專利名稱：中國蛤蜊兩個殼色品系的制種方法
技術領域：
本發(fā)明涉及海洋生物技術，系貝類遺傳育種和種質改良領域，具體的說是 一種中國蛤蜊兩個殼色品系的制種方法。
背景技術：
中國蛤蜊隸屬瓣鰓綱，簾蛤目.蛤蜊科，蛤蜊屬，主要分布在我國的遼寧、
山東以及日本、朝鮮等地(張璽，1961)。中國蛤蜊棲息在水流暢通、餌料豐富 的近河口淺海處，以2-5m水深處最多，直至水深60ra的海區(qū)均有分布，肉味鮮美， 出肉率高，是一種具有較高營養(yǎng)價值的灘涂貝類。閆喜武等(2008)突破了中 國蛤蜊的人工育苗及養(yǎng)成技術，為灘涂貝類土著種開發(fā)，實現(xiàn)淺海資源恢復及 維護灘涂貝類的生物多樣性奠定f基礎。
海洋雙殼類貝殼的顏色過去僅被作為分泌產(chǎn)物而一直被忽視。事實上雙殼 類貝殼的顏色不僅與它們的生態(tài)和行為有關還與其生長、存活等表型性狀有關。 在我國，張國范等(2000-2005)以殼色為標記，選育出的"中科紅海灣扇貝"。 趙洪恩等(1999)在關于瑪瑙鮑探索與研究中發(fā)現(xiàn)，由于基因突變產(chǎn)生的紅殼 鮑具有生長快，抗病力強的特點。閆喜武等(2002-2008)在對菲律賓蛤仔研究 中發(fā)現(xiàn)，不同殼色的菲律賓蛤仔生長發(fā)育存在差別并且売色這一質量性狀可以 穩(wěn)定遺傳給后代，先后獲得了一系列的菲律賓蛤仔殼色選育系和雜交系。何毛 賢等(2006)在對馬氏珠母貝的研究中，通過單體培養(yǎng)得到了一個紅殼色品系。 常亞青等(2007)根據(jù)蝦夷扇貝的殼色，選育出蝦夷扇貝象牙白殼色品系。而 巾國蛤蜊殼色存在比較簡單的殼色多態(tài)現(xiàn)象，大概由3-5種殼色表現(xiàn)形式(閆 喜武，2008)。

發(fā)明內容
針對以上現(xiàn)象，學者們開展了殼色品系選育工作，經(jīng)過兩年的定向選育， 獲得了兩個中國蛤蜊殼色品系，這為中國蛤蜊新品種的開發(fā)奠定丫良好的基礎。
本發(fā)明提供了一種以殼色為標記的中國蛤蜊殼色品系的制種方法，利用殼 色這一質量性狀為標記，以不同殼色的中國蛤蜊為材料，通過逐代的定向選育 獲得具有優(yōu)良性狀的殼色品系。黃褐色中國蛤蜊品系的成貝背景顏色為黃褐色，但是具有放射條帶，幼貝 放射條帶鮮明，具有兩個較寬的白條帶和一個較窄的白條帶，還有兩條一深一 淺的紅色條帶；綠褐色中國蛤蜊品系成貝和幼貝的背景顏色均為綠褐色，具有 放射條帶，但不明顯。
本發(fā)明是以黃褐色、綠褐色的中國蛤蜊作為繁殖群體，親本成熟后以相同 殼色的親本作為父本、母本，通過人工剌激的方法促使親貝產(chǎn)卵、排精，經(jīng)過 產(chǎn)卵及孵化、幼蟲培養(yǎng)、稚貝培育、稚貝中間育成環(huán)節(jié)，獲得了子一代的不同 殼色的中國蛤蜊品系；待子代性腺成熟，可以產(chǎn)卵、排精時，再以相同殼色的 子一代作為親貝放養(yǎng)，并以相同的方式進行定向選育，從而獲得子二代，如此 循環(huán)卜'去使得殼色得到進一歩純化；得到中國蛤蜊殼色新品系。
其制種方法的具體步驟如下
