夠產(chǎn)生一些促進植物生長發(fā)育、提高植物抗脅迫能力的次生代謝產(chǎn)物，包括激素、 酶、抗生素及其它殺蟲抑菌物質(zhì)。這些發(fā)現(xiàn)使得內(nèi)生真菌在生物活性物質(zhì)篩選的研究領(lǐng)域 中顯示出巨大的應(yīng)用潛力，逐漸成為國內(nèi)外研究的熱點之一。
[0004] 目前，對于農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中的植物病原菌、建筑材料的霉變和人類生存環(huán)境的病原菌 的防治，人們主要依靠人工合成的化學藥劑，但是，這些化學成分大多數(shù)具有致癌性，且不 易降解，對人類和動物及環(huán)境均具有很大的毒性。因此，這一類化學藥劑產(chǎn)品將會逐漸被限 制。在這種情況下，新型環(huán)保的生物殺菌劑的開發(fā)和利用顯得尤為迫切。
[0005] 產(chǎn)氣霉屬（Muscodor)真菌屬于子囊菌綱炭角菌目，該屬物種的顯著特征是能夠 產(chǎn)生一系列揮發(fā)性氣體化合物 [1]。經(jīng)實驗證明，這些揮發(fā)性物質(zhì)形成的混合氣體可以有效 地抑制植物病原菌及人類病原微生物。這一生物學特性使得產(chǎn)氣霉屬真菌在土傳病害等方 面具有很好的應(yīng)用前景。2002年，美國AgreQuest公司以白色產(chǎn)氣霉（Malbus)為基礎(chǔ)，首 家推出世界上第一種可以替代傳統(tǒng)劇毒土壤熏蒸劑溴代甲烷（已被禁用）的真菌熏蒸劑。 這種真菌熏蒸劑也可以有效地防治引發(fā)"病房綜合征"的病原霉菌和細菌。目前全世界已報 道8個產(chǎn)氣霉屬物種 [1_8]。本專利采用組織塊分離法，從蘭科植物中分離得到一株產(chǎn)氣霉屬 真菌，綜合形態(tài)鑒定、分子鑒定和化學分析的結(jié)果，這株真菌為產(chǎn)氣霉屬的新物種，命名為： 麻粟坡產(chǎn)氣霉（M.malipoensis X.M.Tan et S.X.Guo)。培養(yǎng)皿對峙實驗證明，該真菌產(chǎn)生 的氣體混合物對終極腐霉、金黃色葡萄球菌、新型隱球酵母等多種植物病原微生物和人體 病原微生物具有強烈的抑制和殺滅作用，顯示它們具有開發(fā)為殺菌劑的巨大潛力。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的為提供一株產(chǎn)氣霉屬（Muscodor)真菌：麻粟坡產(chǎn)氣霉；它可以應(yīng)用 于多種病原真菌和細菌的生物防治。
[0007] 本發(fā)明采取如下技術(shù)方案實現(xiàn)：
[0008] 麻粟坡產(chǎn)氣霉（M. malipoensisX. M. Tan et S. X. Guo)于 2012 年 7 月 17 日保藏于 中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號為：CGMCC No. 6371。保藏單位 地址：北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號，中國科學院微生物研究所。菌株的保藏和存活證 明見附件。
[0009] 麻栗坡產(chǎn)氣霉的培養(yǎng)特性如下：
[0010] PDA培養(yǎng)基上形成同心環(huán)狀白色菌落，菌落背面無色，生長緩慢，25°C暗培養(yǎng)2周 菌落直徑36-38_，邊緣不規(guī)則，產(chǎn)生特殊的氣味；菌落中央的菌絲致密，形成明顯的突起， 邊緣的菌絲較疏松；菌絲透明，具有橫膈膜，分支，壁薄，直徑1-4 μ m，纏結(jié)在一起形成"繩 索鏈"(rope-1 ike strands)及網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，有些菌絲形成菌絲圈結(jié)構(gòu)，菌絲圈直徑22-35 μ m， 有些菌絲中間膨大，形成"8"字形結(jié)構(gòu)；菌絲體不育，未見無性或有性孢子，及產(chǎn)孢結(jié)構(gòu)。 [0011] 麻栗坡產(chǎn)氣霉的核糖體脫氧核糖核酸內(nèi)轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)（ITS-rDNA)序列（6371-1)、 核糖核酸聚合酶II亞基（RPB2)序列（6371-2)、β-微管蛋白（β-tublin)序列（6371-3) 和核糖體脫氧核糖核酸大亞基（28S)序列￠371-4)如序列表所示。
[0012] ①麻栗坡產(chǎn)氣霉與產(chǎn)氣霉屬真菌M. yucatanens is (Genbank accession FJ917287)的ITS序列相似性為99%。以Agaricus bisporus為外類群，基于產(chǎn)氣霉屬和 炭角菌科其他相關(guān)屬真菌的ITS序列，用鄰接（Neighbor-Joining)法構(gòu)建系統(tǒng)進化發(fā)育樹 (NJ樹）。在這個樹形圖中，產(chǎn)氣霉屬真菌被分為5個分支，麻栗坡產(chǎn)氣霉、M. yucatanensis 和產(chǎn)氣霉屬菌株S18-3-l(Genbank accession EU636700)聚類在分支D中，支持強度82%。
[0013] ②麻栗坡產(chǎn)氣霉與產(chǎn)氣霉屬菌株ZLY-2009a(Genbank accession FJ480346)和 M25 (Genbank accession HM595623)的RPB2序列分別存在18和23個堿基的差異，相似性 均為98%。以Agaricus bisporus為外類群，基于產(chǎn)氣霉屬和炭角菌科其他相關(guān)屬真菌的 RPB2序列構(gòu)建NJ系統(tǒng)進化發(fā)育樹。在這個樹形圖中，產(chǎn)氣霉屬真菌被分為3個分支，麻栗 坡產(chǎn)氣霉與菌株ZLY-2009a和M25聚類在分支B中，支持強度100 %。
[0014] ③麻栗坡產(chǎn)氣霉與產(chǎn)氣霉屬菌株S18-3-1 (Genbank accession HM034846)和白 色產(chǎn)氣霉菌株B-23 (Genbank accession FJ480345)的β-tublin基因序列相似性分別為 89%和84%。以Sordaria fimicola為外類群，基于產(chǎn)氣霉屬和炭角菌科其他相關(guān)屬真菌 的β-tublin序列構(gòu)建NJ系統(tǒng)進化發(fā)育樹。在這個樹形圖中，產(chǎn)氣霉屬真菌被分為3個分 支，麻栗坡產(chǎn)氣霉、勐海產(chǎn)氣霉菌株CGMCC No. 6378和菌株S18-3-1聚類在分支A中，支持 強度79%。
[0015] ④麻栗坡產(chǎn)氣霉與白色產(chǎn)氣霉菌株9-6 (Genbank accession HM034865)的28S序 列存在2個堿基的差異，相似性99%。以Taphrina deformans和Taphrina sp.為外類群， 基于產(chǎn)氣霉屬和炭角菌科其他相關(guān)屬真菌的28S序列構(gòu)建NJ系統(tǒng)進化發(fā)育樹。在這個樹 形圖中，產(chǎn)氣霉屬真菌被分為3個分支，麻栗坡產(chǎn)氣霉、勐海產(chǎn)氣霉菌株CGMCC No. 6378和 白色產(chǎn)氣霉菌株9-6聚類在分支A中，支持強度99 %。
[0016] 在形態(tài)學上，麻栗坡產(chǎn)氣霉部分菌絲中間膨大形成具有"8"字形結(jié)構(gòu)的菌絲 細胞，已報道的產(chǎn)氣霉屬其他物種均不具有這一特點。分析麻栗坡產(chǎn)氣霉釋放的揮 發(fā)性氣體的化學成分，其中能檢測到多種萘衍生物、Verrucarol和Benzoic acid, 2， 5_bis (trimethylsiloxy) _，trimethylsilylester 等。M. yucatanensis 釋放的揮發(fā)性氣體 中不能檢測到萘及其衍生物[4]。
[0017] 綜合形態(tài)鑒定、分子鑒定和化學分析的結(jié)果，麻栗坡產(chǎn)氣霉是產(chǎn)氣霉屬的一個新 物種，命名為 Mmalipoensis X. M.Tan et S.X. Guo，模式菌株為 CGMCC No. 6371。
[0018] 麻栗坡產(chǎn)氣霉產(chǎn)生的揮發(fā)性氣體是有效的混合殺菌劑，能抑制或殺滅多種病 原細菌和真菌，如：金黃色葡萄球菌Staphyloccocus aureus、枯草芽孢桿菌Bacillus subtilis、新型隱球酵母 Cryptococcus neoformans、煙曲霉 Aspergillus fumigatu、終極 腐霉Pythium ultimum、灰葡萄孢Botrytis cinerea、腐皮鐮孢Fusarium solani、銹腐柱孢 Cylindrocarpon distructans。它能用于對植物病原微生物和人類生活環(huán)境病原微生物的 生物防治。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0019] 圖1 :基于ITS-rDNA序列構(gòu)建的NJ(Neighbor-Joining)系統(tǒng)發(fā)育進化樹，顯示麻 栗坡產(chǎn)氣霉與同屬真菌及炭角菌目其他類群的親緣關(guān)系。
[0020] 圖2 :基于RPB2基因序列構(gòu)建的NJ系統(tǒng)發(fā)育進化樹，顯示麻栗坡產(chǎn)氣霉與同屬真 菌及炭角菌目其他類群的親緣關(guān)系。
[0021] 圖3 :基于β-微管蛋白（β-tublin)基因序列構(gòu)建的NJ系統(tǒng)發(fā)育進化樹，顯示 麻栗坡產(chǎn)氣霉與同屬真菌及炭角菌目其他類群的親緣關(guān)系。
[0022] 圖4 :基于28S基因序列構(gòu)建的NJ系統(tǒng)發(fā)育進化樹，顯示麻栗坡產(chǎn)氣霉與同屬真 菌及炭角菌目其他類群的親緣關(guān)系。

【具體實施方式】
[0023] 實施例1.麻栗坡產(chǎn)氣霉的形態(tài)學鑒定
[0024] 在PDA培養(yǎng)基上，菌株CGMCC No. 6371形成同心環(huán)狀白色菌落，菌落背面無色， 生長緩慢，25°C暗培養(yǎng)2周菌落直徑36-38mm，邊緣不規(guī)則，產(chǎn)生特殊的氣味；菌落中央的 菌絲致密，形成明顯的突起，邊緣的菌絲較疏松；菌絲透明，具有橫膈膜，分支，壁薄，直徑 1-4 μ m，纏結(jié)在一起形成"繩索鏈"(rope_like strands)及網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，有些菌絲形成菌絲圈 結(jié)構(gòu)，菌絲圈直徑22-35 μ m，部分菌絲細胞中間膨大形成具有"8"字形結(jié)構(gòu)的菌絲細胞；菌 絲體不育，未見無性或有性孢子，及產(chǎn)孢結(jié)構(gòu)。
[0025] 菌株CGMCC No. 6371部分菌絲中間膨大形成具有"8"字形結(jié)構(gòu)的菌絲細胞，已報 道的產(chǎn)氣霉屬其他物種均不具有這一特點[1_ 8]。
[0026] 實施例2.麻栗坡產(chǎn)氣霉的分子生物學鑒定
[0027] 將真菌接種到PDA培養(yǎng)基上，在暗室內(nèi)25°C培養(yǎng)2周后提取DNA。DNA提取方法 參照真菌DNA提取試劑盒的使用指南進行（E.Z.N. ATM Fungal DNA Kit, Omega Bio-Tek, Doraville, Georgia, USA) 〇
