專利名稱：一種源于滬油15的rav-1類轉(zhuǎn)錄因子及其制備方法和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及作物遺傳育種領(lǐng)域，具體涉及一種源于甘藍(lán)型雙低油菜“滬油15”的 RAV-I類轉(zhuǎn)錄因子及其制備方法和應(yīng)用。
背景技術(shù)：
甘藍(lán)型雙低油菜滬油15是上海市農(nóng)業(yè)科學(xué)院作物育種栽培研究所油菜研究室采用雙交法選育的甘藍(lán)型雙低油菜新品種，2000年通過上海市農(nóng)作物品種審定委員會審定， 2003年通過國家品種審定委員會審定，2002年被科技部列入國家級成果重點推廣計劃，常年在長江中下游地區(qū)有較為廣泛的栽培孫超才等，中國油料作物學(xué)報，2002，對:65-67。油菜在其整個生活周期中，周圍的環(huán)境(氣候、土壤、水分營養(yǎng)供應(yīng)、病蟲害等因素)是經(jīng)常變化的，適宜的環(huán)境條件能保證或促進油菜正常的生長發(fā)育，而不適宜或惡劣的環(huán)境條件則會抑制油菜的生長甚至使油菜死亡。干旱、低溫和高鹽是目前影響農(nóng)作物主要的非生物限制因子Bray，Trends Plant ki，1997，2:48巧4，它們對作物的危害通常表現(xiàn)為使植物體內(nèi)水分平衡的發(fā)生變化，又稱水分脅迫或滲透脅迫。非生物限制因子嚴(yán)重影響了作物的生長、產(chǎn)量和種植區(qū)域。隨著分子生物學(xué)與現(xiàn)代生物技術(shù)的發(fā)展，使人們從分子水平上深入認(rèn)識植物與非生物逆境之間的關(guān)系成為現(xiàn)實，并且為改良作物抗非生物逆境性能開拓了新的途徑。目前，植物與非生物逆境之間的關(guān)系在分子細(xì)胞水平上己有較深入的研究。理解植物對非生物逆境的響應(yīng)及相關(guān)信號在植物體內(nèi)的傳導(dǎo)途徑和克隆抗逆相關(guān)基因?qū)χ参锟鼓嫘阅艿奶岣呔哂兄匾闹笇?dǎo)意義。據(jù)統(tǒng)計，我國城鄉(xiāng)人均植物油年消費量為8. 5公斤，植物油總需求量達(dá)1400多萬噸，并保持以每年50萬噸的速度增長，而目前我國總生產(chǎn)量只有900多萬噸，缺口近500萬噸。預(yù)計2020年我國年需植物油將達(dá)2040萬噸，缺口較大，需要依靠大量進口來彌補國內(nèi)產(chǎn)需缺口王漢中，中國油料作物學(xué)報，2004，沈98-101。大力發(fā)展油菜和其他油料植物種植及提高產(chǎn)量以緩解依賴進口解決植物油短缺，不但具有食品安全的長遠(yuǎn)意義，而且關(guān)系到我國種植業(yè)結(jié)構(gòu)的調(diào)整、優(yōu)化和近1億農(nóng)民的增收。油菜還是一種潛在的生物能源，關(guān)系到我國的能源安全和環(huán)境安全，進一步改良和加強油菜基礎(chǔ)理論和生產(chǎn)實踐研究具有重大的意義王漢中，中國油料作物學(xué)報，2007，四101-105。相比擬南芥Riechmann等，Science, 2000，290 2105-2110、水稻Yu 等， Science,2002,296:79-92],楊樹Tuskan 等，Science,2006，3131596-1604和葡萄 [Jaillon 等，Nature, 2007,449 463-467 ；Velasco 等，PLoS ONE，2007，2 el326等基因組已經(jīng)測序完成的植物而言，油菜中轉(zhuǎn)錄因子的研究相對較少，且主要集中在AP2/ERF轉(zhuǎn)錄因子家族。目前，從油菜中分離AP2/ERF家族轉(zhuǎn)錄因子的方法主要有RACE、探針雜交和電子克隆結(jié)合RT-PCR等。Jaglo等通過RACE方法從春油菜(漢napus cv. W^estar)中分離到兩個CBF族轉(zhuǎn)錄因子Jaglo等，Plant Physiol，2001，127:910-917；Gao等通過探針雜交的方法從冬油菜(漢napus cv. Jet neuf )中分離了四個CBF族轉(zhuǎn)錄因子Gao等， Plant Mol Biol，2002，49459-471 ；Liu 等通過 RACE 方法從油菜中克隆了 4 個 ERF/AP2類轉(zhuǎn)錄因子Liu等，F(xiàn)EBS Lett，2006，580:1303-1038;Zhao等通過RACE方法從油菜(召. napus cv. Jinghong H15)中克隆了 7 個 CBF 族轉(zhuǎn)錄因子Zhao 等，J Biol Chem, 2006, 281:10752-10759].