專(zhuān)利名稱(chēng)：鐵皮石斛組培繁育及仿野生栽培方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于通過(guò)組織培育技術(shù)的植物再生領(lǐng)域，具體涉及的是鐵皮石斛組培繁育及仿野生栽培方法。
背景技術(shù)：
石斛為蘭科石斛屬植物，主要藥用石斛品種有環(huán)草石斛、馬鞭石斛、黃草石斛、鐵皮石斛和金釵石斛。尤以鐵皮石斛和金釵石斛藥用價(jià)值最高，藥用石斛主要用于滋陰清熱，可以治療具有陰虛癥的急性及慢性咽喉炎、急性支氣管炎、結(jié)核病、甲狀性肌能亢進(jìn)、糖尿病、慢性萎縮性胃炎和免疫功能低下等癥，并對(duì)中老年人群具有增強(qiáng)肌體免疫力、抗衰老的保健功效。
鐵皮石斛自然野生環(huán)境特殊，均生長(zhǎng)在幾十米高的懸崖峭壁之上，自然繁殖系數(shù)極低，再由于人為過(guò)渡采收，已屬瀕危物種。近些年人們想通過(guò)人工栽培方法來(lái)繁衍鐵皮石斛，雖有一些進(jìn)展，但一直無(wú)法解決成活率低，牛產(chǎn)成本
高和不能人規(guī)模生產(chǎn)等問(wèn)題。中國(guó)專(zhuān)利申請(qǐng)?zhí)?00410017380.6公開(kāi)了 "一種鐵皮石斛的培育方法"，該技術(shù)在組培苗光照強(qiáng)度上采用2000 3000k光照，其優(yōu)點(diǎn)是可以縮短光照時(shí)間和組培苗培養(yǎng)周期，但存在葉片因光照強(qiáng)度大而發(fā)生紫紅色，葉綠素含量低，不利于組培苗健壯生長(zhǎng)；中國(guó)專(zhuān)利申請(qǐng)?zhí)?00410084496.1還公開(kāi)了一種"鐵皮石斛的人工大面積栽培方法"，該方法在組培苗來(lái)源上采用鐵皮石斛種子進(jìn)行組培繁育，然后采用兩段式將組培苗移栽，先是經(jīng)過(guò)4~5個(gè)月的煉苗移栽，然后再將煉苗后的石斛苗移栽到生產(chǎn)大田。這種方法優(yōu)點(diǎn)是種子繁殖量大，易形成原球莖，并能提高移栽成活率，其不足在于種亍繁殖易發(fā)生性狀分離，群體性狀不穩(wěn)定，生產(chǎn)成本高，工作量大，不利于規(guī)?；a(chǎn)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)中的不足，提出一種鐵皮石斛組培繁育及仿野生栽培方法，并通過(guò)該方法進(jìn)行規(guī)?；a(chǎn)栽培。
實(shí)現(xiàn)上述目的的技術(shù)方案是
一. 種苗的組培繁育
(1) 將鐵皮石斛幼嫩莖桿切片接種到MS+BA4 5的培養(yǎng)基上，在22 24°C、 1000 1500Lx條件下培養(yǎng)40 60天，誘導(dǎo)愈傷組織生長(zhǎng)，形成原球莖；
(2) 將愈傷組織接種到滅菌后的MS+BA2.0 4.0+NAA0.2 0.5增殖培養(yǎng)基上，在22 2fC、 1000 1500Lx條件下培養(yǎng)40 60天，使原球莖增殖生長(zhǎng)；
(3) 將原球莖接種到MS+BA0.2 0.5+NAA0.05 0.1發(fā)芽培養(yǎng)基上，在22 24°C、 1000 1500Lx條件下培養(yǎng)60天，使之長(zhǎng)出2 3 cm長(zhǎng)的生根鐵皮石斛苗；