1) 、親貝選取與促熟從野生群體或養(yǎng)殖群體中，選出2-3齡的殼型規(guī)整， 殼色一致的黃褐色、綠褐色中國蛤蜊作為繁殖群體，放到生態(tài)蟲下池中進行生態(tài) 促熟，定期取樣觀察性腺發(fā)育；
2) 、產(chǎn)卵及孵化親貝性腺成熟，將不同殼色中國蛤蜊親本單獨放置，經(jīng) 過陰干3-6h，流水2-3h的刺激，大約經(jīng)過2-4 h，親本開始產(chǎn)卵排精；采用相同 殼色中國蛤蜊的群體自交和建立自交家系，對受精卵的孵化密度控制在30-40個 /ml;在溫度24-25。C的條件下，受精卵大約經(jīng)過23 h全部孵化至D形幼蟲；
3) 、幼蟲培養(yǎng)用320目篩絹網(wǎng)制作的網(wǎng)箱選育D形幼蟲，幼蟲培養(yǎng)密度5-6 個/ml,每天換l次水，換水量為30-60%;館料每天投喂2次，前期投喂綠色巴夫藻， 后期混合投喂體積比l: 1: l的湛江等鞭金藻、小球藻、塔胞藻，投餌量適幼蟲 攝食情況而定，換水網(wǎng)箱單獨使用；幼蟲培育期間，水溫為24. 4-27. 6°C，鹽度為 24-28;
4) 、稚貝培育幼蟲變態(tài)后，正常培育同3)，投餌量適稚貝攝食情況而定， 大約經(jīng)過40-50d的培養(yǎng)，稚貝殼長達到2-3mm，此時將稚貝轉入到生態(tài)蟲下池進行 幼貝育成，在此期間，溫度為23-30°C，鹽度為24-28， pH為7. 52_8. 86;
5) 、中間育成中間育成先采用60目網(wǎng)袋，根據(jù)稚貝大小，定期依次更換 成40目、20目的網(wǎng)袋；
6) 、殼色品系的逐代純化經(jīng)過幼蟲培養(yǎng)、稚貝培育、中間育成等環(huán)節(jié)，獲得了子一代的兩種殼色的中國蛤蜊品系，經(jīng)過一周年的培育，子代性腺成熟， 可以產(chǎn)卵，從而獲得子二代，如此循環(huán)下去使得殼色得到進一步純化，從中篩 選出生長快、抗逆性強的殼色品系。
按常規(guī)方法進行產(chǎn)卵、孵化的操作過程中采取嚴格的隔離措施，即對親本 產(chǎn)卵、排精開始到孵化成D形幼蟲階段所釆用的一切器具和設施進行清洗，并對 親本進行清洗后再將同一殼色中國蛤蜊親本單獨放入同一容器中產(chǎn)卵排精，收 集單體精卵，建立相同殼色的自交家系，其制種效果更佳。
親本選取過程中，如果將兩種殼色差異明顯且殼色表現(xiàn)非常一致的兩種殼 色群體作為親本，則更有助于子代的殼色純化進程。
產(chǎn)卵孵化過程中，以如下方式為優(yōu)選方式利用相同殼色親本進行產(chǎn)卵受 精，即相同殼色親本的群體自交和單體自交，避免雜色親本個體混入，對子代 殼色造成影響。整個過程中，嚴格隔離，保證子代殼色表現(xiàn)的一致性。
苗種培育及養(yǎng)成過程中，不同殼色的子代嚴格隔離，避免混淆，保證子代 殼色的致性。則制種效果更佳。
殼色品系逐代純化過程中，優(yōu)選方式為從子一代中選擇殼色表現(xiàn)高度一 致的個體，作為親本，繁育子二代；以后采用相同方式進行疊代選擇，這樣可 以進一歩加快殼色純化速度。 具體實施例
下面以中國蛤蜊進^步說明本發(fā)明，但不構成對本發(fā)明的限制。 實施例1