這些AP2/ERF家族轉(zhuǎn)錄因子基因的克隆對進一步開展油菜轉(zhuǎn)錄因子的研究奠定了良好的基礎(chǔ)。油菜AP2/ERF家族轉(zhuǎn)錄因子廣泛參與油菜生長發(fā)育和對外界刺激的應(yīng)答反應(yīng)，并對各種逆境和發(fā)育信號作出反應(yīng)。目前主要主要集中在DREB和ERF亞族， 而對于RAV亞族的研究則相對較少。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題在于提供一種源于滬油15的RAV-I類轉(zhuǎn)錄因子及其制備方法和應(yīng)用，以進一步分析該基因在甘藍(lán)型油菜逆境中的作用。本發(fā)明的技術(shù)方案具體如下
所述的源于滬油15的RAV-I類轉(zhuǎn)錄因子，其堿基序列如SEQ ID No 1所示。所述轉(zhuǎn)錄因子編碼的蛋白質(zhì)，其氨基酸序列如SEQ ID No 2所示。所述源于滬油15的RAV-I類轉(zhuǎn)錄因子為基因。所述fea似K-7-M75基因編碼閱讀框由1023 bp組成，編碼成一個含有340個氨基酸的蛋白質(zhì)。所述源于滬油15的RAV-I類轉(zhuǎn)錄因子基因可應(yīng)用于甘藍(lán)型油菜逆境生理中。所述的源于滬油15的RAV-I類轉(zhuǎn)錄因子的制備方法，包括以下步驟 1)甘藍(lán)型油菜cDNA文庫的構(gòu)建
選取滬油15幼苗提取總RNA，以總RNA為模板、Oligo (dT)為引物，在AMV反轉(zhuǎn)錄酶的作用下合成cDNA。2)設(shè)計一對正向、反向引物，以上述cDNA為模板進行PCR擴增，獲得滬油15的 RAV-I類轉(zhuǎn)錄因子基因fea似K-7-M75片段。3)將上述獲得的擴增基因片段回收后克隆入T載體，測序后即獲得甘藍(lán)型油菜的 RAV-I類的轉(zhuǎn)錄因子，即fea似K-7-M75"基因。其中，上述制備方法的具體實驗步驟如下 1.滬油15的cDNA文庫的構(gòu)建
本發(fā)明將滬油15種子經(jīng)1% (v/v) NaOCl消毒后種植在黑土珍珠巖蛭石(1:1:1) 混合基質(zhì)中，22°C、16 h光照培養(yǎng)生長20d。選生長健壯的幼苗提取總RNA。以總RNA為模板，Oligo (dT)為引物，參照cDNA合成試劑盒說明，在AMV反轉(zhuǎn)錄酶的作用下合成cDNA。2.引物的設(shè)計與合成
設(shè)計一對正向、反向引物，引物兩端分別引入Bern HI和Sac I的酶切位點。其中，正向引物的序列如SEQ ID No 3所示，具體為5’ -GGA, TCC, ATG, GAA，GTG，AGT，AGC，GTA，GAC，G-3，；反向引物的序列如 SEQ ID No 4 所示，具體為5，_GAA，T TC, TCA, CAA, GGC, GTG, AAA, GAT, GCG, TTG, C_3，；引物由上海生工生物工程技術(shù)有限公司合成 (http://www. sangon. com/)。3. PCR的方法獲得滬油15的RAV-1類轉(zhuǎn)錄因子
本發(fā)明的PCR擴增采用大連寶生物工程有限公司(http://takara. com. cn/)的PCR試劑。在50 μ 1的體系中進行PCR反應(yīng)，反應(yīng)參數(shù)為94°C變性30 s，55°C退火30 s，72°C延伸1 min 30 s，共擴增30個循環(huán)，再72°C延伸10 min。經(jīng)過1. 0%的瓊脂糖凝膠電泳檢測擴增產(chǎn)物為一條約1000 bp的片段，結(jié)果參見圖1。4.克隆鑒定與序列測定
擴增片段采用杭州維特潔生化技術(shù)有限公司(WWW. axygen. com. cn/ ) DNA瓊脂糖凝膠回收試劑盒回收后克隆到大連寶生物工程有限公司(httpV/takara. com. cn/)的 pMD-18-Simple T載體上進行克隆鑒定和序列測定。5.序列分析