(4) 將發(fā)芽苗移入MS+NAA0.05 0.1+酪蛋白40呢/L的發(fā)芽苗培養(yǎng)基上，在22 24。C、 1000 1500Lx條件下培養(yǎng)60 80天，使之生長(zhǎng)成5 8cm的健壯鐵皮石斛苗；
(5) 將鐵皮石斛苗培養(yǎng)瓶移出培養(yǎng)室，去掉瓶蓋，在常溫下煉苗3 5天，將培養(yǎng)苗用鑷子輕輕取出，洗凈培養(yǎng)基，移栽。
上述光照時(shí)間為每天12小時(shí)，平均每隔1小時(shí)間歇一次。上述種苗的組培繁育步驟(1) (4)為無(wú)菌式培育。
二. 仿野生栽培(1)栽培畦的制作
在海拔高度為450 1200米之間的平地上建設(shè)高度為3 5米的大棚，棚內(nèi)用兩層磚平鋪成具有間隔透氣孔的栽培畦平面基層，在該基層上平鋪栽培基質(zhì)， 該栽培基質(zhì)的下層是4 5 cm厚的(？0.8 1.2 cm的石灰石顆粒，上層是4 5 cm厚 的C0.5 0.8cm石灰石和1 2cm大小顆粒樹(shù)皮的混合體，所述混合體的比例為1: 1，畦寬1.2 1,5米，畦長(zhǎng)約20米，畦間行距為24cm;
(2) 栽培
按12x8 cm的行、株距將鐵皮石斛苗栽培到畦面上，每窩4 5株，用水澆
透；
(3) 管理
大棚內(nèi)溫度控制為0 28。C，濕度為60 70%，遮陰度達(dá)到70 80%，棚外 四周通風(fēng)良好，排水方便，每1 2月進(jìn)行一次病蟲(chóng)害防治，病害采用醫(yī)用青霉 素、鏈霉素防治，用藥濃度為1000ml水加40萬(wàn)單位一支，兩種藥交替使用， 蟲(chóng)害可用生物農(nóng)藥防治，每年春季可在栽培畦表面追施腐熟、粉碎后的有機(jī)肥 1.5 2.5kgZm2，追肥釆用葉面噴施多微磷酸二氫鉀或營(yíng)養(yǎng)液；
(4) 采收
人工栽培鐵皮石斛3 4年即可采收，采收時(shí)間為立冬至清明前植株未萌芽 前，用剪刀從鐵皮石斛基部將老植株剪下，留下嫩株。 本發(fā)明的技術(shù)特點(diǎn)在于
(1) 組培采取的是植株幼嫩莖桿作為外植體培養(yǎng)，其性狀穩(wěn)定，不易發(fā)生
分離；
(2) 采用10001x的光照強(qiáng)度，并采取間隙性光照時(shí)間，葉片深綠，組培 苗生長(zhǎng)健壯，能提高移栽成活率；
(3) 采用從試管苗一次性移植到大田的方法，不但降低了工作量和生產(chǎn)成 本，而且一次性移栽成活率達(dá)到了90%以上；(4) 在栽培畦做法上采用磚體碼砌苗床法，成本低，易操作，畦底有間隔 通氣孔，既可將多余的水分排出，又可起到通氣、保濕的作用，田間利用率可
達(dá)到80%，每畝大棚可栽培20萬(wàn)株以上。
(5) 栽培基質(zhì)底部大石子利于通氣，上部的樹(shù)皮粒既保濕又通氣，腐爛過(guò) 程中還提供一定的養(yǎng)分，利于根系生長(zhǎng)，成活率也較高，能形成較好的產(chǎn)量。
本發(fā)明將鐵皮石斛自然年繁殖系數(shù)1 2倍擴(kuò)大到年繁殖數(shù)十倍，能為大規(guī) 模種植生產(chǎn)提供充足的種苗，并且解決了鐵皮石斛仿野生栽培問(wèn)題，通過(guò)作畦、 遮陰、遮雨、保濕、增加通氣等手段，滿(mǎn)足了野生所需的環(huán)境條件，使栽培能 夠達(dá)到規(guī)?；?。