第一歩、親貝選取與促熟于2007年5月初，在大連莊河尖山灘涂，選出3 齡的殼型規(guī)整，殼色高度一致的黃褐色、綠褐色中國蛤蜊作為繁殖群體10kg， 采用扇貝籠籠養(yǎng)，放到大連海量水產(chǎn)食品有限公司的蝦池中進行生態(tài)促熟。定 期取樣觀察性腺發(fā)育，待其性腺成熟。
第二歩、產(chǎn)卵及孵化于2007年7月上旬，親貝性腺成熟，將不同殼色中國 蛤蜊親本單獨放置，經(jīng)過陰干3-6h，流水2-3h的刺激，放入100L的大白桶中， 大約經(jīng)過2-4h，親本開始產(chǎn)卵排精。為了提高孵化率，對受精卵的孵化密度控 制在30-40個/ml。在溫度24-25'C的條件下，受精卵大約經(jīng)過23 h全部孵化至D 形幼蟲。在此期間，兩種殼色親本單獨放置，避免混雜，對兩個殼色品系的精 卵也要嚴格隔離。第三歩、幼蟲培養(yǎng)用320目篩絹網(wǎng)制作的網(wǎng)箱選育D形幼蟲，放置100L的
白色塑料桶中進行培育，幼蟲培養(yǎng)密度5-6個/ml，每天換l次水，換水量為 30-60%。餌料每天投喂2次，前期投喂綠色巴夫藻，后期混合投喂體積比l: 1:
l的湛江等鞭金藻、小球藻、塔胞藻。投餌量適幼蟲攝食情況而定。為防止不同 殼色中國蛤蜊幼蟲之間混雜，換水網(wǎng)箱單獨使用。幼蟲培育期間，水溫為
25-27。C，鹽度為24-28。
第四步、稚貝培育幼蟲變態(tài)后，正常培育同第三歩。由于稚貝個體增大，
攝食量增加，投餌量適稚貝攝食情況而定。大約經(jīng)過40-50d的培養(yǎng)，稚貝殼長 達到2-3mm，此時將稚貝轉入到生態(tài)奸池進行幼貝育成。在此期間，對兩個殼色 品系中國蛤蜊稚貝嚴格隔離，避免混淆，水質情況為溫度26-30°C，鹽度24-27， pH7. 52-8. 86。
第五步、幼貝屮間育成.*中間育成采用60目網(wǎng)袋(40cmX60cm)，在稚貝中 間育成階段，定期更換不同目數(shù)的網(wǎng)袋(60目-40目-20目)，消除網(wǎng)目對幼貝生 長的影響。使每個殼色品系的幼貝吊養(yǎng)密度一致，消除密度對生長的影響。在 換袋的過程中，避免殼色品系間的混淆，保證殼色表現(xiàn)的-致性。
第六歩、殼色品系的逐代純化經(jīng)過幼蟲培養(yǎng)、稚貝培育、中間育成等環(huán) 節(jié)，獲得了子一代的兩種殼色的屮國蛤蜊。2008年7月初，子一代性腺成熟， 將子一代作為親本，對殼色進行疊代選擇，經(jīng)過以上歩驟，獲得了中國蛤蜊兩 個殼色品系的子二代，子二代的殼色純化率在98%以上。
經(jīng)過以上步驟，通過兩代的定向選育，獲得了中國蛤蜊兩個殼色品系，其 殼色純化率在98%以上，為殼色新品種的開發(fā)奠定了基礎。 實施例2
第一歩、親貝選取與促熟于2007年5月初，在大連莊河尖山灘涂，選出3 齡的殼型規(guī)整，殼色高度一致的黃褐色、綠褐色中國蛤蜊作為繁殖群體10kg， 采用扇貝籠籠養(yǎng)，放到大連海量水產(chǎn)食品有限公司的好池中進行生態(tài)促熟。定 期取樣觀察性腺發(fā)育，待其性腺成熟。