[0028] 核糖體脫氧核糖核酸內(nèi)轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)（ITS-rDNA)的擴增采用真菌通用引物 ITS1(5 ' -TCCGTAGGTGAACCTGCGG-3 ')和 ITS4(5 ' -TCCTCCGCTTATTGATATGC-3 ')。 50 μ LPCR 擴增反應(yīng)體系：Mix25 μ L，引物各 2 μ L (5 μ M)，模板 2-10 μ L，CldH2O 補足 50 μ L。 PCR擴增反應(yīng)條件：94°C預(yù)變性3min，94°C變性30s，55°C退火25s，72°C延伸30s，共35個 循環(huán)后，72°C再延伸7min，暫時4°C保存；如保存時間在2天以上，-20°C保存。PCR擴增產(chǎn) 物經(jīng)0.8 %瓊脂糖凝膠電泳檢測，在紫外燈下觀察，有條帶的PCR產(chǎn)物進行測序。測序所用 引物與擴增反應(yīng)的相同。
[0029] 核糖核酸聚合酶II亞基（RPB2)的擴增采用引物RPB2-5f(5' -GAYGAYMGWGATCAY TTYGG-3')和 RPB2-7cr(5' -CCCATRGCTTGYTTRCCCAT-3'）。5(^1^?0?擴增反應(yīng)體系： Mix25 μ L，引物各 2 μ L(5 μ M)，模板 2-10 μ L，CldH2O 補足 50 μ L。PCR 擴增反應(yīng)條件：95°C 預(yù)變性5min，95°C變性60s，55°C退火120s，72°C延伸I. 5min，共35個循環(huán)后，72°C再延伸 lOmin，暫時4°C保存；如保存時間在2天以上，-20°C保存。PCR擴增產(chǎn)物經(jīng)0. 8%瓊脂糖凝 膠電泳檢測，在紫外燈下觀察，有條帶的PCR產(chǎn)物進行測序。測序所用引物與擴增反應(yīng)的相 同。
[0030] β -微管蛋白（β -tublin)的擴增采用 bena-Tl (5，-MCATGCGTGAGATTG TMGT-3，）和be na-T22 W -TCTGGATGTTCTTGGGMTaKV )。50 μ L· PCR擴增反應(yīng)體系:Mix25 μ L，引物各 2 μ L· (5 μ Μ)， 模板2-10 μ L，CldH2O補足50 μ L。PCR擴增反應(yīng)條件：94?預(yù)變性3min，94?變性30s，53?退火50s， 72°C延伸I. 5min，共35個循環(huán)后，72°C再延伸lOmin，暫時4°C保存；如保存時間在2天以上，-20°C 保存。PCR擴增產(chǎn)物經(jīng)0. 8%瓊脂糖凝膠電泳檢測，在紫外燈下觀察，有條帶的PCR產(chǎn)物進行測序。 測序所用弓丨物與擴增反應(yīng)的相同。
[0031] 核糖體脫氧核糖核酸大亞基（28S)的擴增采用引物LR7(5' -TACTACCACCMGAim ) 和 LROR (5' -ACC0GCTGMCTTMGC-3' )。50 μ LPCR 擴增反應(yīng)體系:Mix25 μ L，引物各 2 μ L (5 μ Μ)，模 板2-10 μ L，CldH2O補足50 μ L。PCR擴增反應(yīng)條件：95°C預(yù)變性3min，95°C變性45s，53°C退火45s， 72°C延伸30s，共30個循環(huán)后，72°C再延伸7min，暫時4°C保存；如保存時間在2天以上，-20°C保 存。PCR擴增產(chǎn)物經(jīng)0. 8%瓊脂糖凝膠電泳檢測，在紫外燈下觀察，有條帶的PCR產(chǎn)物進行測序。 測序所用引物與擴增反應(yīng)的相同。
[0032] 菌株 CGMCC No. 6371 的 ITS-rDNA、RPB2、β -tublin 和 28S 基因序列見序列表，序 列編號分別為 6371-1，6371-2,6371-3 和 6371-4。