具體實(shí)施例方式
下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說(shuō)明。 實(shí)施例
一、鐵皮石斛種苗的組培繁育
1、 誘導(dǎo)愈傷組織采用MS+BA4 5的培養(yǎng)基配方，將培養(yǎng)基配制后分裝 到培養(yǎng)瓶，在0.12MPa下滅菌30分鐘后，在超凈工作臺(tái)上將鐵皮石斛幼嫩莖桿 材料切成1.2 mm厚的切片,接種到培養(yǎng)基上,在22 24°C、 1000 1500Lx條件下培 養(yǎng)40 60天即可生長(zhǎng)出愈傷組織，進(jìn)而形成原球莖。
2、 原球莖增殖采用MS+BA2.0 4.0+NAA0.2 0.5增殖配方，滅菌后 將愈傷組織接種到原球莖增殖培養(yǎng)基上進(jìn)行增殖培養(yǎng)，在22 2《C、 1000 1500Lx條件下培養(yǎng)40 60天后可繼續(xù)轉(zhuǎn)接進(jìn)行增殖培養(yǎng)。
3、 原球莖生根發(fā)芽培養(yǎng)采用MS+BA0.2 0.5+NAA0.05 0.1原球莖生 根發(fā)芽配方，滅菌后將原球莖接種到發(fā)芽培養(yǎng)基上，在22 24。C、 1000 1500Lx 條件下培養(yǎng)60天后即可長(zhǎng)出2 3 cm長(zhǎng)的生根鐵皮石斛苗。4、 壯苗培養(yǎng)采用MS+NAA0.05 0.1+酪蛋白40 mg/L的固體或液體培 養(yǎng)基，將發(fā)芽苗移入固體培養(yǎng)基或?qū)⒁后w培養(yǎng)基灌入發(fā)芽苗培養(yǎng)瓶中，在22 24°C、 1000 1500Lx條件下培養(yǎng)60 80天，幼苗可成為5 8 cm的健壯鐵皮石 斛苗。壯苗培養(yǎng)環(huán)節(jié)有利于提高鐵皮石斛苗移栽成活率。
5、 煉苗移栽將鐵皮石斛苗培養(yǎng)瓶移出培養(yǎng)室，去掉瓶蓋，在常溫下煉苗 3 5天，將培養(yǎng)苗用鑷子輕輕取出，洗凈培養(yǎng)基即可移栽。
在整個(gè)種苗的組培繁育期間，光照時(shí)間為每天12小時(shí)，采用微電腦開(kāi)關(guān)自 動(dòng)控制，每次開(kāi)、關(guān)各1小時(shí)。 二、鐵皮石斛的仿野生栽培
1、 栽培畦的制作畦寬1.2 1.5米，畦長(zhǎng)20米左右，先將地整平，將機(jī)磚 順長(zhǎng)排列，間距12cm，然后再將磚塊橫向排列放在第一層磚上，全部放齊之后 形成一個(gè)平面，畦底每隔12cm有一個(gè)4xl2cm的通氣孔，通氣孔與四周及走道 相聯(lián)，然后將畦面四周升高超過(guò)畦面兩層平磚的高度，畦與畦之間行距為24cm， 即為走道。走道要預(yù)留間隙形成透氣孔。整個(gè)栽培畦制作要根據(jù)磚塊的長(zhǎng)度形 成有效的連接，而不至于倒塌，這樣制作的栽培畦既利于排水并保持畦內(nèi)溫度， 有利于根系通風(fēng)透氣，適宜于鐵皮石斛的生長(zhǎng)條件。
2、 栽培基質(zhì)在栽培畦表面先鋪一層4 cm厚的C1.2 cm的石灰石顆粒，再 鋪上一層4cm厚的C0.8cm石灰石和樹(shù)皮的混合顆粒，樹(shù)皮采用種植香菇，木耳 的廢樹(shù)皮，粉碎成l 2cm大小顆粒，石灰石和樹(shù)皮的的比例為1: 1，整平后即 可移栽。