通過核苷酸序列測定分析，即獲得本發(fā)明的源于滬油15的RAV-I類轉(zhuǎn)錄因子基因片段，其堿基序列如SEQ ID No 1所示，其編碼的蛋白質(zhì)的氨基酸序列如SEQ ID No 2所示。該基因編碼閱讀框由1023 bp組成，編碼成一個含有340個氨基酸的蛋白質(zhì)。本發(fā)明實現(xiàn)的有益效果
本發(fā)明成功克隆出滬油15的RAV-I類轉(zhuǎn)錄因子，即基因，為了進一步分析該基因在甘藍(lán)型油菜低溫逆境中的作用與功能，比較了其與正常滬油15植株，及在低溫、高鹽和聚乙二醇(PEG)的處理后該基因的表現(xiàn)。結(jié)果表明本發(fā)明的fea似K-7-M75基因受到PEG、高鹽和低溫的誘導(dǎo)表達(dá)。fea似K-7-M75基因在滬油15盛花和籽粒發(fā)育時期的根、莖、葉、花、蕾和莢中均檢測不到明顯的表達(dá)。這也表明本發(fā)明的fea似K-7-//775基因與甘藍(lán)型油菜對高鹽、干旱和低溫等逆境的相關(guān)。


圖1為瓊脂糖凝膠電泳檢測PCR的擴增產(chǎn)物結(jié)果，其中k%BnaRAV-I- M75基因擴增產(chǎn)物。圖2為本發(fā)明的源于滬油15的RAV-I類轉(zhuǎn)錄因子fea/M基因的進化樹分析結(jié)果。圖3本發(fā)明的源于滬油15的RAV-I類轉(zhuǎn)錄因子基因的不同組織表達(dá)模式分析結(jié)果，其中A為基因片段擴增產(chǎn)物，B為甘藍(lán)型油菜內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)基因acii/7的擴增產(chǎn)物，1-6分別表示不同組織擴增產(chǎn)物1-莢、2-蕾、3-花、4-葉、5-莖和 6-根。圖4為本發(fā)明的源于滬油15的RAV-I類轉(zhuǎn)錄因子fea似K-7-M75基因的低溫處理表達(dá)模式分析結(jié)果，其中A為基因片段擴增產(chǎn)物，B為甘藍(lán)型油菜內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)基因acii/ 的擴增產(chǎn)物，0、2、4、8、12和M分別表示低溫不同處理時間小時數(shù)的擴增產(chǎn)物。圖5為本發(fā)明的源于滬油15的RAV-I類轉(zhuǎn)錄因子基因的氯化鈉處理表達(dá)模式分析結(jié)果，其中A為基因片段擴增產(chǎn)物，B為甘藍(lán)型油菜內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)基因acii/7的擴增產(chǎn)物，0、2、4、8、12和M分別表示氯化鈉不同處理時間小時數(shù)的擴增產(chǎn)物。圖6為本發(fā)明的源于滬油15的RAV-I類轉(zhuǎn)錄因子fea似K-7-M75基因的聚乙二醇(PEG)處理表達(dá)模式分析，其中A為fea似K-7-M75基因片段擴增產(chǎn)物，B為甘藍(lán)型油菜內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)基因acii/7的擴增產(chǎn)物，0、2、4、8、12和M分別表示聚乙二醇不同處理時間小時數(shù)的擴增產(chǎn)物。
具體實施例方式以下結(jié)合具體實施例進一步詳細(xì)描述本發(fā)明的技術(shù)方案，但不限于本發(fā)明。下述實施例中，所用的試驗材料及其來源分別如下
普通滬油15的種子經(jīng)過1% (v/v) NaOCl消毒后種植在黑土珍珠巖蛭石(1:1:1)的基質(zhì)中，22 °C，培養(yǎng)(1 光照，他黑暗，冷光源)生長20天。大腸桿菌(fecAericAia co7i)DH5a和釀酒酵母菌株由本研究室保存?？寺≥d體pMD-18-Simple T、各類限制性內(nèi)切酶、Taq聚合酶、連接酶、dNTP、10 XPCR buffer禾Π DNA marker購自寶生物工程大連有限公司。所有的化學(xué)試劑都從美國西格瑪化學(xué)公司和上海國藥化學(xué)試劑公司購買。ABI PRIAM Big-Dye Terminator DNA測序試劑盒購自美國應(yīng)用系統(tǒng)公司。下述實施例中常規(guī)的基因操作參照分子克隆文獻進行Sambrook J, Frets E F， Mannsdes T et al. In: Molecular Cloning. 2nd ed. Cold Spring Harbor Laboratory Press,1989。實施例1