[0033] BLASTn搜索結(jié)果表明，菌株CGMCC No. 6371與M. yucatanensis的ITS序列相似性 為99% ;與產(chǎn)氣霉屬菌株ZLY-2009a和M25的RPB2序列分別存在18和23個堿基的差異， 相似性均為98% ;與產(chǎn)氣霉屬菌株S18-3-1和白色產(chǎn)氣霉菌株B-23的β -tublin序列相 似性分別為89%和84% ;與白色產(chǎn)氣霉菌株9-6的28S序列存在2個堿基的差異，相似性 99%。
[0034] 以Agaricus bisporus為外類群，基于產(chǎn)氣霉屬和炭角菌科其他相關(guān)屬真菌的 ITS序列構(gòu)建的NJ系統(tǒng)進化發(fā)育樹狀圖（圖1)中，菌株CGMCC No. 6371與M. yucatanensis 和菌株318-3-1聚類在支持強度為82%的分支0中。
[0035] 以Agaricus bisporus為外類群，基于產(chǎn)氣霉屬和炭角菌科其他相關(guān)屬真菌的 RPB2序列構(gòu)建的NJ系統(tǒng)進化發(fā)育樹狀圖（圖2)中，菌株CGMCC No. 6371與菌株ZLY-2009a 和M25聚類在支持強度為100 %的分支B中。
[0036] 以Sordaria fimicola為外類群，基于產(chǎn)氣霉屬和炭角菌科其他相關(guān)屬真菌的 β -tublin序列構(gòu)建的NJ系統(tǒng)進化發(fā)育樹狀圖（圖3)中，菌株CGMCC No. 6371與勐海產(chǎn)氣 霉菌株CGMCCNo. 6378和菌株S18-3-1聚類在支持強度為79 %的分支A中。
[0037] 以Taphrina deformans和Taphrina sp.為外類群，基于產(chǎn)氣霉屬和炭角菌科其 他相關(guān)屬真菌的28S序列構(gòu)建的NJ系統(tǒng)進化發(fā)育樹（圖4)中，菌株CGMCC No. 6371與勐 海產(chǎn)氣霉菌株CGMCC No. 6378和白色產(chǎn)氣霉菌株9-6聚類在支持強度為99%的分支A中。
[0038] 綜合多基因序列片段的比對和構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹狀圖的結(jié)果，菌株CGMCC No. 6371①與M. yucatanensis的ITS序列同源性較高，但在形態(tài)上，M. yucatanensis的菌 絲多形成串珠狀膨大的菌絲細胞；②與勐海產(chǎn)氣霉菌株CGMCC No. 6378的β -tublin序列 同源性較高，但在形態(tài)上，勐海產(chǎn)氣霉部分菌絲膨大形成不規(guī)則塊狀的菌絲細胞；③與白色 產(chǎn)氣霉菌株9-6的28S序列也有較高的同源性，但在形態(tài)上，白色產(chǎn)氣霉不具有菌絲膨大的 特點。因此，菌株CGMCCNo. 6371是產(chǎn)氣霉屬的一個新物種，命名為麻栗坡產(chǎn)氣霉（Muscodor malipoensis X. M. Tan etS. X. Guo) 〇 [0039] 實施例3.麻栗坡產(chǎn)氣霉的抑菌譜測試及分析
[0040] 供試菌為麻栗坡產(chǎn)氣霉。指示菌包括：①3種人體病原細菌：大腸桿菌 (Escherichia col i)、金黃色葡萄球菌（Staphyloccocus aureus)、枯草芽抱桿菌 (Bacillus subtilis);②2種人體病原酵母菌：白色念珠菌（Canidia albicans)、新 型隱球酵母（Cryptococcus neoformans);③6種植物病原真菌：煙曲霉（Aspergillus fumigatu)、終極腐霉（Pythium ultimum)、灰葡萄抱（Botrytis cinerea)、立枯絲核菌 (Rhizoctonia solani)、腐皮鎌抱菌（Fusarium solani)、誘腐柱抱（Cylindrocarpon distructans)〇