第二步、產(chǎn)卵及孵化于2007年7月上旬，親貝性腺成熟，將不同殼色中國 蛤蜊親本單獨放置，經(jīng)過陰干3-6h，流水2-3h的刺激，放入20L的大紅盤中，大 約經(jīng)過2-4 h，親本開始產(chǎn)卵排精。此時，將正在產(chǎn)卵排精的個體抓取出來，采 用相同殼色親本進行單對單雜交，成功建立6個黃褐色品系的自交家系和9個綠褐色殼色品系的自交家系。在此期間，兩種殼色親本單獨放置，避免混雜，對 兩個殼色品系的精卵也要嚴格隔離。
第三歩、幼蟲培養(yǎng)用320目篩絹網(wǎng)制作的網(wǎng)箱選育D形幼蟲，放置100L的
白色塑料桶中進行培育，幼蟲培養(yǎng)密度5-6個/ml，每2天換1次水，換水量為100%。 餌料每天投喂2次，前期投喂綠色巴夫藻，后期混合投喂體積比l: 1: l的湛江
等鞭金藻、小球藻、塔胞藻。投餌暈適幼蟲攝食情況而定。為防止不同殼色中 國蛤蜊fi交家系幼蟲之間混雜，換水網(wǎng)箱單獨使用。幼蟲培育期間，水溫為
25-27°C，鹽度為24-28。
第四歩、稚貝培育幼蟲變態(tài)后，正常培育同第三步。由于稚貝個體增大， 攝食量增加，投餌量適稚貝攝食情況而定。大約經(jīng)過40-50d的培養(yǎng)，稚貝殼長 達到2-3mm，此時將稚貝轉入到生態(tài)蝦池進行幼貝育成。在此期間，對兩個殼色 品系中國蛤蜊稚貝嚴格隔離，避免混淆，水質情況為溫度26-3(TC，鹽度24-27， pH7. 52-8. 86。
第五步、幼貝中間育成中間育成采用60目網(wǎng)袋(40cmX60cm)，在稚貝中 間育成階段，定期更換不同目數(shù)的網(wǎng)袋(60目-40目-20目)，消除網(wǎng)目對幼貝生 長的影響。使每個殼色品系的幼貝吊養(yǎng)密度一致，消除密度對生長的影響。在 換袋的過程中，避免殼色品系間的混淆，保證殼色表現(xiàn)的一致性。
第六歩、殼色品系的逐代純化經(jīng)過幼蟲培養(yǎng)、稚貝培育、中間育成等環(huán) 節(jié)，獲得了 3個黃褐色品系和5個綠褐色殼色品系的自交家系T一代。2008年 7月初，子一代性腺成熟，將子一代作為親本，對親本的殼色進行疊代選擇，采 用家系內自交策略，經(jīng)過以上步驟，獲得了中國蛤蜊兩個殼色品系自交家系的 子二代，子二代的殼色純化率近乎100%。
經(jīng)過以上歩驟，通過兩代的家系內疊代選擇，獲得了中國蛤蜊兩個殼色品 系，其殼色純化率近乎100%，為殼色新品種的開發(fā)奠定了基礎。 實施例3
第一步、親貝選取與促熟于2008年4月初，在大連莊河尖山灘涂，選出3 齡的殼型規(guī)整，殼色一致的黃褐色、綠褐色中國蛤蜊作為繁殖群體10kg，采用 扇貝籠籠養(yǎng)，放到大連海量水產(chǎn)食品有限公司的蝦池中進行生態(tài)促熟。定期取 樣觀察性腺發(fā)育，待其性腺成熟。