甘藍(lán)型油菜“滬油15”幼苗RNA的抽提 (一)試驗方法 URNA的抽提
1)加入100ml提取緩沖液(油菜RNA提取緩沖液配方CTAB 3% (W/V) ；PVP 3% (W/V) (Mw 4000) ；EDTA 25mM ；NaCl 2. 0 M ；Tris-HCl IOOmM, pH 8. 0 ；Spermidine 0. 5g/L ；DEPC 0. 1% (V/V) ；0. 1% DEPC 處理的 SDS 0. 5%(ff/V) ；0. 1% DEPC 處理的 LiCl 10M 至Ij 50 mL 聚丙烯管，65°C預(yù)熱。2)稱取5 g植物材料倒入液氮使材料始終保持凍結(jié)和易碎的狀態(tài)，研磨。3)研磨后細(xì)粉轉(zhuǎn)移至預(yù)先加入65 °C預(yù)熱的提取緩沖液的50 mL離心管。4)將離心管放入65°C水浴45 min,并偶爾搖動以混合各成分。5)加入等體積氯仿-異戊醇混合液，輕柔地上下顛倒混合約lOmin。6)在 18°C，于 12000g 離心 10 min。7)吸取上清液，重復(fù)5)、6)步驟操作。8)吸取上清液，加入1/4體積的10M LiCl溶液，徹底混勻，4°C放置12 h。9)在 4°C，12000 g 離心 30 min。10) RNA沉淀用500 μ L 0.5% SDS輕柔溶解，用氯仿-異戊醇混合液抽提，4°C， 12000g 離心 30 min。11)上清液轉(zhuǎn)移至另一新的管子，加入2倍體積_20°C冰冷的無水乙醇，充分混合， 放置在_20°C條件下2 h，沉淀總RNA。12) 12000g，4°C離心30 min，用75%乙醇漂洗兩次，保留RNA，真空風(fēng)干。13)用200 μ L DEPC處理的去離子水重新溶解，取少量用于RNA質(zhì)量和濃度的檢測，其余儲存于_70°C，備用。(二)試驗結(jié)果采用瓊脂糖凝膠電泳鑒定總RNA產(chǎn)物，結(jié)果可見明顯的RNA條帶。實施例2
PCR的方法獲得滬油15的RAV-I類轉(zhuǎn)錄因子基因片段 (一)試驗方法
設(shè)計一對正向和反向引物，為了克隆鑒定等構(gòu)建的需要，引物兩端分別引入ife HI和 Sac I的酶切位點。其中，正向引物的序列如SEQ ID No 3所示，具體為5’_GGA，TCC，ATG， GAA, GTG, AGT, AGC, GTA, GAC, G_3，；反向引物的序列如SEQ ID No 4所示，具體為 5，-GAA, TTC, TCA, CAA, GGC, GTG, AAA, GAT, GCG, TTG, C_3，。引物由上海生工生物工程技術(shù)有限公司合成(http://www. sangon. com/)。PCR 反應(yīng)體系10 X PCR buffer 5. 0 μ L ；dNTPs (各 2. 5mM)4 μ 1 ；普通小麥幼苗的cDNA模板Ιμ (20ng);正向引物0. 5 μ 1 ；反向引物0. 5μ1 ；Ex-Taq 0. 4 μ 1 (預(yù)變性后加入)；加無菌水定容至50 μ L·PCR反應(yīng)程序94°C變性30s，55°C退火30s，72°C延伸1 min 30 s，共擴增30個循環(huán)，再72°C延伸10 min。(二)試驗結(jié)果
經(jīng)過1. 0 wt%的瓊脂糖凝膠電泳檢測擴增產(chǎn)物為一條約IOOObp的片段(參見圖1)。實施例3
克隆鑒定、序列測定 (一)試驗方法
擴增片段采用杭州維特潔生化技術(shù)有限公司DNA瓊脂糖凝膠回收試劑盒回收后克隆到大連寶生物工程有限公司的pMD-18-Simple T載體上進行克隆鑒定和序列測定。通過核苷酸序列測定分析，最終獲得了本發(fā)明的源于滬油15的RAV-I類轉(zhuǎn)錄因子
基因，其具有如SEQ ID No 1和SEQ ID No 2所示的堿基和氨基酸序列信