3、 栽培按12x8 cm的行、株距將鐵皮石斛苗均勻地栽培到畦面上，深度 達(dá)到2—3cm，每窩栽培4 5株，每平方米栽培400株，全部栽培結(jié)束后用灑 水壺澆透水并沖洗掉植株上的樹(shù)屑。4、管理
人工栽培海拔高度在450 1200米之間，溫度控制在0 28。C范圍內(nèi)，棚內(nèi) 濕度控制在60 70%，遮陰度達(dá)到70 80%，棚內(nèi)高度達(dá)到3 5米，要求大棚 四周通風(fēng)良好，排水方便。
① 遮陰及防雨栽后在苗上方2 3米處蓋上遮陰度70%的遮陰網(wǎng)，遮陰度 50%的可蓋兩層，并將四周全部用遮陰網(wǎng)蓋好，防止陽(yáng)光直射。在遮陰網(wǎng)的上方 可蓋一層可移動(dòng)的塑料薄膜，在晴天可除去薄膜，下雨天可將薄膜蓋匕防止 雨水直接淋在栽培畦上。冬春季節(jié)可將薄膜放下壓實(shí)，以增加棚內(nèi)的溫度，可 提高鐵皮石斛生長(zhǎng)量。
② 噴水噴水要做到及時(shí)、適量，總的原則為夏季寧濕勿干，冬春季節(jié)寧 干勿濕，要保持苗床的濕度達(dá)到60 70%，過(guò)濕過(guò)干都不利于鐵皮石斛的生長(zhǎng)， 噴水最好用孔徑比較細(xì)小的灑水壺進(jìn)行。
③ 病蟲(chóng)害防治病害采用醫(yī)用青霉素、鏈霉素防治，每1 2月進(jìn)行一次， 用藥濃度為1000ml水加40萬(wàn)單位一支，兩種藥交替使用。蟲(chóng)害可用生物農(nóng)藥 防治，嚴(yán)禁使用毒性大，有殘留的農(nóng)藥防治病蟲(chóng)害。
④ 施肥每年春季可在栽培畦表面追施腐熟、粉碎后的有機(jī)肥3 5斤/平方 米，施后用水沖洗掉落在植株上的肥料，追肥可采用葉面噴施多微磷酸二氫鉀 或營(yíng)養(yǎng)液的方法。
⑤ 采收人工栽培3 4年即可采收，采收時(shí)間以立冬至清明前植株未萌芽 前收獲為佳，采收是用剪刀從基部將老植株剪下，留下嫩株繼續(xù)生長(zhǎng)，以便來(lái) 年繼續(xù)收獲。
權(quán)利要求
1.一種鐵皮石斛組培繁育及仿野生栽培方法，其特征在于按照下述步驟進(jìn)行(1)將鐵皮石斛幼嫩莖桿切片接種到MS+BA4～5的培養(yǎng)基上，在22～24℃、1000～1500Lx條件下培養(yǎng)40～60天，誘導(dǎo)愈傷組織生長(zhǎng)，形成原球莖；(2)將愈傷組織接種到滅菌后的MS+BA2.0～4.0+NAA0.2～0.5增殖培養(yǎng)基上，在22～24℃、1000～1500Lx條件下培養(yǎng)40～60天，使原球莖增殖生長(zhǎng)；(3)將原球莖接種到MS+BA0.2～0.5+NAA0.05～0.1發(fā)芽培養(yǎng)基上，在22～24℃、1000～1500Lx條件下培養(yǎng)60天，使之長(zhǎng)出2～3cm長(zhǎng)的生根鐵皮石斛苗；(4)將發(fā)芽苗移入MS+NAA0.05～0.1+酪蛋白40mg/L的發(fā)芽苗培養(yǎng)基上，在22～24℃、1000～1500Lx條件下培養(yǎng)60～80天，使之生長(zhǎng)成5～8cm的健壯鐵皮石斛苗；(5)將鐵皮石斛苗培養(yǎng)瓶移出培養(yǎng)室，去掉瓶蓋，在常溫下煉苗3～5天，將培養(yǎng)苗用鑷子輕輕取出，洗凈培養(yǎng)基，移栽；(6)栽培畦的制作在海拔高度為450～1200米之間的平地上建設(shè)高度為3～5米的大棚，棚內(nèi)用兩層磚平鋪成具有間隔透氣孔的栽培畦平而基層，在該基層上平鋪栽培基質(zhì)，該栽培基質(zhì)的下層是4～5cm厚的￠0.8～1.2cm的石灰石顆粒，上層是4～5cm厚的￠0.5～0.8cm石灰石和1～2cm大小顆粒樹(shù)皮的混合體，畦寬1.2～1.5米，畦長(zhǎng)約20米，畦間行距為24cm；(7)栽培按12×8cm的行、株距將鐵皮石斛苗栽培到畦面上，每窩4～5株，用水澆透；(8)管理大棚內(nèi)溫度控制為0～28℃，濕度為60～70％，遮陰度達(dá)到70～80％，棚外四周通風(fēng)良好，排水方便，每1～2月進(jìn)行一次病蟲(chóng)害防治，病害采用醫(yī)用青霉素、鏈霉素防治，用藥濃度為1000ml水加40萬(wàn)單位一支，兩種藥交替使用，蟲(chóng)害可用生物農(nóng)藥防治，每年春季可在栽培畦表面追施腐熟、粉碎后的有機(jī)肥1.5～2.5kg/m2，追肥采用葉面噴施多微磷酸二氫鉀或營(yíng)養(yǎng)液；(9)采收人工栽培鐵皮石斛3～4年即可采收，采收時(shí)間為立冬至清明前植株未萌芽前，用剪刀從鐵皮石斛基部將老植株剪下，留下嫩株。
2. 按照權(quán)利要求1所述的鐵皮石斛組培繁育及仿野生栽培方法，其特征在 于所述步驟(1) (4)中種苗的組培繁育的光照時(shí)間為每天12小時(shí)，平均 每隔1小時(shí)間歇一次。
3. 按照權(quán)利要求1所述的鐵皮石斛組培繁育及仿野生栽培方法，其特征在 于所述步驟(1) (4)中種苗的組培繁育為無(wú)菌式培育。
4. 按照權(quán)利要求1所述的鐵皮石斛組培繁育及仿野生栽培方法，其特征在 于所述步驟(6)中栽培畦上層石灰石和樹(shù)皮混合體的比例為1: 1。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種鐵皮石斛組培繁育及仿野生栽培方法，將鐵皮石斛幼嫩莖桿切片接種到培養(yǎng)基上，在22～24℃、1000～1500Lx條件下培養(yǎng)，先誘導(dǎo)愈傷組織生長(zhǎng)，形成原球莖，再使原球莖增殖生長(zhǎng)，繼而長(zhǎng)成5～8cm的健壯幼苗，然后移出培養(yǎng)室，在常溫下煉苗3～5天后移栽到平地大棚中。棚內(nèi)栽培畦的平面基層具有間隔透氣孔，上層是栽培基質(zhì)，幼苗按12×8cm的行、株距栽培，棚內(nèi)溫度為0～28℃，濕度60～70％，遮陰度70～80％，按時(shí)進(jìn)行病蟲(chóng)害防治和施肥，3～4年即可采收。本發(fā)明將鐵皮石斛自然年繁殖系數(shù)擴(kuò)大了近十倍，能為大規(guī)模種植提供充足種苗，并解決了仿野生栽培問(wèn)題，使栽培達(dá)到規(guī)?；?。
文檔編號(hào)A01H4/00GK101653096SQ200810150738
公開(kāi)日2010年2月24日 申請(qǐng)日期2008年8月20日 優(yōu)先權(quán)日2008年8月20日
發(fā)明者蔣武軒 申請(qǐng)人:漢中植物研究所;蔣武軒