[0041] 將新鮮的PDA倒入一次性分隔塑料培養(yǎng)皿（two-section Petri dish)中，在其中 一側(cè)接入一塊直徑為5mm的供試菌菌塊，25°C暗培養(yǎng)7天后，在分隔塑料培養(yǎng)皿的另一側(cè)接 種指示菌。指示菌的類型不同，接種方法會有差別。對細菌和酵母菌，采用劃線接種的方法； 對其它指示菌，接種相同直徑大小的菌塊。每個處理重復(fù)3皿，以不加供試菌菌塊的處理為 空白對照。25°C暗培養(yǎng)3天后觀察并記錄實驗結(jié)果。細菌和酵母菌的抗菌活性通過與空白 對照比較得出的百分比進行估算；對其它指示菌，用游標卡尺測量供試菌處理組和空白對 照組中指示菌的菌落直徑。測量完成后，將指示菌菌塊轉(zhuǎn)接到新的PDA培養(yǎng)基上，觀察指示 菌的存活能力 [1'3]。研究結(jié)果見表1。
[0042] 表1麻栗坡產(chǎn)氣霉產(chǎn)生的揮發(fā)性氣體對指示菌生長的影響
[0043]

【權(quán)利要求】
1. 能夠抑制植物病原微生物和人體病原微生物的一株真菌，它是保藏編號為CGMCC 1'1〇.6371 的麻粟坡產(chǎn)氣霉（1\1118(30(1〇1'1]^11。0611818乂.]\113116七3.乂.6110);它能夠用于對植 物病原微生物和人類生活環(huán)境病原微生物的生物防治。
2. 權(quán)利要求1所述的一株真菌，其形態(tài)特征為： PDA培養(yǎng)基上形成同心環(huán)狀白色菌落，菌落背面無色，生長緩慢，25°C暗培養(yǎng)2周菌落 直徑36-38mm，邊緣不規(guī)則，產(chǎn)生特殊的氣味；菌落中央的菌絲致密，形成明顯的突起，邊 緣的菌絲較疏松；菌絲透明，具有橫膈膜，分支，壁薄，直徑1-4 y m，纏結(jié)在一起形成"繩索 鏈"(rope-like strands)及網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，有些菌絲形成菌絲圈結(jié)構(gòu)，菌絲圈直徑22-35 y m，部 分菌絲中間膨大形成"8"字形結(jié)構(gòu)的菌絲細胞；菌絲體不育，未見無性或有性孢子，及產(chǎn)孢 結(jié)構(gòu)。
3. 權(quán)利要求1所述的一株真菌，其核糖體脫氧核糖核酸內(nèi)轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)（ITS-rDNA)、核 糖核酸聚合酶II亞基（RPB2)、￠-微管蛋白（P-tublin)和核糖體脫氧核糖核酸大亞基 (28S)的序列分別為： (1) ITS-rDNA 序列 GAGGAAGTAAAAGTCGTAACAAGGTCTCCGTTGGTGAACCAGCGGAGGGATCATTACAGA 60 GTTTTCTAAACTCCCAACCCTATGTGAACTTACCTTTGTTGCTTCGGCGGCGGAGGCTAC 120 CCTGCGGGGGATTACCACCTAGTGGTTACCCTGCAGTCTCAGGTACATCTGTTACCCGGT 180 AGTCATCCCCGCCGGCGGCCAACTAAACTCTGTTTTCTTTGGAATTCTGAATCATAAACT 240 TAATAAGTTAAAACTTTCAACAACGGATCTCTTGGTTCTGGCATCGATGAAGAACGCAGC 300 GAAATGCGATAAGTAATGTGAATTGCAGAATTCAGTGAATCATCGAATCTTTGAACGCAC 360 ATTGCGCCCATTAGCATTCTAGTGGGCATGCCTGTTCGAGCGTCATTTCACCACTTAAGC 