肩、ο進化樹繪制使用NJ(Neighbor-joining)方法Saitou 等，Mol Biol Evol, 1987， 4: 406-425，禾(Molecular Evolutionary Genetics Analysis (MEGA) software version 4. 0) (http://www.megasoftware.net/ mega, html)完成Tamura 等， Mol Bio Evo, 2007， 24: 1596-1599。(二)試驗結(jié)果
測序分析結(jié)果顯示本發(fā)明的源于滬油15的RAV-I類轉(zhuǎn)錄因子fea/tMK- 7-//Z/5基因編碼閱讀框由1023 bp組成，編碼成一個含有340個氨基酸的蛋白質(zhì)(參見序列表SEQ ID No 1和 SEQ ID No 2)。構(gòu)建的同源進化樹表明本發(fā)明的源于滬油15來源的RAV-I類轉(zhuǎn)錄因子 BnaRAV-I-HY15在進化關(guān)系上屬于AP2/ERF家族中的RAV亞族中的1組(參見圖2)。實施例4
滬油15來源的fea似K-7-M75基因的表達(dá)分析 (一)試驗方法
對生長2周的健壯滬油15幼苗進行各種逆境脅迫。冷處理為將幼苗從22°C移入4°C分別處理2、4、8、12和M h。 7
高鹽和干旱處理為分別采用200 mmol/L的氯化鈉(NaCl)和15 %的聚乙二醇(PEG 6000)處理幼苗 2、4、8、12 和 24h。為了檢測fea^MK-i-Z/Z^基因在不同組織中的表達(dá)差異，從正常生長健壯的滬油 15盛花籽粒發(fā)育時期的植株上分別取根、莖、葉、花、蕾和莢等組織。所有樣品立即放入液氮，冷凍后置于-70°C冰箱保存。采用植物總RNA抽提試劑盒進行總RNA抽提，使用DNase ？ 去除基因組的污染， 然后反轉(zhuǎn)錄成cDNA第1鏈。以滬油15不同處理苗及不同組織器官材料的cDNA為模板，采用RT-PCR對 BnaRA V-I-HY 15基因的表達(dá)進行分析。根據(jù)BnaRAV-l-HY15基因設(shè)計并合成了 1對表達(dá)檢測引物正向為 BnaRAV-I-BDF，其序列如 SEQ ID No 5 所示，具體為5，-GTT, TCG, ACG, ACG, GAG, TTT, AG-3， ；反向為 BnaRAV-1-BDR，其序列如 SEQ ID No 6 所示，具體為5，_TAC, CAC, GTC, GTT, TCT, TG A，AC-3’，擴增產(chǎn)物長度為440 bp。PCR 反應(yīng)程序95°C預(yù)變性 5min ；95°C變性 40s ；58°C退火 30s ；72°C延伸 30 s ；共 30個循環(huán)；72°C延伸5min。由于Iii/ 基因在油菜不同的組織中表達(dá)穩(wěn)定，選用Iii/ 基因作為內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)基因， 用以確定反轉(zhuǎn)錄后cDNA模板的相對含量。為了增加RT-PCR的可靠性，以油菜A^i/ 基因作為內(nèi)標(biāo)。根據(jù)油菜Jciiz7基因設(shè)計并合成了 1對引物正向為foia-actinFl，其序列如SEQ ID No 7 所示，具體為5，-GGG, AA T, GGA, AGC, TGC, TGG, AAT, C-3，；反向為 Bna-actinRl，其序列如 SEQ ID No 8 所示，具體為5，-GAT, CCA, CAT, CTG, CTG, GAA, TGT, GC-3，，擴增產(chǎn)物長度為270bp。PCR 反應(yīng)程序95°C預(yù)變性 5min ；95°C變性 30s ；58°C退火 30s ；72°C延伸 25s ；共 30個循環(huán)；72°C延伸5min。PCR產(chǎn)物采用1. 5 %的瓊脂糖凝膠電泳，Bio-Rad的Gel Doc 1000分析儀進行凝膠成像和分析。(二)試驗結(jié)果