第二步、產(chǎn)卵及孵化于2007年7月上旬，親貝性腺成熟，將不同殼色中國蛤蜊親本單獨放置，經(jīng)過陰干3-6h，流水2-3h的刺激，放入20L的紅盆中，大約 經(jīng)過2-3 h，親本開始產(chǎn)卵排精。此時，將正在產(chǎn)卵排精的個體抓取出來，采用 不平衡巢式設計，建立了6個黃褐色品系的自交家系和18個綠褐色殼色品系的自 交家系。為了提高孵化率，對受精卵的孵化密度控制在20-30個/ml。在溫度
23- 24"C的條件下，受精卵大約經(jīng)過24h全部孵化至D形幼蟲。在此期間，兩個殼 色品系的自交家系的精卵要嚴格隔離，以免混淆。
第三步、幼蟲培養(yǎng)用320目篩絹網(wǎng)制作的網(wǎng)箱選育D形幼蟲，放置100L的 白色塑料桶中進行培育，幼蟲培養(yǎng)密度4-5個/ml，每2天換1次水，換水量為100%。 餌料每天投喂2次，前期投喂綠色巴夫藻，后期混合投喂體積比l: 1: l的湛江 等鞭金藻、小球藻、塔胞藻。投餌量適幼蟲攝食情況而定。為防止不同殼色中 國蛤蜊自交家系幼蟲之間混雜，換水網(wǎng)箱單獨使用。幼蟲培育期間，水溫為
24- 26°C，鹽度為24-28， pH7. 82-8. 30 。
第四歩、稚貝培育幼蟲變態(tài)后，正常培育同第三步。由于稚貝個體增大， 攝食量增加，投餌量適稚貝攝食情況而定。大約經(jīng)過40-50d的培養(yǎng)，稚貝殼長 達到2-3mm，此時將稚貝轉入到生態(tài)蟲下池進行幼貝育成。在此期間，對兩個殼色 品系自交家系的中國蛤蜊稚貝嚴格隔離，避免混淆，水質情況為溫度26-3(TC， 鹽度24-27， pH7. 52-8. 86。
第五步、幼貝中間育成中間育成采用60目網(wǎng)袋(40cmX60cm)，在稚貝中 間育成階段，定期更換不同目數(shù)的網(wǎng)袋(60目-40目-20目)，消除網(wǎng)目對幼貝生 長的影響。使每個殼色品系的自交家系幼貝吊養(yǎng)密度一致，消除密度對生長的 影響。在換袋的過程中，避免売色品系間的混淆，保證殼色表現(xiàn)的一致性。
第六步、殼色品系的逐代純化經(jīng)過幼蟲培養(yǎng)、稚貝培育、中間育成等環(huán) 節(jié)，獲得中國蛤蜊兩種殼色品系的子一代，子一代的殼色純化率在99%以上。
經(jīng)過以上步驟，獲得了相同殼色品系的自交家系子一代，其子代的殼色純 化率近在99%以上，可見，相同殼色的自交家系加速了殼色純化的進程，有利于 殼色新品種的開發(fā)。
權利要求
1、一種中國蛤蜊兩個殼色品系的制種方法，其特征在于包括以下步驟1)親貝選取與促熟；2)產(chǎn)卵及孵化；3)幼蟲培養(yǎng)；4)稚貝培育；5)幼貝中間育成；6)殼色品系的逐代純化；1)、親貝選取與促熟從野生群體或養(yǎng)殖群體中，選出2-3齡的殼型規(guī)整，殼色一致的黃褐色、綠褐色中國蛤蜊作為繁殖群體，放到生態(tài)蝦池中進行生態(tài)促熟，定期取樣觀察性腺發(fā)育；2)、產(chǎn)卵及孵化親貝性腺成熟，將不同殼色中國蛤蜊親本單獨放置，經(jīng)過陰干3-6h，流水2-3h的刺激，大約經(jīng)過2-4h，親本開始產(chǎn)卵排精；采用相同殼色中國蛤蜊的群體自交和建立自交家系，對受精卵的孵化密度控制在30-40個/ml；在溫度24-25℃的條件下，受精卵大約經(jīng)過23h全部孵化至D形幼蟲；3)、幼蟲培養(yǎng)用320目篩絹網(wǎng)制作的網(wǎng)箱選育D形幼蟲，幼蟲培養(yǎng)密度4-6個/ml，每天換1次水，換水量為30-60％；餌料每天投喂2次，前期投喂綠色巴夫藻，后期混合投喂體積比111的湛江等鞭金藻、小球藻、塔胞藻，投餌量適幼蟲攝食情況而定，換水網(wǎng)箱單獨使用；幼蟲培育期間，水溫為24.4-27.6℃，鹽度為24-28；4)、稚貝培育幼蟲變態(tài)后，正常培育同3)，投餌量適稚貝攝食情況而定，大約經(jīng)過40-50d的培養(yǎng)，稚貝殼長達到2-3mm，此時將稚貝轉入到生態(tài)蝦池進行幼貝育成，在此期間，溫度為23-30℃，鹽度為24-28，pH為7.52-8.86；5)、中間育成中間育成先采用60目網(wǎng)袋，根據(jù)稚貝大小，定期依次更換成40目、20目的網(wǎng)袋；6)、殼色品系的逐代純化經(jīng)過幼蟲培養(yǎng)、稚貝培育、中間育成等環(huán)節(jié)，獲得了子一代的兩種殼色的中國蛤蜊品系，經(jīng)過一周年的培育，子代性腺成熟，可以產(chǎn)卵，從而獲得子二代，如此循環(huán)下去使得殼色得到進一步純化，從中篩選出生長快、抗逆性強的殼色品系。
2、 如權利要求l所述的中國蛤蜊兩個殼色品系的制種方法，其特征在于親本選取過程中，將兩種殼色差異明顯且殼色表現(xiàn)非常一致的兩種殼色群體作 為親本，這樣有助于子代的殼色純化進程。
3、 如權利要求l所述的中國蛤蜊兩個殼色品系的制種方法，其特征在于產(chǎn)卵孵化過程屮，利用相同殼色親本進行產(chǎn)卵受精，即相同殼色親本的群體自 交和單體自交，避免雜色親本個體混入，對子代殼色造成影響。整個過程中， 嚴格隔離，保證子代殼色表現(xiàn)的一致性。
4、 如權利要求l所述的中國蛤蜊兩個殼色品系的制種方法，其特征在于 苗種培育及養(yǎng)成過程中，不同殼色的子代嚴格隔離，避免混淆，保證子代殼色 的一致性。
5、 如權利要求l所述的中國蛤蜊兩個殼色品系的制種方法，其特征在于: 殼色品系逐代純化過程中，從子一代中選擇殼色表現(xiàn)高度一致的個體，作為親 本，繁育f二代；以后采用相同方式進行疊代選擇，這樣可以進一步加快殼色 純化速度。
全文摘要
中國蛤蜊兩個殼色品系的制種方法。利用殼色這一質量性狀為標記，以兩種殼色的中國蛤蜊為材料，通過逐代的定向選育獲得中國蛤蜊兩個殼色品系。具體地說，殼色品系包括黃褐色、綠褐色兩個蛤蜊品系；采用相同殼色品系的群體自交和建立自交家并結合定向選育，來加快貝殼顏色的純化速度，從中篩選出殼色一致且差異顯著的兩個殼色品系。本發(fā)明獲得的兩個殼色品系，為中國蛤蜊殼色品種開發(fā)和種質改良奠定了的基礎。本發(fā)明具有操作簡便，易于推廣的特點。
文檔編號A23K1/14GK101438689SQ20081022995
公開日2009年5月27日 申請日期2008年12月17日 優(yōu)先權日2008年12月17日
發(fā)明者張國范, 張躍環(huán), 鳳 楊, 琦 王, 越 趙, 閆喜武, 霍忠明 申請人:大連水產(chǎn)學院