420 CCTGTTGCTTAGCGTTGGAAGCCTACGGCATAGCCCGTAGCTCCTTAAAGTGATTGGCGG 480 AGTTGGTTCTCACTCTAAGCGTAGTAACTATATCTCGCTTCTGTAGTAGTTCCGGCCCCT 540 GCCGTAAAACCCCTTATACAAAGGTTGACCTCGGATCAGGTAGGAATACCCGC ； (2) RPB2 序列 TCTACTGGCCAAGCTCTTCCGCAACATTGTCCGACGCATGACGCAAGAAGTCCTGTCTCA 60 CTTGAAGCGAAGCATCGAACAGGGCAAGCAGTTCAACATCGCCCTGGCCGTTAAGTCTAA 120 CATCATTACCGCCGGGCTCAAGTACTCCCTCGCCACCGGCAACTGGGGCGACCAGAAGAA 180 AGCCATGTCCTCGACCGCAGGTGTCTCCCAGGTGCTGAACAGATACACTTTTGCGTCCAC 240 ACTCTCGCATCTGCGGAGAACCAACACTCCGGTCGGCCGAGATGGCAAGCTTGCGAAGCC 300 CCGCCAGCTTCACAACACACACTGGGGCCTGGTCTGTCCCGCTGAGACGCCCGAGGGCCA 360 GGCCTGTGGTCTGGTCAAGAACTTGTCTCTCATGTGCTCCGTCAGTGTCGGTACTTCGAC 420 AGAGCCCATCATCGAGTACATGGCCTCGCGAAACATGGAGATTCTGGAAGAATACGAGCC 480 CCAGCGCTATCCTAACGCCACCAAGATCTTCCTCAACGGCTCATGGATCGGTGTACATCA 540 CGACCCCAAGTCTCTGGTGAGAGATGTCCAGCAGCTGCGCCGAAGCAATCAGATCCCTGC 600 AGAGGTATCTTTGGTTCGTGACATTCGTGATCGTGAGTTCAAGATCTTTTCGGATGCGGG 660 CCGAGTCATGCGCCCCCTGTACGTTGTGGAACAAGAGGATACGGGAACTGCCGTCAAGGG 720 ACAACTGGCCCTGACCAGAGAGATGATCAAAGAACTCAAAGATGACGGAGAGCCTGAAAA 780 GGTATTAAAGAGAGGATACTACTACGGCTGGCAGGGCTTGGTCCACGCCGGTGCGATCGA 840 GTATTTAGACGCCGAGGAAGAAGAGACGGCCATGATTTGCATGACGCCCGAAGACCTTGA 900 AAACTACCGAC ； (3) @ -tublin 序列 GCGCCTCGCCCGTGACCCTCTGTTTACTTCGCCGCTGAGCCCAACCAAACCACACATTGA 60 GTTTGCCTGTCTCTGAACGCGTTTGGGTCCAATCATCCTAGGTTCTGCGCCTCTCTACAT 120 CTATACTACAGTTATGATATCAGCAACTTGGGCAACTACTGCCAGATCATGGCCTACCTA 180 CCTGTTCAGAGGAAAATTGTCGACAAGAGAATCATGCTAACCCGTGTTCCTGCTTCTAGG 240 TTCATCTTCAGACCGGTCAGTGCGTAAGTCAACCCTCAATCTTCTCTCCGCGATCTGCCA 300 GTCATTTTGTTTAGATGTACTGACAAGGCTCTATAGGGTAACCAAATTGGTGCTGCTTTC 360 TGGTGTGTACCACCGACGCGAAACACGGCCTGCCGCATCGATATTGACTCTTGTACTACA 420 