基因在盛花和籽粒發(fā)育時期油菜的根、莖、葉、花、蕾和莢中均檢測不到明顯的表達(dá)(參見圖3)。滬油15幼苗在低溫(4°C)處理了 2、4、8、12和24h檢測結(jié)果顯示，fea似K-7-M75 基因被低溫誘導(dǎo)，在低溫脅迫下，fea似K-7-M75表達(dá)量隨著時間的延長而增加二4小時達(dá)到最大(參見圖4)。滬油15幼苗在高鹽溶液(200mmol/L NaCl)處理了 2、4、8、12和24h檢測結(jié)果顯元、’BrmRA V-I-HY 15基因被高鹽溶液誘導(dǎo)。在高鹽溶液脅迫下，fea/M V-1~HY 15表達(dá)量在12 h和M h能夠明顯檢測到表達(dá)(參見圖5)。滬油15幼苗在PEG 6000溶液處理了 2、4、8、12和24h檢測結(jié)果顯示， fea似基因被PEG 6000溶液誘導(dǎo)，從處理2 11到對h均能檢測到表達(dá)，而在M h 表達(dá)量達(dá)到最大(參見圖6)。最后應(yīng)當(dāng)說明的是，以上實施例僅用以說明本發(fā)明的技術(shù)方案而非限制，盡管參照較佳實施例對本發(fā)明進行了詳細(xì)說明，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可以對發(fā)明的技術(shù)方案進行修改或者等同替換，而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的精神和范圍，其均應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的權(quán)利要求范圍中。
權(quán)利要求
1.一種源于滬油15的RAV-I類轉(zhuǎn)錄因子，其特征在于，其堿基序列如SEQ ID No 1所示。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的轉(zhuǎn)錄因子，其特征在于，其編碼的蛋白質(zhì)的氨基酸序列如SEQ ID No 2所示。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的轉(zhuǎn)錄因子，其特征在于，所述轉(zhuǎn)錄因子為fea^MK-i-Z/Z^基因。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的轉(zhuǎn)錄因子，其特征在于，所述基因編碼閱讀框由1023 bp組成，編碼成一個含有340個氨基酸的蛋白質(zhì)。
5.權(quán)利要求1所述的轉(zhuǎn)錄因子的制備方法，其特征在于，包括以下步驟1)構(gòu)建滬油15的cDNA文庫選取滬油15幼苗提取總RNA，以總RNA為模板、Oligo(dT) 為引物，在AMV反轉(zhuǎn)錄酶的作用下合成cDNA ；2)設(shè)計一對正向、反向引物，以上述cDNA為模板進行PCR擴增，獲得滬油15的RAV-I 類轉(zhuǎn)錄因子^基因片段；3)將上述獲得的擴增基因片段回收后克隆入T載體，測序后即獲得滬油15的RAV-I類轉(zhuǎn)錄因子fea/M V-I-HY 15基因。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的制備方法，其特征在于，所述正向引物的序列如SEQID No 3 所示，所述反向引物的序列如SEQ ID No 4所示。
7.權(quán)利要求1至4任一項所述的源于滬油15的RAV-I類轉(zhuǎn)錄因子在油菜逆境生理中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種源于滬油15的RAV-1類轉(zhuǎn)錄因子及其制備方法和應(yīng)用。所述轉(zhuǎn)錄因子為BnaRAV-1-HY15基因，其堿基序列如SEQIDNo1所示，其編碼的蛋白質(zhì)的氨基酸序列如SEQIDNo2所示。所述BnaRAV-1-HY15基因編碼閱讀框由1023bp組成，編碼成一個含有340個氨基酸的蛋白質(zhì)。本發(fā)明利用聚合酶擴增技術(shù)從甘藍(lán)型雙低油菜滬油15幼苗中成功克隆出滬油15的RAV-1類轉(zhuǎn)錄因子，該轉(zhuǎn)錄因子與油菜逆境生理相關(guān)。
文檔編號A01H5/00GK102373222SQ20101025928
公開日2012年3月14日 申請日期2010年8月20日 優(yōu)先權(quán)日2010年8月20日
發(fā)明者周熙榮, 孫超才, 莊靜 申請人:上海市農(nóng)業(yè)科學(xué)院