GGCAACAGATCTCCGGCGAGCATGGTCTCGACGGCAATGGCGTGTATGTTTCCATCGTAT 480 TTCTACCATTTCTGATGTCCATTGGCTGACTTGGCAAACAGCTACAACGGCACCTCCGAG 540 CTCCAGCTCGAGCGCATGAGCGTCTACTTCAACGAGGTATGTACACAATGTGCTCCTTCC 600 ATACGGCATGCTTGTAAAGACTGGCCGTCTGACATTACATCTCTCTGTAGGGTGCCGGCA 660 ACAAGTATGTTCCCCGCGCCGTCCTCGTCGATCTCGAGCCCGGCACCATGGATGCCGTTC 720 GCGCCGGTCCCTTCGGTCAGCTCTTCCGCCCCGACAACTTCGTCTTCGGCCAGTCTGGTG 780 CCGGCAACAACTGGGCCAAGGGTCACTACACTGAGGGTGCCGAGCTTGTCGACCAGGTCC 840 TCGATGTCGTCCGTCGCGAGGCTGAGGGCTGCGACTGCCTCCAGGGCTTCCAGATCACCC 900 ACTCGCTCGGTGGTGGTACCGGTGCCGGTATGGGCACGCTGTTGATCTC ； (4) 28S序列 GGGATTGCCCTAGTAACGGCGAGTGAAGCGGCAACAGCTCAAATTTGAAATCTGGCTCTA 60 GGGCCCGAGTTGTAATTTGCAGAGGATGATTTTGGCGCGGTGCCTTCCGAGTTCCCTGGA 120 ACGGGACGCCTTAGAGGGTGAGAGCCCCGTACGGTTGGACACCAAGCCTCTGTAAATCTC 180 CTTCGACGAGTCGAGTAGTTTGGGAATGCTGCTCTAAATGGGAGGTAAATTTCTTCTAAA 240 GCTAAATACCGGCCAGAGACCGATAGCGCACAAGTAGAGTGATCGAAAGATGAAAAGCAC 300 TTTGAAAAGAGGGTTAAATAGCACGTGAAATTGTTGAAAGGGAAGCATTTACTACCAGAC 360 CTTCTCCCTGCGGATCATACGGTGTTCTCACCGCTGCACTTCGCTTGGTTTAGGCCAGCA 420 TCGGTTTTCGTAGAGGGATAAAAGCTTTAGGAACGTAGCTCCCTCGGGAGTGTTATAGCC 480 TTTTGCATAATACCTTTACGGGGACCGAGGACCGCGCTTTTGCAAGGATGCTGGCATAAT 540 GGTAGTCAATGACCCGTCTTGAAACACGGACCAAGGAGTCGAACATTTGTGCGAGTGTTT 600 GGGTGTTAAACCCTCACGCGTAATGAAAGTGAACGTAGGTGAGAGCCCTTACGGGTGCAT 660 CATCGACCGATCTTGATGTCTTCGGATGGATTTGAGTAAGAGCATAACTGTTCGGACCCG 720 AAAGATGGTGAACTATGCGTGGATAGGGTGAAGCCAGAGGAAACTCTGGTGGAGGCTCGC 780 AGCGGTTCTGACGTGCAAATCGATCGTCAAATCTGCGCATGGGGGCGAAAGACTTATCGA 840 ACCATTAAACCAGCGGTAAAAATATTTACTAGGTGGTTAAGAGGCCCTCTGTAAAGAGAA 900 AAAGGCCTAG。
【文檔編號】A01P3/00GK104419647SQ201310400774
【公開日】2015年3月18日 申請日期:2013年9月6日 優(yōu)先權(quán)日:2013年9月6日
【發(fā)明者】郭順星, 譚小明, 陳曉梅, 邢詠梅, 王春蘭 申請人:中國醫(yī)學科學院藥用植物研究所